膀胱癌組織中VEGF、Survivin和COX-2的表達與意義研究

（遼寧省營口市中心醫院病理科，遼寧 營口 115000）

膀胱癌指膀胱內細胞惡性過度生長，屬于泌尿系統常見疾病。該疾病發病屬于多步驟形成、多基因參與、多因素混合的過程，外在環境作用及異常基因型積累可造成惡性表型的出現。患者出現膀胱癌后，會出現腎功能損害、腰痛、尿痛、尿急、血尿等癥狀，對患者身體健康及生活質量造成嚴重影響。Survivin指腫瘤特異性凋亡，對惡性腫瘤中異常表達進行抑制，血管內皮生長因子可對新血管生長進行促進，提升血管通透性[1]。惡性腫瘤疾病中，血管內皮生長因子表達十分明顯，與預后、侵襲轉移等具有密切聯系，認為與腫瘤轉移灶生長中的血管及腫瘤自身有聯系[2]。通過對膀胱癌組織中血管內皮生長因子、癌組織存活蛋白、環氧化酶-2進行檢測，觀察血管內皮生長因子、癌組織存活蛋白、環氧化酶-2的意義與表達。

1 資料與方法

1.1 一般資料：時間為2017年1月至2018年1月，研究對象為以我院接收的膀胱癌患者，例數為60例，其中男40例，女20例，年齡35～82歲，平均年齡（57.54±2.34）歲；所有患者均通過病病理及手術證實，術前為實施化療，放療，取材手術標本后在液氮罐中進行保存。

1.2 方法：酶聯免疫吸附法檢測Survivin抗體，使用福州邁新生物技術開發公司的酶聯免疫吸附法試劑盒及VEGF抗體進行實驗，血管內皮生長因子、癌組織存活蛋白、環氧化酶-2嚴格按照酶聯免疫吸附法說明書操作步驟實施。使用Western方法對膀胱癌組織中血管內皮生長因子、癌組織存活蛋白、環氧化酶-2含量進行檢測，根據其說明書嚴格實施。使用 Gel-oc凝膠成像對Western blot條帶進行掃描，對條帶面積及單位吸光度值進行計算，各實驗點的總吸光度值與對照組進行比較，得出值。RT-PCR：對各組膀胱癌組織總RNA并定量進行提取，各組取相同RNA反轉錄后，實施PCR。將5μLPCR擴增的產物在2%的瓊脂糖凝膠上實施電泳。取出凝膠，對結果進行記錄。使用凝膠電泳軟件進行定量分析，β-actin條帶平均光密度比較目的基因，表示目的基因mRNA的相對表達量。

1.3 統計學方法：使用SPSS17.0軟件進行數據分析，使用t來進行計量資料的檢驗及比較，并用（）進行表示，使用χ2來進行計數資料的檢驗比較，并用率（%）來進行表示，（P＜0.05）表示差異十分顯著，存在統計學意義。

2 結果

2.1 COX-2、Sur-vivin檢測結果：酶聯免疫吸附法檢測顯示Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期膀胱癌組織的 COX-2、Sur-vivin具有明顯表達。對比Ⅰ期，Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期膀胱癌組織 COX-2、Sur-vivin陽性細胞百分率及光密度值明顯上升（P＜0.01），COX-2、Sur-vivin在Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期膀胱癌組織中表達明顯，Ⅳ期中最為明顯。蛋白質印跡法檢測COX-2、Sur-vivin結果比較免疫組（P＜0.05）。TR-PCR檢測大鼠腦組織COX-2、Sur-vivin的表達水平比較蛋白質（P＜0.05）。見表1。

2.2 VEGF檢查結果：Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期膀胱癌組織中VEGF表達明顯，Ⅳ期最明顯（P＜0.05）。RT-PCR檢測蛋白質與VEGFm RNA表達一致，在Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期膀胱癌組織中VEGF表達明顯，Ⅳ期中最為明顯（P＜0.05）。進行直線相關分析顯示，Sur-vivin、COX-2與VEGF的蛋白質印跡法OD值呈正相關（r=0.485，P=0.0034；r=0.478，P=0.0041）。

