NCF4基因rs4821544T/C多態性與炎癥性腸病關聯性meta分析*

吳鵬波,饒 倩,俞媛潔,柴 紅,張 國,郭一天,譚詩云

(1.武漢大學人民醫院消化內科,湖北武漢 430060；2.消化系疾病湖北省重點實驗室,湖北武漢 430060；3.廣西壯族自治區人民醫院消化內科，廣西南寧 530000)

炎癥性腸病是一種腸道非特異炎癥疾病,其發病主要與環境、遺傳、心理因素及腸道菌群失調等因素有關[1]。近年來國內外學者逐漸認識到基因多態性在炎癥性腸病發生、發展過程中發揮著重要作用[2]。有研究表明，過多的活性氧會導致氧化應激進而在炎癥性腸病中發揮重要作用[3]。嗜中性粒細胞胞漿因子4(NCF4)為還原型輔酶Ⅱ(NADPH)氧化酶系統的主要酶之一。國外不同地區學者對NCF4基因rs4821544T/C多態性與高加索人群炎癥性腸病風險關聯性進行了研究,但鮮見針對其他人群的研究。各地研究結果存在一定程度的分歧,為解決這些分歧,本文進行meta分析以全面評估高加索人群NCF4基因rs4821544T/C多態性與炎癥性腸病易感性之間關系。

1 資料與方法

1.1文獻納入、排除標準 納入標準：(1)病例均為經確診炎癥性腸病患者,其診斷符合相關診斷指南標準或臨床表現、影像學、病理檢查及內鏡聯合診斷[4-5]。(2)涉及NCF4基因rs4821544T/C多態性與炎癥性腸病風險研究。(3)所有病例對照研究均正式發表。(4)納入研究有足夠的信息提供統計指標比值比(OR)及95%CI。(5)研究對象限定為高加索人群。排除標準:(1)非病例對照研究。(2)無足夠的數據以計算OR值。(3)其他位點的研究。(4)相關綜述及評論。(5)其他人種研究。

1.2檢索策略 檢索PubMed、Web of Science、中國知網、萬方醫學網。檢索時間為建庫至2019年1月。英文檢索式為“NCF4 or rs4821544T/C or NADPH”and “mutation or variant or polymorphism or SNP” and“ Crohn′s disease or ulcerative colitis or inflammatory bowel disease or IBD”;中文檢索式為“NCF4 或rs4821544T/C”和“基因多態性或突變”和“潰瘍性結腸炎或克羅恩病或炎癥性腸病”。同時，手動檢索納入文獻的相關參考文獻，數據不完整時聯系作者獲取數據。所有納入研究的研究對象限高加索人群。

1.3數據提取 由2位評價者對檢索文獻進行獨立篩選，若存在分歧,則通過第3位評價者進行定論。2位評價者對原始文獻中記錄的數據進行獨立收集，提取以下所有研究信息:作者姓名、研究年份、省份、病例組與對照組樣本量、最小等位基因頻率(MAF)、對照組基因分布是否符合哈迪-溫伯格(HWE)平衡。

1.4質量評價 根據紐卡斯爾-渥太華量表(NOS)評估納入文獻的質量[6]。主要評估以下3方面：(1)納入的樣本來源；(2)病例組及對照組基線資料匹配情況，即組間可比性；(3)暴露和結果的確定性，即病例組診斷明確。總分9分，其中總分≥5分者判定為質量可靠。

1.5統計學處理 本研究采用Stata11.0軟件分析,采用χ2檢驗來檢驗各研究之間結果是否存在異質性；異質性檢結果采取Phet表示,若Phet<0.05則判定有異質性,而I2衡量異質性大小，若無異質性則采用固定效應模型計算總效應OR；反之則采用隨機效應模型。若研究間存在異質性則可根據納入研究的某些特征進行分層后再分析,最終確定異質性來源。按依次剔除單個研究后進行敏感性分析以判斷結果的穩定性。運用Egger′s檢驗來確定meta分析結果是否存在發表偏倚，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1文獻檢索結果 根據中英文檢索式初檢文獻40篇，經初步閱讀題目及摘要，剔除6篇與NCF4無關研究及15篇與炎癥性腸病無關研究。對初步符合要求的19篇論文，通讀全文進行第2次精細篩選，排除3篇綜述及7篇非病例對照研究。最終納入10項研究包含有15個病例對照研究[7-16]，見表1。

2.2納入研究基本特征 15個病例對照研究共納入22 317例對象，其中克羅恩病患者8 155例,潰瘍性結腸炎患者3 257例,健康對照10 905例。所有研究中對照組均遵守HWE平衡,納入的研究時間為2007-2018年。納入研究的基本特征見表1。

