對江浙地區高度近視眼人群進行MYOC基因突變的調查

章立新，洪 楠，葉 蓓，夏建華，沈 曄*

（1.衢州職業技術學院醫學院，浙江 衢州 324000；2.浙江大學醫學院附屬第一醫院， 浙江 杭州 310003）

目前,對高度近視(HM）與原發性開角型青光眼（POAG）的關聯性進行研究的困難較大。相關的調查研究表明，高度近視和原發性開角型青光眼常同時存在。高度近視人群發生原發性開角型青光眼的比例是非高度近視人群發生原發性開角型青光眼的7倍[1-2]。原發性開角型青光眼患者的近視率遠高于非原發性開角型青光眼人群的近視率[3]。本次研究主要是調查江浙地區高度近視眼人群 MYOC基因突變的情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年10月至2016年10月期間在浙江大學醫學院附屬第一醫院住院治療的74例浙江籍近視眼患者作為研究對象。本次研究對象的納入標準是：1）患者無青光眼疾病。2）患者無青光眼疾病家族史。將這74例患者分為高度近視眼組（n=41）和非高度近視眼組（n=33）。在高度近視眼組患者中，有男性患者20例，女性21患者例；其平均年齡為（56.87±8.12）歲；其近視度數均大于900度；其眼軸長度均大于27 mm。在非高度近視眼患者中，有男性患者16例，女性患者17例；其平均年齡為（60.13±6.05）歲；其近視度數均小于300度；其眼軸長度均小于25 mm。兩組患者的一般資料相比，P＞0.05，具有可比性。

1.2 方法

對這兩組患者均進行DNA提取、引物合成、PCR擴增及MYOC基因測序，方法是：采集研究對象5 ml的外周靜脈血作為血液標本。將此血液標本放入含抗凝劑的試管中，然后將其放到-20 ℃的冰箱中保存。在實驗室對血液標本進行DNA提取、引物合成及PCR擴增。然后，將血液標本送至北京信諾佰世醫學檢驗所，采用Sanger雙脫氧鏈終止法對血液標本進行MYOC基因的啟動子、外顯子和內含子測序。分別利用GenBank、dbSNP、ENCODE、ClinVar、ESP外顯子組數據庫和WWW.Myocilin.com等公共數據庫對本次研究的測序結果進行MYOC基因突變點及致病情況的分析。

1.3 觀察指標

比較兩組患者各項臨床指標及對兩組患者MYOC基因突變點及致病性進行檢測的結果。本研究中的臨床指標主要包括兩組患者等效球鏡度數、眼軸長度及眼內壓。

1.4 統計學方法

對本次研究中的數據均采用SPSS 19.0統計軟件進行處理，計量資料用均數±標準差（）表示，采用t檢驗，計數資料用百分比（%）表示，采用χ2檢驗。以P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者等效球鏡度數、眼軸長度及眼內壓的比較

高度近視組眼患者的等效球鏡度數低于非高度近視眼組患者，其眼軸長度大于非高度近視眼組患者，其眼內壓高于非高度近視眼組患者，P＜0.05。詳見表1。

表1 兩組患者等效球鏡度數、眼軸長度及眼內壓的比較(）

表1 兩組患者等效球鏡度數、眼軸長度及眼內壓的比較(）

組別 例數 等效球鏡度數(D)眼軸長度(mm) 眼內壓(mmHg)高度近視眼組 41 -16.36±6.01 28.59±4.19 16.19±3.47非高度近視眼組 33 -0.21±1.91 22.77±0.87 14.78±3.51 t值 27.51 14.59 2.96 P值 0.00 0.00 0.03

2.2 對兩組患者MYOC基因的突變點及致病性進行檢測的結果

對兩組患者MYOC基因的突變點及致病性進行檢測的結果顯示，高度近視眼組患者MYOC基因的致病性突變率高于非高度近視眼組患者，且其致病性突變發生在1號外顯子多于發生在3號外顯子。詳見表2。

