低濃度苯及混苯對接觸工人血常規(guī)及淋巴細胞微核的影響

王秋艷 武志云 張巖 李冬梅 王樹軍 張盼 王浩 劉文禮

苯是一種用途較為廣泛的有機烴工業(yè)溶劑，也是主要的環(huán)境污染物之一，廣泛應(yīng)用于合成樹脂、醫(yī)藥、制鞋、染料和涂料等行業(yè)，是人類已知致癌物，可引起器官腫瘤，但苯并不能被相關(guān)無毒產(chǎn)品完全替代，國內(nèi)外苯的生產(chǎn)和銷售仍穩(wěn)步增長[1]。雖然隨著對苯毒性的深入研究和廣泛關(guān)注，工作場所的苯濃度得到了有效控制，但近年來研究發(fā)現(xiàn)，低于發(fā)達國家職業(yè)接觸限值的低水平苯接觸，仍可引起血液系統(tǒng)損傷[2]。我國目前職業(yè)病防治形勢十分嚴峻，職業(yè)病的發(fā)生不僅成為我國的重大公共衛(wèi)生問題還是嚴重的社會問題。接觸職業(yè)危害因素的人數(shù)、診斷為職業(yè)病的患者的累計數(shù)量、死亡數(shù)量以及新發(fā)職業(yè)病患者的數(shù)量，都居世界首位。近10年職業(yè)病發(fā)病情況呈明顯的凹型反彈傾向。據(jù)統(tǒng)計，我國每年由職業(yè)病所造成的經(jīng)濟損失高達百億元人民幣，苯中毒人數(shù)約占診斷職業(yè)中毒總數(shù)的三成[3]，苯對環(huán)境的污染以及對人健康的影響已成為亟待解決的公共安全和健康問題之一。目前，我國職業(yè)接觸苯和含苯溶劑的工人多達50萬以上，占各種工業(yè)毒物之首，為了解石家莊市低濃度苯及混苯作業(yè)工人的健康狀況，及時發(fā)現(xiàn)職業(yè)禁忌證和職業(yè)病，以期職業(yè)病的有效預(yù)防和早期發(fā)現(xiàn)早期治療，為低濃度苯及混苯作業(yè)工人采取更有效的衛(wèi)生防護措施提供參考，我們對石家莊市1 000名低濃度苯及混苯作業(yè)人員進行了職業(yè)健康檢查，對血常規(guī)結(jié)果進行了分析，197名低濃度苯及混苯作業(yè)工人檢查了外周血淋巴細胞微核率， 通過對結(jié)果的分析，探討低濃度苯及混苯長期作業(yè)對工人群體的健康效應(yīng)。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選擇選擇我市化工廠、機械加工廠低濃度苯及混苯作業(yè)工齡1年以上工人1 000人為職業(yè)健康檢查對象(以下簡稱接觸組1)，選擇不接觸職業(yè)有害因素的健康體檢人員200人為對照組1。我市化工廠、機械加工廠低濃度工齡1年以上苯及混苯作業(yè)工人197人為接觸組2，無職業(yè)危害人員46人為對照組2進行了外周血淋巴細胞微核率檢查。接觸組和對照組均排除了既往患有心血管疾病、神經(jīng)內(nèi)分泌疾病和遺傳性疾病等，根據(jù)國家標準GBZ/T160.42-2007，采用氣相色譜儀測定作業(yè)場所苯、甲苯、二甲苯等混苯濃度，測定結(jié)果顯示環(huán)境濃度低于職業(yè)接觸限值(3.25 mg/m3)，屬于低濃度接觸。4組性別比、平均年齡、平均工齡間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 接觸者和選擇對象表

1.2 調(diào)查方法

1.2.1 外周血檢測

1.2.1.1 采集靜脈血,用EDTA-K2抗凝，使用貝克曼COULTER AC.T 5diff AL全自動血細胞分析儀對苯及混苯作業(yè)工人進行外周血血常規(guī)檢測，項目包括白細胞計數(shù)(WBC)、中性粒細胞計數(shù)(NE)、紅細胞計數(shù)(RBC)、血紅蛋白(Hb)及血小板計數(shù)(PLT)。

1.2.1.2 評價標準:①依據(jù)《中華人民共和國國家職業(yè)衛(wèi)生標準》GBZ 188-2014，白細胞減少指白細胞總數(shù)<4.0×109/L或中性粒細胞<2.0×109/L；血小板減少指血小板總數(shù)<125(80)×109/L。②依據(jù)《中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準》WS/T 405-2012紅細胞減少標準為紅細胞總數(shù)男性<4.3×1012/L，女性<3.8×1012/L。③依據(jù)《中華人民共和國國家職業(yè)衛(wèi)生標準》WS/T 405-2012，血紅蛋白降低指血紅蛋白男性<130 g/L,女性<115 g/L。

