下調(diào)miR-217抑制類風濕性關(guān)節(jié)炎患者外周血單個核細胞炎癥反應的實驗研究

郭淑芳 姜婷婷 (延安大學醫(yī)學院，延安 716000)

類風濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA) 是一種臨床常見的自身免疫性疾病，主要特征為關(guān)節(jié)慢性滑膜炎癥[1]。RA患者在發(fā)病后兩年內(nèi)即可出現(xiàn)不可逆的關(guān)節(jié)損害，嚴重影響患者的生活質(zhì)量[2]。單核/巨噬細胞是RA滑膜組織以及關(guān)節(jié)液中數(shù)量最多的免疫細胞，通過分泌活性因子、抗原提呈等調(diào)節(jié)免疫功能[3]。單核/巨噬細胞過度活化導致滑膜慢性炎癥，其還能分泌TNF-α、IL-1β、IL-6等炎癥因子，加劇炎癥反應，促進RA患者病情的惡化[4]。微小RNA(microRNA，miRNA)是一類內(nèi)源性的非編碼小分子單鏈RNA，長度為18～25個核苷酸，在炎癥反應、固有免疫以及腫瘤發(fā)生和發(fā)展等生物學過程中起重要的調(diào)節(jié)作用[5-7]。研究顯示，miR-217在乙醇誘導的肝細胞中表達上調(diào)，下調(diào)miR-217表達可抑制乙醇誘導的肝臟炎癥[8]。miR-217在高糖誘導的大鼠腎小球系膜細胞(RMC)中表達上調(diào)，miR-217基因沉默可抑制高糖培養(yǎng)的大鼠RMC細胞炎癥反應和纖維化[9]。目前，miR-217對RA患者PBMC細胞炎癥反應的影響還未見報道。本研究分離培養(yǎng)RA患者外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMC)，采用脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)誘導PBMC細胞產(chǎn)生炎癥反應，探討miR-217對RA患者PBMC細胞炎癥反應影響及其作用機制，為RA的臨床治療提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料 人AB血清購自上海素爾生物科技有限公司；DMEM培養(yǎng)基購自美國Gibco公司；TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10試劑盒購自南京建成生物工程研究所；Trizol試劑和反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自美國Invitrogen公司；PCR試劑盒購自TaKaRa公司；引物序列由上海生物工程公司設計提供；RIPA蛋白裂解液和BCA蛋白測定試劑盒購自碧云天公司；轉(zhuǎn)染相關(guān)miR-217陰性對照、miR-217 mimics等均購自Ambion公司；……