檳榔堿對大鼠離體胸主動脈環張力的影響研究

陳一峰　曾婷　向振武　李好　胡磊　鮑美華

【摘要】目的?通過大鼠離體主動脈血管環來評價檳榔堿對大鼠血管環張力的影響，為檳榔產品的開發及其使用提供判斷依據。?方法?取大鼠胸主動脈血管環（內皮完整）分為4組，對照組，低劑量組（0.25mg/mL），中劑量組（0.5mg/mL），高劑量組（1mg/mL），對照組加入等體積的生理鹽水，分別觀察4組在靜息狀態，KCl以及NE刺激下預收縮血管環后血管環張力的變化。?結果?靜息狀態下，血管環張力無明顯變化;加入KCl和NE預收縮血管環后，低，中，高劑量組血管環較對照組明顯舒張（P<0.05），且檳榔堿能夠濃度依賴性地降低血管環張力。?結論?檳榔堿可濃度依賴性抑制KCl和NE引起地血管收縮。

【關鍵詞】檳榔堿?血管環張力?血管舒張

一、引言

檳榔是檳榔樹的果實，原產于印度、中國臺灣地區和南太平洋的眾多島國。全世界擁有數億人以各種形式消費檳榔，亞太地區尤為普通。近年來，對檳榔的研究已不僅局限于對于口腔疾病及相關腫瘤的了解，而是進一步轉向了解其對于人體內其他各主要系統及器官的危害，包括神經系統、心血管系統、內分泌系統、免疫系統、生殖系統和泌尿系統。檳榔常作為中藥成分，被用于利尿消積、防治寄生蟲、治療消化不良等方面。且咀嚼檳榔具有抗抑郁、抗疲勞、抗氧化、抗菌以及抗高血壓等藥理作用。而檳榔堿是檳榔中主要的生物堿類活性成分，也是主要的毒性成分。大量的臨床研究表明：檳榔堿具有抗血栓形成，抗動脈粥樣硬化，口腔和神經系統等功效，但檳榔堿對血管環張力影響方面的報道則較少。本實驗通過檢測血管環張力改變，評價檳榔堿對高鉀和去甲腎上腺素預收縮后大鼠離體胸主動脈的作用，探討其可能的作用機制，為檳榔堿和檳榔等相關產品方面提供新的線索。

二、材料

（一）動物及分組

本實驗采用8-10周齡的SPF級wistar大鼠，平均體重質量為（200±20）g。每次實驗取1只健康wistar大鼠的胸主動脈制備成血管環，分為對照組，低劑量組，中劑量組和高劑量組，每組4個血管環。實驗動物由購自長沙市天勤生物技術有限公司，實驗動物使用許可證號：SCXK（湘）2014-0011。

（二）試劑及配制

檳榔堿購于成都曼思特生物科技有限公司，用生理鹽水配置成50mg/ml的溶液，現配使用;重酒石酸去甲腎上腺素-水合物（NE），氯化鉀（KCl），乙酰膽堿（Ach）均由長沙醫學院機能實驗室提供;Krebs緩沖液由超純水溶解配制，其成分為：118mM?NaCl;4.7?mM?KCl;1.2mM?MgCl2;10mM?HEPES;11.1mM?葡萄糖和2mM?CaCl2。Krebs緩沖液配制完成后用3mol/L?NaOH調pH值至7.4，后續實驗所需試劑均由正常Krebs緩沖液稀釋至所需濃度。實驗過程中所述濃度均為浴槽內試劑的終濃度。