1.2.2 外周血淋巴細胞微核率檢測

1.2.2.1 檢測方法：采用常規(guī)培養(yǎng)法。①標本要求：采集肝素鈉抗凝的靜脈血。②標本采集：空腹采集靜脈血3毫升，肝素鈉抗凝，充分混勻，待接種。③培養(yǎng)方法：常規(guī)培養(yǎng)法:培養(yǎng)、低滲、固定、制片：在無菌的條件下，每瓶PRMI1640培養(yǎng)液加入肝素鈉抗凝全血0.5 ml，充分混勻，培養(yǎng)箱中37℃恒溫培養(yǎng)68～72 h。終止培養(yǎng)后，取出離心管以1 800 r/min離心6 min，吸去上清液留大約1.5 ml，沿管壁緩緩加入37℃預(yù)溫的低滲液至6 ml，混勻細胞，只使細胞膨脹，避免胞質(zhì)破裂。然后進行預(yù)固定：在上述細胞懸液中加入新鮮配制的固定液(甲醇∶冰醋酸=3∶1)0.5～1 ml，混勻后離心，轉(zhuǎn)速為1 800 r/min 6 min后停止。吸取上清夜丟棄，留試管底部約0.5 ml內(nèi)容物。根據(jù)細胞的量加入固定液約6 ml進行第1次固定，靜置20 min(1 800 r/min離心6 min)，吸棄掉上清液。第2固定操作同第1次。第3次固定1 800 r/min離心6 min，棄清液保留試管底部細胞，加入適量固定液，制成適當(dāng)濃度的細胞懸液，滴片。④染色：吉姆薩染色30 min。⑤閱片：選擇細胞分布均勻染色良好的區(qū)域，油鏡觀察計數(shù)1 000個有完整包漿的淋巴細胞，計數(shù)微核數(shù)，以千分率(‰)表示[4,5]。

1.2.2.2 淋巴細胞微核的定義:微核是由細胞分裂后期滯后的染色體片段、一條或多條染色體組成的小體。

1.2.2.3 淋巴細胞微核的形態(tài)學(xué)基本特征：存在于完整的胞漿中，大小為主核直徑的1/16～1/3，形態(tài)為圓形或橢圓形，邊緣光滑，與主核有同樣結(jié)構(gòu)，嗜色性與主核一致或略淺，與非核物質(zhì)顆粒相反，微核不折光，與主核必須完全分離，如果是相切應(yīng)見到各自的核膜。

1.2.2.4 淋巴細胞微核的判斷標準[6,7]:①微核為主核直徑的1/16～1/3；②微核不折光，與染料顆粒等其他雜質(zhì)相區(qū)別；③微核與主核不相連；④微核與主核無重疊，若有相接，必須各自的邊緣能鑒別；⑤染色與主核深淺一致，偶爾比主核略深或略淺。

1.2.2.5 轉(zhuǎn)化淋巴細胞的識別:常規(guī)培養(yǎng)法是通過培養(yǎng)使淋巴細胞分裂，在分裂后期不能納入子核的染色體斷片和一條或多條染色體就會形成微核，而游離于細胞質(zhì)中，所以分析轉(zhuǎn)化的淋巴細胞。見表2。

1.2.2.6 淋巴細胞微核參考值:常規(guī)培養(yǎng)法：0～8‰。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表2 轉(zhuǎn)化淋巴細胞與未轉(zhuǎn)化淋巴細胞的鑒別要點

2 結(jié)果

2.1 外周血血常規(guī)檢查結(jié)果

2.1.1 外周血血常規(guī)檢查結(jié)果:與對照組1比較，接觸組1 WBC異常率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，RBC、Hb、PLT差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 外周血血常規(guī)檢查結(jié)果 例

注：與對照組比較，*P<0.05

2.1.2 WBC異常的年齡分組異常率:接觸組中<30歲人群WBC異常率高于對照組1，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

注：與對照組比較，*P<0.05

2.1.3 WBC減少影響因素分析:在白細胞減少的影響因素中，偶爾飲酒和偶爾吸煙的異常率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，白細胞減少的女性檢出率高于男性，白細胞減少異常率偶爾飲酒和偶爾吸煙低于其他飲酒組和吸煙組(P<0.05)。見表5。

表5 WBC減少影響因素分析 例

注：與男比較，*P<0.05；與不飲酒比較，#P<0.05；與偶爾飲酒比較，△P<0.05；與不吸煙比較，☆P<0.05；與偶爾吸煙比較，▲P<0.05

2.2 外周血淋巴細胞微核試驗各項指標分析 在作業(yè)環(huán)境中苯、甲苯、二甲苯的濃度低于國家標準的情況下，接觸組的微核率及微核陽性率明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表6、7。

