擠奶廳氣載大腸桿菌的分離鑒定及其REP-PCR指紋圖譜分型研究

鐘召兵，王寧，孫紅華，楊夫會(huì)

（1.山東省泰安市岱岳區(qū)行政審批服務(wù)局，泰安 271018；2.山東省泰安市岱岳區(qū)畜牧獸醫(yī)局，泰安 271018）

乳品營(yíng)養(yǎng)豐富，是優(yōu)質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)食品，同時(shí)也是微生物良好的培養(yǎng)基，在生產(chǎn)加工運(yùn)輸過(guò)程中極易被微生物污染[1]。大腸桿菌是乳品國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的菌群檢測(cè)項(xiàng)目的主要目標(biāo)物，且是食品級(jí)飲用水受糞源污染的重要微生物學(xué)指標(biāo)[2]。

擠奶廳的空氣質(zhì)量對(duì)原料乳的質(zhì)量有著重要的影響，因此從擠奶廳中分離大腸桿菌不僅可以為評(píng)估微生物污染提供有價(jià)值的信息，其基因分型還可以用于乳及乳產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程中污染源的追蹤[3]。近年來(lái)隨著分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，特別是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)的發(fā)展，出現(xiàn)了一系列的分子生物學(xué)分型方法[4]。在通過(guò)PCR擴(kuò)增細(xì)菌基因外的重復(fù)DNA片段獲得的菌株特異性遺傳圖譜中，其中重復(fù)DNA片段包含了一個(gè)高度保守的回文序列（repetitive extragenic palindromic elements, REP），以腸桿菌科基因重復(fù)序列為引物進(jìn)行PCR，能擴(kuò)增出多態(tài)性的DNA圖譜[5]。通過(guò)對(duì)指紋圖譜進(jìn)行綜合分析，獲得其相似指數(shù)，能準(zhǔn)確地反映菌株間DNA基因組的異同，能區(qū)別含有這些重復(fù)序列的不同菌種或菌株，因此具有很強(qiáng)的鑒別種乃至菌株的能力[6]。REP-PCR作為一種行之有效的分子分型技術(shù)，已經(jīng)被作為一種流行病學(xué)調(diào)查方法[7]。

本研究從28個(gè)生鮮乳收購(gòu)站的擠奶廳空氣中分離氣載大腸桿菌，通過(guò)菌株的REP-PCR指紋圖譜分析分離株的同源性，旨在為生鮮乳及乳制品生產(chǎn)源頭上控制大腸桿菌污染及追蹤污染源提供一種有效的技術(shù)方法。……