表2 對兩組患者MYOC基因的突變點及致病性進行檢測的結果

3 討論

高度近視又被稱為病理性近視、進展性近視和變性性近視。高度近視人群眼底后極部發生變性改變的幾率較高且危害較大。青光眼是一組視網膜神經節細胞和神經纖維層發生進行性病理改變的眼部綜合征。青光眼患者可發生特征性視野缺損和視神經萎縮。青光眼患者若得不到及時有效的治療，可導致其視野全部喪失。青光眼是一種不可逆的致盲性眼病[4]。原發性開角型青光眼患者的前部視神經常發生進展性病變，且常伴有視盤凹陷、視神經萎縮及視野缺損等情況。部分原發性開角型青光眼患者的眼壓并不高，即使其處在嚴重青光眼性視神經結構功能損害的階段，其眼壓仍處于正常的范圍內[5]。在對合并有原發性開角型青光眼的高度近視眼患者的病情進行診斷時，常發生以下幾種情況，導致臨床醫師無法對其病情進行準確的早期診斷。1）患者的眼壓處于正常的范圍內。2）高度近視眼患者的視杯較大，也可發生視盤凹陷[6]。3）高度近視眼患者的近視弧較大，可導致其視網膜脈絡膜發生萎縮，使臨床醫師無法正確判斷其發生視盤蒼白及萎縮的原因。4）患者的鞏膜、脈絡膜組織在鼻側發生過度牽引，導致其顳側視網膜血管變直，進而使其血管發生移位[7]。5）原發性開角型青光眼及高度近視眼患者均會導致其近視程度加深，這使高度近視患者放松了對發生原發性開角型青光眼的警惕性，導致很多合并有原發性開角型青光眼的高度近視眼患者的病情未得到準確的早期診斷。近年來，臨床上對合并有原發性開角型青光眼的高度近視眼患者的病情進行診斷的技術有了進一步的提高[8-9]。但目前的診斷技術還無法準確地篩查出未來可能發展成原發性開角型青光眼的人群。因此，本次研究對江浙地區高度近視眼人群進行MYOC基因突變的調查，可從其基因分子水平上研究原發性開角型青光眼的致病基因位點，以便更好地認識該病的發病機制，提高我國早期診斷原發性開角型青光眼的準確性。截至目前，臨床上已經發現至少20個遺傳片段與原發性開角型青光眼有關，其中17個基因片段被人類基因組組織（www.genenames.org）命名委員會命名。在這些基因片段中，MYOC基因是最早被發現的原發性開角型青光眼的致病基因之一[10-11]。MYOC基因位于染色體1q24.3–q25.2上，具有3個外顯子，2個內含子和一個啟動子。近年來，關于原發性開角型青光眼的遺傳相關基因的研究較多，但仍存在很多問題：1）目前只發現與原發性開角型青光眼相關的基因，但這些相關的基因在導致患者發生原發性開角型青光眼的機制中尚無定論。2）不同地理區域、不同種族的人群存在遺傳背景差異。對此問題進行研究的有印度地區的Mukhopadh等[12]、日本地區的Ikezoe等[13]、摩洛哥地區的Melki等[14]、澳大利亞地區的Mackey等[15]、中國洛陽家系的王鳳云等[16]、中國徐州家系的孔琛柯等[17]、中國南方地區家系的魏雁濤等[18]學者。目前，對原發性開角型青光眼發生基因突變的研究僅局限在一部分區域，缺乏全面性及針對性，不能代表普遍現象[19]。中國江浙地區人群MYOC基因突變位點未見報道。考慮到人群的差異，可能還有部分的中國人群特異的基因位點有待發現[20]。本次研究的結果顯示，高度近視眼組患者的等效球鏡度數低于非高度近視眼組患者，其眼軸長度大于非高度近視眼組患者，其眼內壓高于非高度近視眼組患者，P＜0.05。對兩組患者MYOC基因突變點及致病性進行檢測的結果顯示，高度近視眼組患者MYOC基因的致病性突變率高于非高度近視眼組患者，且其致病性突變發生在1號外顯子多于發生在3號外顯子。這與周曉敏[21]的研究結果（高度近視眼患者存在200多個MYOC基因序列改變，其中約40%為致病性突變，約90%的致病性突變發生在3號外顯子）有所不同。

綜上所述，中國江浙地區高度近視眼人群MYOC基因的致病性突變率遠高于非高度近視眼人群，且其致病性突變發生在1號外顯子多于發生在3號外顯子。