徐丹,邱雪杉,2
(中國醫科大學 1.附屬第一醫院病理科,沈陽 110001;2.基礎醫學院病理學教研室,沈陽 110122)
胃腸道間質瘤(gastrointestinal stromal tumor,GIST)是胃腸道最常見的間葉源性腫瘤[1],可發生C-KIT和血小板衍生生長因子受體α(platelet-derived growth factor receptors-α,PDGFR-α)基因突變[2]。大約10%~30%的GIST發生轉移,是具有惡性潛能的腫瘤[3]。準確判斷GIST生物學行為是治療的關鍵。迄今為止,尚沒有公認的生物學指標來判斷其生物學行為。
ETV4是多瘤促活化因子3(polyoma enhancer activator 3,PEA3)家族成員之一,在細胞的生長、侵襲以及轉移中發揮著重要的作用[4-5]。因此,本研究旨在探討ETV4轉錄因子在GIST的表達及其與臨床病理特征的關系,以及ETV4與C-KIT、PDGFR-α基因突變的關系。
收集2012年至2018年2月中國醫科大學附屬第一醫院病理科確診為GIST的石蠟標本,共91例為實驗組。同時隨機選取10例實驗組的癌旁正常胃腸道組織設為對照組。納入標準:病理及免疫組化確診,免疫組化項目包含Ki67;危險度分級明確;完整的臨床病歷資料;組織蠟塊材料充足。排除標準:病理或免疫組化無法確診;危險度分級不明確;不具有完整的臨床病歷資料;組織蠟塊材料較少。
兔抗人多克隆抗體ETV4(HPA005768)購自美國Sigma公司。兔SP檢測試劑盒(KIT-9710),PBS緩沖液以及DAB顯色液均購于福州邁新生物有限公司。
1.3.1 免疫組化:采用免疫組化SP法,測定ETV4在GIST組織中的表達情況。標本石蠟塊切片4 μm厚,在75 ℃恒溫箱中放置4 h,取出后自然冷卻。將切片脫蠟、水合,放置于高壓水浴鍋內的枸櫞酸鈉緩沖液中進行熱修復,滴加內源性過氧化物酶阻斷劑,37 ℃靜置30 min后,PBS緩沖液洗片3次,一次5 min,隨后滴加山羊血清封閉液,37 ℃靜置40 min后,滴加ETV4抗體(1 ∶200)切片在4 ℃過夜。……