響應(yīng)曲面法優(yōu)化防己中漢防己甲素及漢防己乙素的提取工藝

胡筱希 朱榮 唐 新 黃大權(quán) 盧文杰 陸國(guó)壽

1.廣西中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022；2.廣西大海陽光藥業(yè)有限公司，廣西 南寧 530022

防己為防己科植物粉防己(Stephaniatetrandra S.Moore)的干燥根,具有祛風(fēng)止痛、利水消腫、用于風(fēng)濕痹痛、水腫腳氣、小便不利、濕疹瘡毒等[1]。防己中的漢防己甲素(又名粉防己堿)和漢防己乙素(又名防己諾林堿)為其主要的活性成分，兩者均為天然的雙芐基異喹啉類生物堿，漢防己甲素具有抗腫瘤、抗炎、抗心律失常、抗菌、降壓等作用[2]，以其為主要成分的中成藥“漢防己甲素”和“漢防己甲素注射液”廣泛用于臨床上對(duì)各期矽肺病的治療[3-4]。漢防己乙素具有抗肝缺血再灌注損傷、誘導(dǎo)人肺癌95D細(xì)胞凋亡等作用[5-6]。本實(shí)驗(yàn)擬采用單因素試驗(yàn)結(jié)合響應(yīng)曲面法優(yōu)化防己中的漢防己甲素及漢防己乙素的提取工藝，為防己中的活性成分研究及深度開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器 數(shù)顯恒溫水浴鍋HH-S2(金壇市醫(yī)療儀器廠)，JJ224BC電子天平(常熟雙杰)，Waters2695 高效液相色譜儀(日本 Waters 公司)，KS-3200DE超聲波清洗器(昆山潔力美)，LDZ4-0.8A離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)。

1.2 藥材與試劑 防己藥材由廣西大海陽光藥業(yè)有限公司提供；漢防己甲素HPLC≥98%(YM0311YBB，上海源葉生物)；漢防己乙素HPLC≥98%(RO1A6F2，上海源葉生物)；乙腈、甲醇、二乙胺為色譜純；乙醇為分析純；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 漢防己甲素和漢防己乙素測(cè)定方法

2.1.1 HPLC色譜條件 色譜柱C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-甲醇-0.1%二乙胺(30∶35∶35)；檢測(cè)波長(zhǎng)：282 nm；柱溫：25℃；理論塔板數(shù)：按漢防己甲素峰計(jì)算不低于5000；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL。如圖1所示。

2.1.2 溶液配制 ①對(duì)照貯備液：分別精密稱取12.5 mg漢防己甲素、漢防己乙素，用甲醇溶解，定容至25 mL量瓶中，搖勻，即得500 μg/mL的混合對(duì)照品溶液。……