新生血管性青光眼患者血清及房水中Klotho和Endothelin-1的表達及意義

譚蔚 張朝軍 陳伯凡 胡杰

新生血管性青光眼(nonvascular glaucoma，NVG)是一種臨床上較為常見的繼發性青光眼疾病，該病可以隨著視網膜靜脈阻塞、視網膜缺血綜合征及糖尿病性視網膜病變等缺血性疾病的發病率逐年上升，而導致新生血管性青光眼的發病率也逐漸上升[1,2]。KLotho是一種新發現的蛋白質，推測其在衰老過程中具有重要作用；而血漿內皮素-1(Endothelin-1，ET-1)是一種作用于抑制血管內皮細胞生長的特殊因子[3,4]。根據上述觀點，本研究以重慶普瑞眼科醫院和重慶市江津區中心醫院經臨床診斷收治的92例新生血管性青光眼患者、81例原發性青光眼患者以及73白內障患者為研究對象，探討新生血管性青光眼患者血清及房水中Klotho和ET-1的表達及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將重慶普瑞眼科醫院和重慶市江津區中心醫院2015年3月至2018年11月經臨床診斷并收治的92例新生血管性青光眼患者納入新生血管性青光眼組，另選取同一時間就診的81例原發性青光眼患者和73例白內障患者分別納入原發性青光眼組和白內障組。3組之間性別比、年齡、體重指標、病史情況等一般資料差異無統計學意義(P>0.05)。研究對象均知情同意并簽署自愿參與本次研究相關文件。本研究經過醫院倫理委員會審批。見表1。

表1 3組一般資料比較

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準：①符合新生血管性青光眼診斷標準[5]的患者；②無精神疾病史、意識清晰且能夠良好溝通的患者。

1.2.2 排除標準：①長期服用或者使用糖皮質激素的患者；②有嚴重肝、腎功能不全或其他嚴重器質性疾病的患者；③存在免疫系統疾病或者內分泌系統疾病的患者。

1.3 指標測定方法[6，7]所有受試者保證清晨空腹，次日早晨約8∶00時抽取靜息狀態下肘靜脈3 ml血液，置于離心機中，4℃下2 000 r/min離心10 min(離心半徑為5.4 cm)，取上清液0.3～0.4 ml至無菌管內。所有受試者平躺于手術臺上，完成相應消毒、沖洗以及麻醉后，使用眼瞼撐開器撐開眼瞼的同時使用注射器從角膜緣進入前房，抽取0.15～0.20 ml房水后立即置入無菌管內。采用酶聯免疫吸附試驗對所有標本進行血清以及房水中的血漿ET-1和Klotho蛋白水平的檢測。

2 結果

2.1 3組患者血清及房水中Klotho和ET-1水平比較 新生血管性青光眼組患者血清及房水中Klotho水平明顯低于原發性青光眼組和白內障組，且原發性青光眼組明顯低于白內障組(P<0.05)；新生血管性青光眼組患者血清及房水中Endothelin-1水平明顯高于原發性青光眼組和白內障組，且原發性青光眼組明顯高于白內障組(P<0.05)。見表2。

組別Klotho(ng/ml)血清房水ET-1(pg/ml)血清房水新生血管性青光眼組(n=92)35.52±4.8950.48±2.641.45±0.071.58±0.08原發性青光眼組(n=81)49.03±10.96*56.37±10.22*1.17±0.09*1.16±0.34*白內障組(n=73)56.32±7.67*#65.07±12.33*#1.02±0.06*#0.98±0.06*# F值6.65310.25722.1234.101 P值0.0020.001<0.0010.043

注：與新生血管性青光眼組比較，*P<0.05；與原發性青光眼組比較，#P<0.05

2.2 3組患者血清及房水中其他臨床指標水平比較 新生血管性青光眼組患者血清及房水中VEGF、IL-6以及PEDF水平明顯高于原發性青光眼組和白內障組(P<0.05)，且原發性青光眼組明顯高于白內障組(P<0.05)。見表3。

2.3 血清及房水中Klotho和Endothelin-1水平與各項生化指標的相關性分析 在新生血管性青光眼組中，Klotho水平與年齡無相關性(P>0.05)，與VEGF、IL-6以及PEDF水平呈負相關(P<0.05)；Endothelin-1水平與年齡相關性無統計學意義(P>0.05)，與VEGF、IL-6以及PEDF水平呈正相關(P<0.05)。見表4。