表6 淋巴細胞微核率比較

表7 淋巴細胞微核陽性率比較

3 討論

隨著我國職業(yè)病防治體系建設(shè)的不斷完善，職業(yè)衛(wèi)生法律、法規(guī)、規(guī)范和標準也相繼出臺。自《中華人民共和國職業(yè)病防治法》和《職業(yè)健康監(jiān)護管理辦法》頒布并實施以來，衛(wèi)生部相繼制定并發(fā)布了500余項

國家職業(yè)衛(wèi)生標準，為職業(yè)病防治提供了技術(shù)支持，為職業(yè)病防治及監(jiān)督管理工作提供了法律依據(jù)。2014年5月14日，《職業(yè)健康監(jiān)護技術(shù)規(guī)范》GBZ188-2014出臺，進一步規(guī)范了苯作業(yè)人員的職業(yè)健康監(jiān)護工作，為苯作業(yè)勞動者的健康安全提供了法律保障?，F(xiàn)如今我國的職業(yè)病防治形勢已是十分嚴峻，職業(yè)病的發(fā)生不僅成為我國的重大公共衛(wèi)生問題還是嚴重的社會問題。接觸職業(yè)危害人數(shù)、職業(yè)病患者累計數(shù)量、死亡數(shù)量級新發(fā)患者數(shù)量，都居世界首位。近10年職業(yè)病發(fā)病情況呈明顯的凹型反彈傾向。據(jù)統(tǒng)計，在我國每年職業(yè)病造成的直接經(jīng)濟損失達高達百億元，其中苯中毒人數(shù)約占職業(yè)中毒的三成，苯對環(huán)境的污染及其對健康的影響已成為亟待解決的公共安全和健康問題之一。

苯是一種用途較為廣泛的有機烴工業(yè)溶劑，也是主要的環(huán)境污染物之一，廣泛應(yīng)用于合成樹脂、醫(yī)藥、制鞋、染料和涂料等行業(yè)，作業(yè)工人長期接觸高濃度苯,表現(xiàn)出神經(jīng)、血液、消化等系統(tǒng)的癥狀或體征,嚴重者甚至引起再生障礙性貧血或白血病。目前，高濃度苯作業(yè)與血常規(guī)研究方面所得結(jié)論基本一致，相比對照組，接觸組的白細胞、紅細胞和血小板降低[8]。隨著經(jīng)濟的發(fā)展，通過改進生產(chǎn)工藝，發(fā)展高新產(chǎn)業(yè)，多數(shù)大型企業(yè)工作地點的苯及苯系物的濃度降到了職業(yè)接觸限值以下，職業(yè)人群所接觸的主要方式是低濃度的苯及混苯，但接觸低濃度苯及混苯對血液系統(tǒng)的影響有不同的觀點，其遺傳毒性的機制迄今尚未完全闡明，細胞遺傳學(xué)效應(yīng)國內(nèi)報道不多，國內(nèi)用于檢測遺傳毒性效應(yīng)的項目主要是外周血淋巴細胞染色體畸變、淋巴細胞微核率檢測等。

苯對血液系統(tǒng)的影響早期指標主要是白細胞和血小板，紅細胞受損較晚。大多數(shù)血象改變與骨髓象不完全一致。大多數(shù)病例以白細胞減少出現(xiàn)為先，少數(shù)病例可先出現(xiàn)血小板減少。白細胞分類中可見中性粒細胞減少，淋巴細胞相對增多。隨著病情的加重，白細胞和血小板減少逐漸加劇，并出現(xiàn)輕度貧血。貧血一般為正常細胞或大細胞性，網(wǎng)織紅細胞可有輕度增多。重度中毒時全血細胞減少，網(wǎng)織紅細胞也明顯減低。

