諾麗花葉病及其病原鑒定①

余乃通 楊 焱 蔡志英 劉志昕

(1 中國熱帶農業科學院熱帶生物技術研究所 海南海口571101;2 云南省熱帶作物科學研究所 云南景洪666100)

諾麗（Morinda citrifoliaLinn.）為茜草科（Rubiales） 巴戟天屬（Morinda） 的熱帶植物。諾麗具有耐旱和耐鹽特征，適應性較強，目前主要在中國海南、臺灣和云南西雙版納等地種植［1-2］。諾麗富含多種營養成分和礦物質，有較高的經濟和藥用價值［3］。2010 年諾麗被中國衛生部批準為新資源食品。

1 諾麗花葉病發病特征

2015 年，云南省西雙版納市諾麗種植區爆發疑似病毒感染病害，染病諾麗葉片呈現不規則的淡綠色和深綠色相間的斑塊（圖1-A），花無明顯癥狀，但果實逐漸變小（圖1-B）；諾麗植株表現為典型的花葉癥狀，后期生長受阻、變矮（圖1-C）。近年來，該病害給西雙版納諾麗種植戶造成巨大的經濟損失。為了明確該諾麗病害具體的病原及其特征，云南省熱帶作物科學研究所諾麗研究組與中國熱帶農業科學院熱帶生物技術研究所分子病毒學研究組科研人員開展合作，揭示引起該諾麗病害的病原是一種新的植物病毒。

2 諾麗花葉病病原鑒定

研究組首先對植物樣品進行研磨、離心，然后對病毒粒子進行負染，通過透射電鏡觀察到線性的病毒粒子，病毒粒子長（800±20）nm，寬（20±1）nm，與馬鈴薯Y病毒屬病毒的粒子形態相似。通過轉錄組高通量測序、反轉錄PCR（RT-PCR）和5’Race相結合的方法獲得了該病毒的全基因組，結果表明該病毒全基因組大小為9 659 nt（GenBank 登錄號MN158696），是一種RNA病毒，具有典型的馬鈴薯Y病毒屬病毒的結構特征。利用病毒多聚蛋白進行系統進化樹分析，結果顯示該病毒與煙草脈帶花葉病毒（To‐bacco vein banding mosaic virus，TVBMV）同源性最高，但是二者的氨基酸序列相似性僅為50.7%。以上結果表明，感染西雙版納諾麗植株的疑似病毒為一種新的馬鈴薯Y病毒屬病毒，建議命名為諾麗花葉病毒（Noni mosaic virus，NoMV）［4-5］。

為了調查由NoMV 引起的諾麗花葉病（Noni mosaic disease，NoMD）在西雙版納諾麗種植區的流行學情況，作者于2016 年的不同月份共收集67 份諾麗花葉病樣品和21 份無明顯癥狀諾麗樣品，提取RNA，設計NoMV 外殼蛋白（MP）基因引物 （NoMVcp-F： 5’-GGATCGTGCTGACTTACCTGAGC-3’；NoMVcp-R：5’-GGATATGGGCCTCTCGGGCTC-3’）對部分樣品進行RT-PCR 檢測。結果顯示，諾麗花葉病樣品均感染NoMV 病毒，而部分無明顯癥狀諾麗植株（28.57%）也感染了該病毒，表明該病毒在西雙版納引起較嚴重的諾麗花葉病病害。

在采樣過程中發現，諾麗植株葉片背面含有大量的蚜蟲和白粉虱（圖1-D）。收集染病葉片的蚜蟲和白粉虱各50 只，提取總RNA，RT-PCR 結果顯示，在蚜蟲體內檢測到了NoMV，而白粉虱體內未檢測到該病毒。另外，將攜帶有NoMV 的蚜蟲在健康諾麗植株上取食，在第4 天采用RT-PCR 技術即可檢測到NoMV，第9天諾麗植株表現為典型的花葉癥狀。

3 諾麗花葉病防控建議與措施

諾麗尚沒有抗NoMV 的相關品種和有效的抗病毒藥劑。目前，防治該病毒的方法主要以預防為主，綜合防控措施如下：（1）明確蚜蟲的季節性規律，播種時使用長效內吸性殺蟲藥，早治蚜蟲；（2）對諾麗種苗進行檢測，不定期隨機抽取諾麗樣品進行RT-PCR檢測，推薦使用上述的NoMVcp-F/R 引物；（3）移除染病植株，因為該病毒也可通過摩擦感染健康植株，所以一旦發現有明顯花葉病癥狀的植株，應該立即移除。

據悉，該諾麗花葉病已經蔓延到云南省的其它諾麗種植區以及云南鄰近的泰國等地區，有關部門和種植戶應引起重視并加強防范。