UVRAG調(diào)控金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬及其細(xì)菌的胞內(nèi)存活①

楊 彬 王郅杰 么宏強(qiáng) 鄧天健 額爾敦木圖 (內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，呼和浩特 010018)

自噬可以保護(hù)細(xì)胞免受細(xì)胞內(nèi)病原體的侵襲，但是自噬也可以被病原體利用以利于其存活[3]。細(xì)胞內(nèi)感染SA后，SA能夠破壞自噬體并逃逸到宿主細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，并且抑制吞噬體與溶酶體的融合，此外，藥物誘導(dǎo)的自噬促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)SA的復(fù)制[4，5]。

研究發(fā)現(xiàn)紫外線抵抗相關(guān)基因(UV radiation resistance-associated gene,UVRAG)能夠與Beclin1等形成復(fù)合體從而促進(jìn)自噬[6]。A群鏈球菌在內(nèi)化、入侵宿主細(xì)胞過(guò)程中能夠通過(guò)某些分子(如NOD樣受體NLRX1)與Beclin1-UVRAG復(fù)合體相互作用，從而影響A群鏈球菌誘導(dǎo)的自噬及其侵入[7]。研究發(fā)現(xiàn)Bcl-xL通過(guò)與Beclin1-UVRAG相互作用抑制A群鏈球菌的內(nèi)化[8]。近期研究發(fā)現(xiàn)UVRAG被SMAD特異性E3泛素蛋白連接酶1(SMAD specific E3 ubiquitin protein ligase 1,SMURF1)泛素化能夠增強(qiáng)自噬的成熟[9]。國(guó)內(nèi)研究人員發(fā)現(xiàn)UVRAG與白血病的惡性進(jìn)展有關(guān)[10]。同時(shí)有研究顯示UVRAG參與了肝臟的脂肪變性[11]。可見(jiàn)，UVRAG的研究已成為一個(gè)熱點(diǎn)課題。然而，UVRAG能否調(diào)控SA誘導(dǎo)的自噬及其在胞內(nèi)的存活目前尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究通過(guò)SA刺激HeLa細(xì)胞建立體外感染模型，從細(xì)胞水平探討UVRAG對(duì)SA誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞自噬及胞內(nèi)菌存活的影響。

1 材料與方法

1.1材料 HeLa細(xì)胞由黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院張華教授惠贈(zèng)；金黃色葡萄球菌ATCC29213由黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院陳志寶教授惠贈(zèng)；pCI-neo質(zhì)粒由黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院周玉龍副教授惠贈(zèng)；pCI-neo-HA-hUVRAG質(zhì)粒、EGFP-LC3質(zhì)粒購(gòu)自Addgene公司；LipofectamineTM3000轉(zhuǎn)染試劑購(gòu)自Invitrogen公司；人UVRAG小干擾RNA由上海吉瑪公司合成；兔多克隆抗體LC3B購(gòu)自Novus公司；……