2.3納入研究質量評價 NOS評估納入文獻質量，每篇納入文獻研究均≥5分；平均NOS評分7分，提示納入文獻質量較高。見表1。

2.4Meta分析結果 NCF4基因rs4821544T/C多態性與炎癥性腸病易感性關系meta分析結果顯示,高加索人群克羅恩病與 rs4821544T/C多態性在4個基因模型存在相關性[CCvs.TT:OR(95%CI)=1.38(1.17～1.51),P=0.000;CC/TCvs.TT:OR(95%CI)=1.11(1.05～1.21),P=0.039；CCvs.TC/TT:OR(95%CI)=1.30(1.13～1.47),P=0.000)]。而在CCvs.TT模型中發現無明顯相關性[OR(95%CI)=1.12(0.97～1.18),P=0.055]。高加索人群潰瘍性結腸炎與rs4821544T/C多態性在以下所有基因模型無相關性[CCvs.TT:OR(95%CI)=1.11(0.90～1.36)，P=0.296；TCvs.TT:OR=1.04(0.94～1.14)，P=0.441；CC/TCvs.TT:OR(95%CI)=1.04(0.95～1.18)，P=0.381；CCvs.TC/TT:OR(95%CI)=1.06(0.90～1.24)，P=0.429]。見表2。

2.5發表偏倚分析 采用Egger回歸檢驗各個基因模型發表偏倚，結果顯示P值均大于0.05，表明無明顯發表偏倚。見表2。

2.6敏感性分析 依次剔除單個研究后進行敏感性分析以判斷結果的穩定性。分析提示，剔除單個研究后各模型分析結果未改變，表明meta分析結果穩定。

表1 高加索人群rs4821544T/C多態性與炎癥性腸病相關研究一般情況

表2 高加索人群rs4821544T/C多態性與炎癥性腸病相關性meta分析結果

3 討 論

本文meta分析納入22 317例對象，其中克羅恩病患者8 155例,潰瘍性結腸炎患者3 257例,健康對照10 905例。研究結果表明，高加索人群克羅恩病易感性與NCF4基因rs4821544T/C多態性有關,而潰瘍性結腸炎與該基因多態性無關，出現這樣結果的原因如下：二者基因易感性雖然呈現出一定交叉,但也存在一定的差異;研究樣本有限，導致檢驗效能降低；存在環境等混雜因素。

炎癥性腸病迄今為止發病機制尚未明了,目前，國內外學者一致認為腸道細菌感染是炎癥性腸病發病的重要機制[1]。基因NCF4可編碼NADPH氧化酶復合體的亞單位p40-phox。NCF4基因多態性影響血漿中NADPH氧化酶活性，NADPH活性改變通過影響活性氧(ROS)的產生起到殺死病菌的作用。最新一項研究表明，與炎癥性腸病極其類似的慢性肉芽腫性疾病患者NADPH復合體出現突變繼而血清ROS水平降低[17]。有研究發現，白細胞敲除編碼NADPH復合體的亞單位p40-phox基因NCF4后會導致其殺菌能力大大削弱[18]。最近研究發現，NCF4基因多態性可影響中性粒細胞產生氧自由基的能力,進而通過影響腸道細菌感染導致炎性腸疾病易感[19]。

Meta分析是一種解決多個相同或者類似的研究結果存在分歧的統計學方法，不僅可以提高統計結果檢驗效能，解決眾多類似研究結果不一致的問題，而且克服了各個研究樣本量小這一不足[19]。本文通過敏感性分析顯示，meta分析結果相對穩定；發表偏倚是影響meta分析結果可靠性的重要因素,本文運用Egger′s回歸檢驗發現分析中未存在明顯偏倚，提示結果可靠。而較高質量的納入文獻為本文研究提供了可靠的原始資料。綜上所述,meta分析結果具有科學性、穩定性和可靠性。然而本文存在一定的不足：(1)本文研究人群僅來自少數幾個白種人國家,人群樣本代表性欠佳，同時，也未將年齡、性別，甚至婚姻狀態等因素納入研究之中；(2)生活方式及社會心理環境是影響炎癥性腸病罹患風險的重要因素,而本研究納入各項病例對照研究未考慮這一因素。

4 結 論

高加索人群克羅恩病易感性與NCF4基因rs4821544T/C多態性有關,而潰瘍性結腸炎與該基因多態性無關。然而，高加索人群NCF4基因rs4821544T/C多態性與炎癥性腸病風險相關性需要更多高質量、大樣本量、考慮多因素的研究進一步論證。