2010-2019年海南省梅毒血清學(xué)試驗(yàn)室間質(zhì)量評價結(jié)果分析

張麗芬 鐘 娜 陳 琴 喬 鳳

海南省皮膚病醫(yī)院，海口，570206

梅毒是一種常見的性傳播疾病，梅毒的臨床表現(xiàn)復(fù)雜，病例的篩查、診斷、治療效果判定等依賴于血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果，因此梅毒實(shí)驗(yàn)室診斷的正確性顯得尤為重要[1]。2010年海南省性病中心實(shí)驗(yàn)室通過海南省衛(wèi)生和健康委員會及國家專家組考核驗(yàn)收，負(fù)責(zé)全省醫(yī)療機(jī)構(gòu)性病實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化建設(shè)及治療管理，根據(jù)《海南省性病實(shí)驗(yàn)室等級評定》的工作要求，對全省二級及以上的醫(yī)療機(jī)構(gòu)開展梅毒血清學(xué)試驗(yàn)室間質(zhì)量評價活動，現(xiàn)將2010-2019年10年間全省梅毒室間質(zhì)量評價結(jié)果整理分析，報道如下。

1 材料與方法

1.1 質(zhì)評對象 全省二級及以上的醫(yī)療機(jī)構(gòu)包括各市縣皮防所、疾控中心和開展性病診療業(yè)務(wù)的醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)。

1.2 質(zhì)控品 2010-2014年考核品由海南省性病中心實(shí)驗(yàn)室制備，血漿來源于血液中心,分別經(jīng)過乙型肝炎病毒抗體、丙型肝炎病毒抗體和HIV抗體檢測均為陰性,進(jìn)行非梅毒螺旋體抗原及梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn),選擇非梅毒螺旋體抗原及梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)均為陽性且滴度不同的血漿3份，陰性血漿2份，經(jīng) 56℃ 30 min滅活、離心、用0.2 μm細(xì)菌濾器抽濾除菌后，用冷凍管分裝編號并置于-70℃冰箱備用，每份質(zhì)控品隨機(jī)抽取10支進(jìn)行均勻性試驗(yàn)和穩(wěn)定性試驗(yàn)，其中梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)的均勻性和穩(wěn)定性試驗(yàn)分別采用梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(TP-ELISA)和免疫層析快速檢測(TP-RT)，非梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)采用甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)(TRUST)，上述試驗(yàn)結(jié)果均由兩位經(jīng)過培訓(xùn)實(shí)驗(yàn)人員分別判讀，試驗(yàn)合格后質(zhì)控品在冷藏運(yùn)輸條件下分發(fā)至全省各參評醫(yī)療機(jī)構(gòu)；2015-2019年考核品購自北京康徹思坦生物技術(shù)有限公司，同上也進(jìn)行了均勻性和穩(wěn)定性試驗(yàn)，試驗(yàn)合格后質(zhì)控品在冷藏運(yùn)輸條件下分發(fā)至全省各參評醫(yī)療機(jī)構(gòu)。每家單位質(zhì)控標(biāo)本5份，每份500 μL。隨質(zhì)控品發(fā)放的還有本次活動的通知及結(jié)果回報表。

1.3 質(zhì)評方法 各參評單位領(lǐng)取質(zhì)控品后，在規(guī)定檢測期內(nèi)分別按照日常使用的非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)和梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)檢測試劑進(jìn)行檢測，其中非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)需做定性和定量檢測，梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)只需做定性檢測。檢測完成后，按要求將檢測方法、試劑、結(jié)果等信息填寫到結(jié)果回報表中，上報至海南省性病中心實(shí)驗(yàn)室匯總分析，并將結(jié)果反饋至各參評單位，并給成績合格單位(非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)和梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)成績均≥80分)分發(fā)合格證書。

1.4 預(yù)期值確定 按照國家標(biāo)準(zhǔn)“臨床試驗(yàn)室室間質(zhì)量評價要求”，質(zhì)控樣品預(yù)期結(jié)果根據(jù)所有能參加能力驗(yàn)證的實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果確定。預(yù)期值根據(jù)全省80%以上參評單位的結(jié)果計算得出。