3 討 論

膀胱癌指出現于膀胱黏膜上的一種惡性腫瘤，臨床上較為常見屬于泌尿系統疾病。COX（環氧化酶）為合成前列腺素的限速酶，在體內包括COX-2、COX-1兩種亞型。資料顯示COX-2（環氧化酶-2）可能會促進癌腫的發生，主要出現于患者病理組織中，如炎癥、腫瘤等。腫瘤出現轉移、浸潤的必要條件為新生血管[3]。

表1 COX-2、Sur-vivin檢測結果對比（）

表1 COX-2、Sur-vivin檢測結果對比（）

注：#比較Ⅰ期，P＜0.05，比較Ⅱ、Ⅲ期，P＜0.05

腫瘤細胞分泌的VEGF為對血管內皮細胞增殖造成刺激的重要因子之一，與其他實體瘤相同，膀胱癌組織中VEGF具有顯著表達，并且膀胱癌的轉移與發生與VEGF關系密切，可將其作為胱癌預后及轉移的重要指標[4]。Survivin為腫瘤特異性凋亡抑制蛋白，治療腫瘤可使用干擾其作用和抑制其表達的方式，分子靶向單獨治療與其他抗癌治療方式共同使用，在臨床上應用效果顯著。表現為可對腫瘤的生長及形成進行抑制[5]。并且在癌細胞株中轉染Survivin陰性突變質粒可對細胞凋亡進行誘導。Livin為IAP新成員，在大部分人類實體瘤組織、細胞中及人的胚胎組織中均有特異表達。在正常人組織中表達較低，說明Livin可能與腫瘤進展具有密切聯系[6]。這種腫瘤表達上的特異性使其變成最近臨床上腫瘤基因治療及診斷的新靶點。出現Survivin則說明腫瘤臨床分期高，組織分化不良[7]。本次研究檢測不同臨床分期的膀胱癌患者癌組織，均顯示有COX-2、Sur-vivin的表達，隨著患者病情加重，COX-2、Sur-vivin表達呈逐漸上升趨勢，其中Ⅳ期表達最為明顯[8]。膀胱癌組織中COX-2、Sur-vivin強度與膀胱癌臨床分期之間的關系呈正相關。膀胱癌預后越差，臨床分期越遲，COX-2、Sur-vivin表達強度越強[9]。更加證實COX-2、Sur-vivin對患者膀胱癌發病機制進行參與。本次研究顯示，Ⅳ期中COX-2、Sur-vivin陽性率比較無遠處轉移患者，明顯較高。說明COX-2、Sur-vivin對膀胱癌疾病的演進進行參與，COX-2（環氧化酶-2）、Survivin（癌組織存活蛋白）基因的過度表達可能與膀胱癌分子異常事件有關，可將Sur-vivin、COX-2作為膀胱癌預后及生物學行為判斷的標準之一，VEGF可促進患者心血管生長，并提升患者血管通透性，惡性腫瘤疾病中，血管內皮生長因子表達十分明顯，其與預后、侵襲轉移等在一定程度上具有聯系，認為與腫瘤轉移灶生長中的血管及腫瘤自身有聯系[10]。本次研究中，檢測參與研究的膀胱癌患者膀胱癌組織，結果均顯示有VEGF表達，患者病情越嚴重，其VEGF活性越高，最為明顯的為Ⅳ期膀胱癌組織，更加證明膀胱癌發病機制中有VEGF的參與，并且VEGF隨著患者病情的加重而逐漸上升[11-12]。與COX-2、Sur-vivin與膀胱癌演進具有一致性，并且VEGF與COX-2（環氧化酶-2）、Survivin（癌組織存活蛋白）表達呈正相關性，因此，認為膀胱癌發病機制中，VEGF表達與COX-2、Sur-vivin表達具有協同作用[13]。

綜上所述，在膀胱癌臨床病情進展中，VEGF與COX-2、Sur-vivin呈平行性，即VEGF表達與COX-2、Sur-vivin表達的高低能夠在一定程度上對患者病情變化進行反應。當前關于VEGF對癌癥的參與研究較多，對COX-2、Sur-vivin的研究剛剛開始，眾多問題還沒有進行清楚說明，隨著研究的加深，VEGF與COX-2、Sur-vivin可稱為膀胱癌基因治療及診斷的新靶點。