3 討論

新生血管性青光眼疾病的病因以及發病機制等各方面都十分的復雜，且治療難度大，該病患者若無法得到及時有效的治療則會嚴重影響甚至損傷患者的視力功能[8]。該病是因為虹膜表面或者前房角生成新生血管，導致小梁網以及周邊的虹膜組織發生粘連，從而引起患者的眼球內部眼壓升高的疾病[9,10]。其主要的病因是纖維血管膜收縮牽拉，使房角關閉，引起眼壓升高和劇烈疼痛[11]。鑒于這種青光眼的起因是新生血管而不是眼內出血，Weiss等于1963年提出了新生血管性青光眼的名稱，該病嚴重影響了患者及其家屬的生活質量，給很多家庭帶來了各種各樣的問題，因此如何有效的治療和診斷新生血管性青光眼是臨床上需要迫切解決的問題之一[12,13]。

組別VEGF(μg/L)血清房水IL-6(ng/ml)血清房水PEDF(pg/ml)血清房水新生血管性青光眼組(n=92)504.3±41.21118.4±159.7292.4±22.7691.2±50.198.63±6.72302.62±53.34原發性青光眼組(n=81)341.6±21.6*359.1±21.1*103.5±13.2*167.3±2.0*74.93±5.36*257.11±46.19*白內障組(n=73)174.2±16.3*#184.8±17.2*#86.1±12.7*#92.2±9.6*#69.57±4.96*#228.64±42.17*# F值3.1713.38023.91237.1036.65352.180 P值0.0450.037<0.001<0.0010.002<0.001

注：與新生血管性青光眼組比較，*P<0.05；與原發性青光眼組比較，#P<0.05

表4 血清及房水中Klotho和Endothelin-1與生化指標相關性分析

本次試驗采用酶聯免疫吸附試驗對所有標本進行血清以及房水中的ET-1和Klotho蛋白水平的檢測。采用單因素方差分析比較，多重比較采用SNK-q檢驗。結果顯示新生血管性青光眼組患者血清及房水中Klotho水平明顯低于原發性青光眼組和白內障組，且原發性青光眼組明顯低于白內障組(P<0.05)；新生血管性青光眼組患者血清及房水中ET-1水平明顯高于原發性青光眼組和白內障組，且原發性青光眼組明顯高于白內障組(P<0.05)。其原因可能是因為結締組織的收縮是造成粘連性房角關閉的原因，而血漿ET-1可以特異性的直接作用于血管內皮細胞，顯著的抑制其的增殖和遷移[14,15]。

本次實驗結果顯示新生血管性青光眼組患者血清及房水中VEGF、IL-6以及PEDF水平明顯高于原發性青光眼組和白內障組(P<0.05)，且原發性青光眼組明顯高于白內障組(P<0.05)。有許多的研究發現Klotho因子的表達可以收到許多的因素所調節，同時其還參與了炎性反應、氧化應激反應甚至是病理性尿毒素的調控[16,17]。本次實驗采用相關性分析方法探討血清及房水中Klotho和血漿ET-1水平與各項生化指標的相關性。結果顯示在新生血管性青光眼組中，Klotho水平與年齡無相關性(P>0.05)，與VEGF、IL-6以及PEDF水平呈負相關(P<0.05)；Endothelin-1水平與年齡相關性無統計學意義(P>0.05)，與VEGF、IL-6以及PEDF水平呈正相關(P<0.05)。Klotho基因經研究發現其分布于神經以及心血管系統中，與內皮細胞、舒張血管細胞以及平滑肌細胞等細胞組合的生長密切關聯[18，19]。同時，Klotho因子的下調對氧化反應起著一定的作用，其可以導致過氧化氫濃度的降低，減少過氧化氫所誘導的細胞凋亡[20]。

綜上所述，新生血管性青光眼患者血清及房水中Klotho和ET-1均存在異常表達，且與VEGF、IL-6以及PEDF水平具有相關性，可以作為一種參考新生血管性青光眼疾病發生或者發展的生物指標。