1.5 評分標(biāo)準(zhǔn) 梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)每份樣本與預(yù)期結(jié)果一致得20分，否則得0分，共100 分；非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)每份樣本定性和定量結(jié)果與預(yù)期結(jié)果一致各得10分，否則得0 分，共100 分；分別以特異性與非特異性試驗(yàn)得分的50%計入總評成績，90～100分為優(yōu)秀，80～89分為合格，<80分為不合格。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用Excel和R統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)匯總與統(tǒng)計分析。P<0.05為有顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 梅毒實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)評結(jié)果總體情況 見表1。2010-2019年全省參評醫(yī)療單位的合格率和時間進(jìn)行軼相關(guān)統(tǒng)計分析，軼相關(guān)系數(shù)為0.964，P<0.001，合格率隨時間增長呈升高趨勢。

2.2 不同類別機(jī)構(gòu)成績合格率 見表2。各機(jī)構(gòu)合格率均隨時間呈增長趨勢,不同機(jī)構(gòu)合格率之間做兩兩比對，婦幼機(jī)構(gòu)與中醫(yī)院、性病防治機(jī)構(gòu)與綜合醫(yī)院之間無統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=0.6192,P>0.05；χ2=2.0783,P>0.05),婦幼機(jī)構(gòu)與性病防治機(jī)構(gòu)、綜合醫(yī)院比較均有顯著性差異(χ2=30.776,P<0.001；χ2=19.563,P<0.001)；中醫(yī)院與性病防治機(jī)構(gòu)、綜合醫(yī)院比較均有顯著性差異(χ2=30.776,P<0.001；χ2=19.563,P<0.001)。

2.3 梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果符合率 見表3。2010-2019年梅毒血清學(xué)室間質(zhì)評結(jié)果總符合率隨時間呈遞增趨勢(軼相關(guān)系數(shù)為0.66，P<0.05)，非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)定性、定量試驗(yàn)和梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)之間進(jìn)行兩兩比對，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=80.876,P<0.05；χ2=7.8538,P<0.05；χ2=134.48,P<0.05)。

表1 梅毒實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)評結(jié)果總體情況

表2 2010-2019年不同類別機(jī)構(gòu)梅毒實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)評結(jié)果合格率 %

表3 2010-2019年梅毒血清學(xué)室間質(zhì)評的符合率 %

表4 各機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室開展梅毒血清學(xué)試驗(yàn)情況 %

表5 梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)方法使用情況 %

2.4 各機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室開展梅毒血清學(xué)試驗(yàn)情況 見表4。開展兩類梅毒血清學(xué)試驗(yàn)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)比例隨時間呈遞增趨勢(軼相關(guān)系數(shù)為0.833，P<0.05)，僅開展一類梅毒血清學(xué)試驗(yàn)醫(yī)療機(jī)構(gòu)比例隨時間呈遞減趨勢。

2.5 質(zhì)量考核試劑使用情況 參評單位非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)檢測試劑均為上海榮盛公司生產(chǎn)的TRUST試劑，而梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)檢測方法分別有TPPA、梅毒螺旋體血球凝聚試驗(yàn)(TPHA)、 TP-ELISA、化學(xué)發(fā)光法(TP-CLIA)、TP-RT等，各方法使用情況見表5。

3 討論

性病實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制對確保臨床正確診斷和治療非常重要，實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)量評價作為一種質(zhì)量控制工具，可以幫助分析實(shí)驗(yàn)室中存在的問題，使各級實(shí)驗(yàn)室檢測能力逐步提高，并保持在較高水平[2-4]。海南省從開展梅毒血清學(xué)試驗(yàn)室間質(zhì)量評價活動以來，參評單位數(shù)逐年增加，從2010年的46家到2019年的80家，這與室間評價越來越受到臨床實(shí)驗(yàn)室重視、性病防控部門定期培訓(xùn)、督導(dǎo)工作密不可分，提示海南省梅毒實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)建設(shè)和質(zhì)量控制工作得到了進(jìn)一步加強(qiáng)。

