CD3E蛋白真核表達(dá)及全人源CD3單克隆抗體的制備①

楊 希 郎巧利 黃 楠 余 琳 吳 夢 葛良鵬

(重慶市畜牧科學(xué)院，重慶市醫(yī)用動(dòng)物資源的開發(fā)與利用工程技術(shù)研究中心,重慶 402460)

T淋巴細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的重要組成成分，具有直接殺傷靶細(xì)胞的功能，能對(duì)特異性抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)并分泌細(xì)胞因子[1-4]。CD3是T淋巴細(xì)胞表面重要的標(biāo)志蛋白，能與T細(xì)胞表面受體(T-cell receptor,TCR)形成CD3/TCR復(fù)合物，從而介導(dǎo)T淋巴細(xì)胞識(shí)別抗原和信號(hào)[5]。在CD3/TCR復(fù)合物中，TCR的基因在表達(dá)過程中發(fā)生重排，其序列是多變的，而CD3蛋白是保守的，不是抗原特異性的[6]。CD3蛋白是參與細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)、分化、增殖及發(fā)揮效應(yīng)功能的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，CD3抗體能夠阻斷或激發(fā)T細(xì)胞活化。世界上第一個(gè)CD3抗體OKT3(ortho Kung T3,murine IgG2a)能與T淋巴細(xì)胞表面CD3蛋白結(jié)合從而阻斷T細(xì)胞活化，起到免疫抑制作用，在早期被用于治療腎移植中的同種異體排斥反應(yīng)[7,8]。然而鼠CD3抗體對(duì)人體是異源蛋白，應(yīng)用于人體時(shí)可引起人抗鼠抗體反應(yīng)(HAMA)，可加快人體對(duì)鼠源抗體的清除從而阻斷抗體治療效果，也可誘導(dǎo)變態(tài)反應(yīng)發(fā)生危及生命，其毒副作用極大地限制了其臨床使用和推廣[9,10]。Kimball等[11]收集30例心臟、30例腎臟和30例肝臟移植受者270份血清，這些受者之前沒有接觸過小鼠OKT3，但接受小鼠OKT3誘導(dǎo)免疫抑制治療。研究發(fā)現(xiàn)幾乎所有血清中均具有較高滴度的人抗OKT3的IgG抗體。Chatenoud等[12]發(fā)現(xiàn)OKT3小鼠單克隆抗體在人體內(nèi)發(fā)生強(qiáng)烈的人抗小鼠抗體反應(yīng)，嚴(yán)重影響了OKT3治療效果。隨后，許多研究者將CD3鼠抗人源化處理，獲得了眾多的人源化CD3抗體，包括teplizumab (huOKT3γ1)[13-15],otelixizumab[16,17](aglycosylated rat YTH12.5)和visilizumab[18,19](HuM 291)。人源化改造極大程度地減少了HAMA反應(yīng)，增加了抗體的耐受性。……