SMAC類似物Birinapant對大鼠肝臟缺血再灌注損傷的保護作用及機制研究①

高 宏 易竹君 李培志 朱稀雯 龔建平 陳 翔

(重慶市第四人民醫(yī)院肝膽外科，重慶 400014)

第二線粒體衍生的半胱天冬酶激活劑(second mitochondria derived activator of caspases,SMAC)是一種存在于線粒體內(nèi)調(diào)節(jié)細胞凋亡的蛋白質(zhì)，目前關(guān)于SMAC及SMAC類似物的研究主要集中在其促進腫瘤細胞凋亡的研究上[1-4]。Birinapant作為一種典型的SMAC類似物，能夠通過與cIAP1結(jié)合誘導(dǎo)cIAP1的降解進而促進細胞的凋亡[5,6]。許多cIAPs抑制劑被設(shè)計為與SMAC類似物有相同的作用，用于癌癥的治療[7-9]。然而，關(guān)于SMAC類似物在炎癥反應(yīng)中的研究還很少。

肝臟缺血/再灌注損傷(ischemia/reperfusion injury,I/RI)是實驗以及臨床肝移植術(shù)成功與否的重要因素。I/RI分為缺血期損傷和再灌注期損傷，就再灌注期損傷而言，內(nèi)毒素(lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)的庫普弗細胞(kupffer cells,KCs)過度激活是再灌注期I/RI的重要誘因之一。其機制與再灌注期LPS激活KCs絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信號通路有關(guān)[10,11]。而巨噬細胞內(nèi)LPS介導(dǎo)的MAPK信號通路的激活又與腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子3(tumor necrosis receptor related factor 3,TRAF3)的聚泛素化有關(guān)[12,13]。TRAF3 K48連接的TRAF3聚泛素化導(dǎo)致髓樣分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)復(fù)合物的蛋白降解和胞質(zhì)轉(zhuǎn)位，通過促進p-JNK和p-p38的表達激活MAPKs信號通路，誘導(dǎo)炎癥因子表達，如TNF-α、IL-1、IL-6以及IL-1β等[12,14]。

研究已經(jīng)證實SMAC類似物Birinapant可通過抑制cIAP1的表達抑制TRAF3的降解以及抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞內(nèi)MAPK信號通路激活，進而減輕LPS介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)[15]。那么，Birinapant預(yù)處理對大鼠肝臟缺血再灌注損傷的保護作用是否通過抑制KCs中TRAF3的降解來抑制再灌注期LPS介導(dǎo)的KCs MAPK信號通路激活，從而抑制炎癥因子釋放，進而抑制肝臟I/RI，目前尚無相關(guān)研究。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1試劑 TRAF3、cIAP1、p38、p-p38、JNK、p-JNK以及β-actin的主要抗體購自Abcam(Cambridge，MA,USA)。……