低濃度苯及混苯對血液系統(tǒng)的影響有不同的觀點。有文獻報道低濃度苯暴露對白細胞的異常改變具有一定的積累作用，對苯作業(yè)人員進行體檢發(fā)現(xiàn)[9],長期低劑量的苯及混苯接觸可導(dǎo)致外周血細胞計數(shù)減少，甚至可影響到造血干細胞的正常造血功能[10]。對低濃度苯暴露縱向資料發(fā)現(xiàn),低濃度苯暴露紅細胞計數(shù)仍在正常范圍，但白細胞計數(shù)下降，暴露2年可引起白細胞計數(shù)下降0.41單位[11]。低濃度苯暴露1年可引起紅細胞下降0.18單位，低濃度苯暴露2年紅細胞基本恢復(fù)正常水平。慢性苯中毒對人體的危害是不可逆的，目前尚無十分有效的治療手段，因此做好預(yù)防和檢測工作尤為重要，目前健康監(jiān)護和健康體檢最重要也最簡便的方法[12]是職業(yè)性苯接觸工人的血常規(guī)檢查。陳俐楓[13]報道，長期接觸苯系物對血液系統(tǒng)有明顯的損害，尤其以對白細胞的影響最為顯著，關(guān)于苯系物對血紅蛋白的影響未能表現(xiàn)出來的原因可能是由于紅系細胞對苯系物的耐受性要強于其他兩系。目前國內(nèi)多數(shù)文獻報道，長期低濃度苯作業(yè)可致白細胞下降，而對紅細胞、血紅蛋白和血小板的影響研究結(jié)果差異較大。苯接觸的危害性女性高于男性，危害程度與接觸時間正相關(guān)。本次調(diào)查環(huán)境中苯、甲苯、二甲苯的濃度均遠低于國家標準，作業(yè)工人混苯暴露時間均超過1年，血常規(guī)檢測白細胞減少顯著(P<0.05)，而紅細胞、血紅蛋白和血小板的差異不明顯，這與多數(shù)研究報道一致；低年齡組白細胞異常率較高可能與本組人群入職時間不長，職業(yè)防護意識不強有關(guān)。職業(yè)性苯中毒診斷標準GBZ-2008作出調(diào)整，苯作業(yè)觀察對象的血液檢查中紅細胞及血紅蛋白數(shù)異常不再作為觀測指標，也說明紅細胞及血紅蛋白受長期接觸混苯作業(yè)的影響不明顯，本次調(diào)查與此相符。

微核是細胞分裂后期滯后的染色體片段、一條或多條染色體組成的類似于細胞核的小體，其本質(zhì)是遺傳物質(zhì)DNA遭到損傷破壞后的結(jié)果。這些斷片或染色體在分裂過程中行動滯后，分裂末期不能進入主核，游離于主核之外。當(dāng)子細胞在進入下一個分裂間期時，它們在細胞質(zhì)內(nèi)濃縮，形成微核。在人類生活的環(huán)境中，各種理化因子都可能誘發(fā)微核，由于大量新的化合物的合成，原子能的應(yīng)用，各種工業(yè)廢物的排出等存在污染環(huán)境的可能性，不同的個體生活和工作的環(huán)境不同，生活習(xí)慣的差異，可能接觸到不同的環(huán)境誘變劑，影響到每個人的微核率，當(dāng)外界環(huán)境中存在一定濃度的致突變物時，會使含有微核的淋巴細胞增多。苯可以引起染色體畸變，淋巴細胞微核率增高或姐妹染色單體互換。長期接觸苯、甲苯等，淋巴細胞染色體出現(xiàn)數(shù)目異常及斷裂的頻率遠高于一般人群。陳繼躍[14]比較了苯及混苯的細胞遺傳學(xué)毒性，顯示苯有較大的致突變作用，與本結(jié)果一致，提示苯有細胞遺傳學(xué)效應(yīng)。本文中使用的細胞培養(yǎng)法是一種操作簡便，容易掌握和應(yīng)用，結(jié)果重復(fù)性好，適用于基層單位使用的方法。

長期接觸低濃度混苯對作業(yè)工人血液系統(tǒng)有一定不利影響，本次次調(diào)查中的苯、甲苯、二甲苯在作業(yè)環(huán)境的濃度均遠低于國家標準，仍可引起白細胞與中性粒細胞的下降，因此在嚴格執(zhí)行國家衛(wèi)生標準的同時，開展健康監(jiān)護工作，培訓(xùn)作業(yè)人員，提高工人對危害的

認識，加強自身防護意識，企業(yè)應(yīng)當(dāng)積極改進生產(chǎn)工藝，以無毒或者低毒的有機溶劑替代含苯溶劑[15-19]，從源頭減少苯系物的使用和接觸，以降低苯系物對苯作業(yè)工人的危害。

本論文了解低濃度苯及混苯對接觸工人血常規(guī)及淋巴細胞微核的影響,對接觸組作業(yè)場所進行空氣采樣，進行苯及混苯濃度檢測，以探討低濃度苯及混苯接觸對血常規(guī)及淋巴細胞微核的影響，從而指導(dǎo)企業(yè)對其生產(chǎn)環(huán)境中苯暴露水平控制，給作業(yè)工人勞動防護措施提供科學(xué)依據(jù)，更好的保護作業(yè)工人健康，做好對苯作業(yè)勞動者的健康監(jiān)護工作，進而為評價和修訂衛(wèi)生標準以及對相關(guān)職業(yè)危害因素的健康監(jiān)護措施提供參考，最終為勞動衛(wèi)生職業(yè)安全管理部門進行健康干預(yù)策略提供理論依據(jù)，此研究對保護勞動者健康及維護社會穩(wěn)定和經(jīng)濟健康發(fā)展具有積極而長遠的意義。