從10年室間質(zhì)量評價活動結(jié)果可看出，梅毒血清學(xué)檢測總體水平有了顯著提高，除2010年外，總體得分均大于85分，特別近兩年，總體得分大于95分，合格率從2010年45.65%上升到2019年92.50%，并呈逐年遞增趨勢，說明海南省自2010年海南省性病中心實(shí)驗(yàn)室成立后，在全省醫(yī)療機(jī)構(gòu)進(jìn)行性病實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化建設(shè)取得了一定成績。其中不同機(jī)構(gòu)類別中合格率也是逐年提高，但婦幼機(jī)構(gòu)、中醫(yī)院符合率比綜合醫(yī)療機(jī)構(gòu)和性病防治機(jī)構(gòu)低，提示海南省婦幼機(jī)構(gòu)、中醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室梅毒檢測能力仍有不足，加強(qiáng)婦幼機(jī)構(gòu)、中醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室能力建設(shè)十分必要。

從結(jié)果可看出，非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)定性、定量試驗(yàn)和梅毒螺旋體抗原血清學(xué)定性試驗(yàn)三項(xiàng)試驗(yàn)平均符合率為95.04%、89.20%、97.38%，均略高于2015年全國平均水平(94.7%、88.8%、96.5%)，特異性試驗(yàn)的符合率明顯高于非特異性試驗(yàn)，非特異性試驗(yàn)中定量檢測符合率最低，這一結(jié)果與國內(nèi)其他報道一致[5，6]，主要原因是非梅毒螺旋體血清學(xué)試驗(yàn)影響因素較多，如試驗(yàn)環(huán)境溫度、光線、加樣移液器的準(zhǔn)確度、反應(yīng)時間、凝集反應(yīng)判斷的主觀差異性等因素都會影響到試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。此外未使用正確的設(shè)

備水平旋轉(zhuǎn)儀進(jìn)行檢測也是結(jié)果不準(zhǔn)確的原因之一，在2019年室間質(zhì)量評價結(jié)果回報調(diào)查中發(fā)現(xiàn)將近有20%未使用合格的水平旋轉(zhuǎn)儀。非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)定量試驗(yàn)應(yīng)作為今后梅毒血清學(xué)檢測技術(shù)培訓(xùn)的重點(diǎn)，并在技術(shù)指導(dǎo)中，加強(qiáng)對設(shè)備維護(hù)校準(zhǔn)和實(shí)驗(yàn)人員崗前培訓(xùn)的重視。

梅毒血清學(xué)檢測用于臨床診療服務(wù)、血液篩查、流行病學(xué)監(jiān)測、高危人群篩查和干預(yù)等目的時都需要結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)和梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)的結(jié)果綜合判斷[7]。但通過質(zhì)評活動的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，2010年梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)和非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)的兩項(xiàng)都開展醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)僅為65.22%。其中有32.60%單位未開展梅毒螺旋體抗原血清學(xué)實(shí)驗(yàn)，集中在綜合醫(yī)院和婦幼保健院，無梅毒特異性抗原血清學(xué)試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室不能及時為臨床醫(yī)生提供梅毒確診檢測，影響了診斷的及時性，經(jīng)過10年的全省性病實(shí)驗(yàn)室督導(dǎo)、培訓(xùn)工作，2019年僅有1家婦幼保健院未開展非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)室檢測方法是反映實(shí)驗(yàn)室檢測能力和檢測質(zhì)量的重要指標(biāo)[8]。本文的調(diào)查結(jié)果顯示，梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)檢測方法梅毒螺旋體血清試驗(yàn)試劑10 年來的使用率最高為TPPA，這可能與海南省性病中心實(shí)驗(yàn)室一直積極推廣TPPA方法有關(guān)。其中將近50%婦幼機(jī)構(gòu)中使用快速檢測方法，雖然快速檢測法具有快速簡便等優(yōu)點(diǎn)，但Mishra等[9]報道梅毒快速診斷試驗(yàn)診斷梅毒的敏感性及特異性分別為70.8%和 97.8%，該方法對活動性梅毒診斷的敏感性并不高，從而出現(xiàn)假陰性結(jié)果，建議有條件的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選擇參加國家性病中心參比實(shí)驗(yàn)室組織的梅毒血清學(xué)診斷試劑臨床應(yīng)用評估且質(zhì)量好的試劑，保證檢測結(jié)果的可靠性和穩(wěn)定性。

總之,經(jīng)過海南省10年的質(zhì)控結(jié)果顯示，室間質(zhì)量評價對于促進(jìn)梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測質(zhì)量水平的提高起到了積極的作用。