CNQX拮抗斷尾誘發(fā)小鼠前扣帶回皮質(zhì)神經(jīng)元c-fos基因的表達(dá)

李娜然，商麗宏，楊宇，姚陽，吳敏范

（沈陽醫(yī)學(xué)院 1.機(jī)能與形態(tài)實驗中心；2.生理學(xué)教研室，沈陽 110034）

研究［1-2］表明，截肢手術(shù)后有50%～60%以上的患者伴有幻肢痛（phantom limb pain，PLP）。前扣帶回皮質(zhì)（anterior cingulate cortex，ACC）已被大量的研究［3-4］證明是痛覺的重要中樞，在疼痛感知、認(rèn)知和情緒等關(guān)鍵大腦功能中發(fā)揮重要作用。PLP患者ACC的腦血容量顯著增加，與疼痛強度密切相關(guān)［5］；截肢后大鼠ACC對外周刺激與中樞刺激的反應(yīng)增強［6］；神經(jīng)元的c-fos基因表達(dá)［7］、NK-1受體［8］、AMPA/Kainate受體［9］與痛覺有關(guān)。目前，PLP的發(fā)病機(jī)理尚不清楚。將小鼠尾末端截斷常用于PLP產(chǎn)生機(jī)制的研究［4］。研究［8］表明，NK-1受體參與斷尾引起小鼠ACC神經(jīng)元c-fos基因表達(dá)顯著增強的過程。但是，AMPA/Kainate受體是否參與此過程尚未見報道。因此，本研究采用免疫組化方法探討PLP的產(chǎn)生機(jī)理，為治療PLP提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗分組

沈陽醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供雌性成年昆明種小鼠36只，體質(zhì)量（27±6）g［動物生產(chǎn)許可證編號：SCXK（遼）2010-0001］。1%戊巴比妥鈉40 mg·kg-1體質(zhì)量腹腔麻醉小鼠，隨機(jī)均分為6組，每組6只：空白對照組（不做任何處理）；斷尾（尾末端2.5 cm用剪刀截斷）后0.5 h組；iv CNQX組（尾靜脈注射1%CNQX 1 mg·kg-1體質(zhì)量后10 min+斷尾后0.5 h）；iv NS組（尾靜脈注射同體積生理鹽水后10 min+斷尾后0.5 h）；ith CNQX組（蛛網(wǎng)膜下腔注射CNQX 10 μg·10 μL-1生理鹽水后10 min+斷尾后0.5 h）；ith NS組（蛛網(wǎng)膜下腔注射同體積生理鹽水后10 min+斷尾后0.5 h）。

1.2 ACC c-fos基因表達(dá)的檢測

斷尾后0.5 h，將上述各組小鼠斷頭，取腦，置于4 ℃ 4%多聚甲醛中過夜固定。連續(xù)冠狀面-20 ℃冰凍切片，厚度為15 μm，用免疫組化方法常規(guī)染片及洗片等，最后使用樹膠封片。使用顯微圖像分析儀（×400放大倍數(shù)）檢測切片ACCc-fos陽性細(xì)胞的積分光密度（integrated optical density，integrated OD）和面積百分比。……