臨床前類風濕關節炎人群腸道菌群對造血和免疫系統影響的研究①

胡 丹 羅玉斌 趙 毅 劉 毅 (西南醫科大學附屬醫院風濕免疫科，瀘州 646000)

類風濕關節炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種慢性系統性自身免疫性疾病，全球發病率為0.5%～1%[1]，目前發病機制尚不十分明確。許多研究學者認為主要與針對自身細胞結構的自身抗體生成相關，且這些抗體可在未出現關節炎臨床癥狀之前數年出現于患者血液中，提示觸發類風濕關節炎自身免疫的首發部位可能存在于關節外的其他黏膜部位，比如胃腸道或呼吸道[2]。歐洲抗風濕病聯盟2012年提出將RA相關遺傳風險因素階段、RA相關環境因素階段、RA相關系統性自身免疫階段、無臨床關節炎癥狀階段總稱為RA臨床前期，即Pre-RA[3]。有研究表明Pre-RA在無自身免疫性組織損傷情況下已存在免疫反應異常，如自身抗體(抗CCP抗體)水平異常，在遺傳和環境因素相互作用下啟動自身免疫反應，最終導致組織炎癥和損傷[4,5]。近年抗CCP抗體在黏膜免疫中的作用也受到人們的廣泛關注。有研究表明RA的始動源于機體黏膜系統，可在患者唾液中檢測到IgA型抗CCP抗體，表明口腔黏膜可能發生了局限性的抗環瓜氨酸肽反應(ACPA)[6,7]。故本實驗擬探究抗CCP抗體增加的人群其腸道菌群是否會影響腸道黏膜屏障和免疫系統。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1試劑 FITC-conjugated dextran購于Sigma，SYTOTMBC Green Fluorescent Nucleic Acid Stain購于Thermo Fisher Scientific，PE anti-mouse IgA Antibody、Anti-Mouse CD19 APC、Ly6G:PerCP/cy5.5、BV421 Anti-Mouse CD127、PERCP-CY5.5 Anti-Mouse CD16/CD32、Anti-Mouse CD34 APC、PE CD117(ckit)mouse、Anti-Mouse Lineage FITC、PECY7 Anti-Mouse LY-6A/E(SCA-1)等抗體購于eBioscience公司。

1.1.2儀器 多功能熒光酶標儀購于BioTek公司，TCL-16高速離心機購于湘儀公司，流式分析分選儀購于BD公司，Leica病理圖像定量分析系統購于Leica。

1.1.3小鼠 6～8周齡DBA雌性小鼠，體重18～20 g，來源于四川大學華西臨床醫學動物實驗中心。……