偽士的寧對(duì)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞的增殖及細(xì)胞周期的影響

周曉榮 孟霜 馮振宇 史敏 趙建平

馬錢子又名番木鱉是馬錢子科植物馬錢(Strychnosnux-vomica.L)的干燥成熟種子，苦，溫；有大毒，歸肝、脾經(jīng)，能夠通絡(luò)止痛、散結(jié)消腫，用于跌打損傷、骨折腫痛、風(fēng)濕頑痹、麻木癱瘓、癰疽瘡毒、咽喉腫痛[1]。研究發(fā)現(xiàn)，馬錢子中的主要成分為生物堿類，其數(shù)量至少有20余種，其中士的寧和馬錢子堿是其主要成分，具有確切的抗腫瘤作用[2]。除馬錢子堿和士的寧外，還包括偽士的寧、伊卡金、異馬錢子堿、偽馬錢子堿、奴弗新和異士的寧等生物堿成分[3]。本課題通過前期實(shí)驗(yàn)提取分離出10種生物堿成分，并對(duì)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞進(jìn)行活性篩選，結(jié)果顯示偽士的寧對(duì)HT-29細(xì)胞增殖有顯著影響。本實(shí)驗(yàn)以偽士的寧為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，通過MTT法進(jìn)一步考察其對(duì)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞是否具有時(shí)間依賴和劑量依賴關(guān)系，并利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其對(duì)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞周期的影響，為后期研究其抗結(jié)腸癌機(jī)制提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑

偽士的寧(為本課題組前期提取分離純化后，經(jīng)質(zhì)譜、氫譜和碳譜等波譜技術(shù)鑒定，純度≥98%)；MC5A培養(yǎng)基(Gibco公司，批號(hào)為16600-082)；噻唑藍(lán)(美國 Sigma公司)；胎牛血清(Gibco公司，批號(hào)為10099-141)；胰蛋白酶(Gibo公司，批號(hào)為15050065)；青霉素-鏈霉素雙抗(Procell公司，批號(hào)為PB180120)；磷酸鹽緩沖液(Procell公司，批號(hào)為PB180327)；細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒(南京凱基生物，批號(hào)為KGA512)。

1.2 細(xì)胞株

人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞(武漢普諾賽生命科技有限公司，批號(hào)：CL-0118)

1.3 儀器

SW-CJ-1FD型超凈工作臺(tái)(蘇州集團(tuán)安泰空氣技術(shù)有限公司)；MCO-15AC型CO2恒溫培養(yǎng)箱(臺(tái)灣SANYO公司)；IX51型倒置顯微鏡(日本OLYMPUS公司)；5702R型低速離心機(jī)(德國Eppendorf公司)；……