黃芪多糖在人血γδT細胞體外抑制人肺癌A549細胞增殖作用的研究①

席雪琴 何愉勝 (重慶三峽醫(yī)藥高等專科學(xué)校附屬醫(yī)院,重慶 404000)

黃芪多糖(astragalus polysaccharide，APS)是黃芪的主要藥理成分之一，近年來對黃芪藥理成分及現(xiàn)代藥理、臨床療效等有較多的研究，發(fā)現(xiàn)黃芪多糖有利于腫瘤治療；γδT細胞主要分布于上皮組織和外周血；主要有兩個亞群：Vδ1及Vδ2，一些研究發(fā)現(xiàn)γδT細胞能對多種腫瘤細胞起到殺傷作用[1]。黃芪多糖對正常人γδT細胞具有免疫調(diào)節(jié)作用，能促進產(chǎn)生IFN-γ及TNF-α。但目前有關(guān)黃芪多糖聯(lián)合γδT細胞作用于腫瘤細胞的效應(yīng)如何未見報道，故本研究探討黃芪多糖在人外周血γδT細胞體外抑制人肺癌 A549細胞增殖作用的影響。

1 材料與方法

1.1材料 注射用APS購自天津賽諾制藥(批號180302)；人肺腺癌細胞株A549細胞來源于重慶醫(yī)科大學(xué)；MTS試劑盒購自Promega公司(CellTiter 96 AQueous Non-Radiotive Cell Proliferatim Assay,普洛麥格北京生物技術(shù)有限公司)；Ficoll淋巴細胞分離液購自北京鼎國生物技術(shù)公司；RPMI1640培養(yǎng)基購自美國Hyclone公司，添加100 U/ml 青霉素，100 μg/ml 鏈霉素、10 mmol/L Hepes購自美國Sigma公司；10%胎牛血清購自四季青公司；白細胞介素-12(IL-2)、干擾素-γ(IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)購自Peprotech公司；淋巴細胞分離液購自中國生科院；小鼠抗人TCRγδ-FITC(AB 1575111；No.331207)購自Biolegend公司；EpicsXL流式細胞儀購自美國Beckman Coulter公司。

1.2方法

1.2.1外周血單個核細胞(PBMC)的制備 取健康成人外周血40 ml，肝素抗凝。加入等體積的D-Hanks液混勻。取2只50 ml離心管，每只加入20 ml 淋巴細胞分離液，將與D-Hanks液混勻的外周血沿離心管管壁緩慢加入，在加入過程中保持分界面清晰，2 000 r/min離心20 min，小心吸取D-Hanks液與血清之間的白色層于10 ml離心管中，分別用5 ml PBS以1 500 r/min離心洗滌2次以及5 ml RPMI1640以1 500 r/min離心洗滌1次，每次10 min，即得外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)。……