流式細(xì)胞術(shù)在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用研究

李傳華

【摘要】 目的：探究流式細(xì)胞術(shù)在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用情況。方法：在嚴(yán)格落實(shí)相關(guān)要求的情況下開展多次實(shí)驗(yàn)，詳細(xì)記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，對(duì)流式細(xì)胞術(shù)在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果以及可行性進(jìn)行分析。結(jié)果：流式細(xì)胞術(shù)在HLA-B27抗原檢測(cè)、淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)、腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)、白血病免疫檢測(cè)、臨床微生物檢測(cè)等工作中，都具有很好的效果。結(jié)論：在臨床檢驗(yàn)的過程中，流式細(xì)胞術(shù)可以提升檢驗(yàn)效果，值得臨床推廣。

【關(guān)鍵詞】流式細(xì)胞術(shù);臨床檢驗(yàn);應(yīng)用效果

隨著醫(yī)療技術(shù)不斷發(fā)展，臨床檢驗(yàn)技術(shù)的應(yīng)用范圍也越來越廣。流式細(xì)胞術(shù)作為一種生物學(xué)技術(shù)，主要用于對(duì)流體中懸浮的小顆粒進(jìn)行數(shù)量統(tǒng)計(jì)與分類。在流式細(xì)胞儀的基礎(chǔ)上，流式細(xì)胞術(shù)是通過對(duì)血液中的單細(xì)胞以及其他生物粒子進(jìn)行熒光信號(hào)標(biāo)記，來展開細(xì)胞定量分析以及分選。本文針對(duì)流式細(xì)胞術(shù)在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用情況開展了相關(guān)研究，現(xiàn)報(bào)道如下：

1研究方法

在本研究中，對(duì)細(xì)胞定量分析是通過分選技術(shù)完成的，在此過程中應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞主要有MCF7、293（T）以及U2OS等。在U2OS細(xì)胞檢測(cè)過程中，檢測(cè)人員需要對(duì)待檢細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，進(jìn)行鋪板、轉(zhuǎn)染、細(xì)胞分版、上機(jī)樣本制備等操作，同時(shí)注入一定藥物予以充分刺激，使細(xì)胞獲得收益的同時(shí)進(jìn)行合理處理，并完成相關(guān)試劑的配置。在對(duì)目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)的過程中，將U2OS細(xì)胞作為細(xì)胞株以及材料。一瓶細(xì)胞的總數(shù)通常可達(dá)到1×109個(gè)，因此在鋪板過程中需要保障細(xì)胞的分化，展開對(duì)細(xì)胞的計(jì)數(shù)，如果細(xì)胞密度太大，為避免對(duì)計(jì)數(shù)產(chǎn)生不利影響，則需要應(yīng)用染色劑Lipofectamin2000進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作。染色過程中，首先要在DEF-FN載體上開展目的基因質(zhì)粒的構(gòu)建，在其細(xì)胞密度達(dá)到50%～60%時(shí)開展轉(zhuǎn)染操作，轉(zhuǎn)染時(shí)間控制在12～16 h。隨后，檢驗(yàn)人員需要根據(jù)細(xì)胞密度按照1：3的比例進(jìn)行細(xì)胞分版，保證分版后細(xì)胞密度在30%左右。除了以轉(zhuǎn)染質(zhì)粒作為陽性對(duì)照外，檢驗(yàn)人員還可以藥物處理細(xì)胞作為陽性對(duì)照。在細(xì)胞鋪板24 h后，再加藥進(jìn)行刺激，24 h之后，就可以進(jìn)行細(xì)胞收獲處理。在此過程中，檢驗(yàn)人員需要分別對(duì)培養(yǎng)液進(jìn)行收集，并在每個(gè)6 cm規(guī)格的版中加入1 ml胰酶促進(jìn)消化，在消化結(jié)束后，再向其中一一對(duì)應(yīng)地加入已收集的培養(yǎng)液來中和胰酶，放置4 h以上，再將細(xì)胞樣本從冰箱之中取出，開展離心操作，收集細(xì)胞。在1×PBS清洗2遍后，加入100 ?l 1×PBS混勻，再加入10 ?l PI（最終濃度100 ?g/ml），10 ?l Rnase（最終濃度50 ?g/ml），置于37℃的水浴鍋中，進(jìn)行30 min以上的避光處理，完成樣本制備。在處理分選細(xì)胞樣本之前，檢驗(yàn)人員需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行貼壁培養(yǎng)，每個(gè)細(xì)胞樣本至少需要1個(gè)10 cm規(guī)格的細(xì)胞板，在對(duì)培養(yǎng)液酶消化進(jìn)行去除后，在37℃的條件下，將其充分消化至細(xì)胞輕拍脫壁后，加入5 ml培養(yǎng)液中和，使細(xì)胞在此過程中充分進(jìn)行分散，取100 ?l細(xì)胞上機(jī)，測(cè)定轉(zhuǎn)染效率，剩余細(xì)胞計(jì)數(shù)、離心，測(cè)定轉(zhuǎn)染效率以及分選模式，調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度，達(dá)到上機(jī)速度1 000～3 000個(gè)/s。

2? ? 結(jié)果

本研究對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，將流式細(xì)胞術(shù)用于病毒檢驗(yàn)的主要優(yōu)勢(shì)以及可行性可以歸為以下幾個(gè)方面：（1）可在單個(gè)細(xì)胞中同時(shí)獲得多個(gè)分析參數(shù);（2）能夠定量檢出受染細(xì)胞，當(dāng)用不同熒光染料標(biāo)記不同的病毒抗原特異性抗體或者將特異性病毒抗體與不同大小的乳膠顆粒相聯(lián)時(shí)，F(xiàn)CM可同時(shí)檢測(cè)到同一樣本中的多種病毒或病毒抗原，因此在真菌、寄生蟲、病毒以及相關(guān)病原體混合感染的檢測(cè)過程中同樣可以發(fā)揮出良好的效果。

3? ? 討論

隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，檢驗(yàn)技術(shù)也取得一定進(jìn)步，流式細(xì)胞技術(shù)在臨床中的應(yīng)用也越來越廣泛。目前流式細(xì)胞術(shù)已經(jīng)在臨床多個(gè)領(lǐng)域中應(yīng)用，較為常見的領(lǐng)域有免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)等[1～2]。同時(shí)，流式細(xì)胞術(shù)在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中同樣具有重要作用。隨著對(duì)流式細(xì)胞術(shù)的不斷深入研究，其可為臨床微生物檢測(cè)提供較大幫助，因此受到臨床檢驗(yàn)人員的高度重視。流式細(xì)胞術(shù)可對(duì)受染細(xì)胞存在的病毒抗原進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)也適用于受染細(xì)胞個(gè)體表面的病毒抗原體檢測(cè)，通過多項(xiàng)參數(shù)的分析更好地保障檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

綜上所述，流式細(xì)胞術(shù)在臨床檢驗(yàn)中具有顯著效果，具有推廣應(yīng)用的價(jià)值。

參考文獻(xiàn)：

[[1]黃玉杰.流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的研究進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)療器械信息，2019，25（16）：17-18.

[2]張麗霞，劉江濤.流式細(xì)胞術(shù)在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用觀察[J].世界臨床醫(yī)學(xué)，2015，9（12）：103.