（三）儀器

5g張力換能器、RM6240生物機能實驗系統，HV1403離體組織器官恒溫灌流系統和超級恒溫水浴均由長沙醫學院機能實驗室提供。

三、方法

（一）大鼠胸主動脈血管環制備及內皮完整性檢測

將大鼠用2%戊巴比妥鈉麻醉后，腹主動脈采血處死，迅速開胸分離胸主動脈，置于4℃?Krebs緩沖液中，用大頭針固定血管環兩端，剝離干凈血管周圍的脂肪及結締組織，把動脈剪成長度約3mm的血管環。血管環一端用不銹鋼三角鉤垂直懸掛于浴槽中，另一端連接張力換能器，使用RM6240生物機能實驗系統記錄血管環的張力。每個浴槽內懸掛一條血管環并向浴槽內持續通入95%O2和5%CO2，緩慢調節血管環張力至2g，37℃下平衡1h，期間每20min換液1次。在浴槽中加入60mMKCl刺激，張力收縮幅度小于1g的血管環被認為活性差，不用于實驗。用1μMNE預收縮血管環，待收縮達到平臺期后加入10μM乙酰膽堿，若舒張幅度大于70%認為內皮完整。舒張率計算公式：舒張率=[（NE誘發最大收縮值）-加入藥物后的血管張力值/NE誘發最大收縮值]×100%。

（二）靜息狀態下4組血管環張力的觀察

待血管環張力穩定后，低劑量組，中劑量組和高劑量組加入配制好的檳榔堿溶液，使浴槽內藥物終濃度達到0.25mg/mL，0.5mg/

mL和1mg/mL;對照組加入等體積生理鹽水。觀察4組血管環張力的變化。

（三）KCl預收縮后4組血管環張力的觀察

待血管環張力穩定后，用60?mM?KCl預收縮血管環，使其收縮達到平臺期后，低劑量組，中劑量組和高劑量組加入配制好的檳榔堿溶液，使浴槽內藥物終濃度分別達到0.25mg/mL，0.5mg/mL和1mg/mL;對照組加入等體積生理鹽水。觀察4組血管環張力的變化。

（四）NE預收縮后4組血管環張力的觀察

待血管環張力穩定后，用1μM?NE預收縮血管環，使其收縮達到平臺期后，低劑量組，中劑量組和高劑量組加入配制好的檳榔堿溶液，使浴槽內藥物濃度達到0.25mg/mL，0.5mg/mL和1mg/mL;對照組加入等體積生理鹽水。觀察4組血管環張力的變化。

每次記錄每組4個血管環的張力值，最后結果取其平均值。

（五）統計學處理

數據采用SPSS?22.0軟件進行統計學分析。計量資料屬于正態分布的以（±s）表示，采用單因素方差分析，非正態分布的采用和檢驗秩和檢驗。

四、結果

（1）靜息狀態下4組血管環張力無明顯變化。

（2）KCl預收縮血管后4組血管環張力的變化見圖1。

圖1顯示檳榔堿對血管環的最大舒張率達17.5%

（3）NE預收縮血管后4組血管環張力的變化??見圖2。

圖2顯示檳榔堿對血管環的最大舒張率達46.3%

五、討論

為探討檳榔堿對血管環張力影響，本實驗采用大鼠離體胸主動脈血管環，給予不同組別血管收縮劑誘導血管收縮后，測量血管環張力，觀察檳榔堿對離體大鼠胸主動脈血管環張力的影響。

在靜息狀態下，檳榔堿對血管環的張力并無明顯改變，可見，檳榔堿對靜息狀態下的血管環張力無影響;在KCl刺激血管收縮后，低劑量組，中劑量組和高劑量組均可促進血管舒張，可見，舒張因KCl水平升高導致的收縮血管可能是檳榔堿發揮降壓作用的重要機制[4-5];在NE刺激血管收縮后，低劑量組，中劑量組和高劑量組均可促進血管舒張，可見，舒張因NE水平升高導致的收縮血管可能是檳榔堿發揮降壓作用的另一重要機制。

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基金項目：項目編號，長沙醫學院大學生研究性學習和創新性實驗計劃項目，長醫教[2018]77號-233。

作者簡介，陳一峰（1999-），男，湖南株洲人，長沙醫學院在校生;通訊作者：鮑美華，女，副教授，研究方向，藥學與生物信息。