急性蕁麻疹患者食物組過敏原特異性IgE定量檢測分析

張鳳杰 范夢嬌 劉文博 孫艷茹 王振華

1濰坊醫(yī)學院臨床學院，山東濰坊，261053；2濰坊市人民醫(yī)院皮膚科，山東濰坊，261041

蕁麻疹是一種過敏性皮膚病，有15%～25%的人在其一生中可發(fā)作1次或1次以上[1]，蕁麻疹的病因復雜，因此盡早明確過敏原是臨床大夫和病人的共同期望，但是過敏原檢測結(jié)果的準確性不高是經(jīng)常遇到的問題。研究采用sIgE定量檢測和OFC聯(lián)合分析，以期判斷sIgE定量檢測的準確性，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料 416例均為2018 年6月至2019年10月期間于濰坊市人民醫(yī)院就診的急性蕁麻疹(acute urticaria, AU)患者，其中男186例，女230例；年齡1歲～81 歲，平均年齡為(27.0±21.5)歲，中位數(shù)為24(6，46)歲。所有患者均診斷明確，病程少于6周，且排除壓力、寒冷、日光等物理因素和感染、藥物因素引起的蕁麻疹；排除有其他全身性系統(tǒng)性疾病(如甲狀腺疾病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡及惡性腫瘤等)者；排除妊娠及哺乳期婦女；所有患者在測試前2周內(nèi)未使用抗組胺藥、糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑。行OFC的排除標準：①患者1年內(nèi)發(fā)生過嚴重過敏反應(yīng)；②伴有病情不穩(wěn)定哮喘；③曾有過敏性休克。所有受試者均獲得知情同意。

1.2 檢測試劑 采用江蘇浩歐博(HOB)公司過敏原sIgE 抗體檢測試劑盒(ELISA酶聯(lián)免疫捕獲法)定量檢測sIgE，包括10項過敏原：花生、牛奶、雞蛋、鱈魚、大豆、小麥面粉、蝦、螃蟹、牛肉、羊肉。

1.3 檢測方法

1.3.1 血清sIgE抗體檢測 以分離膠促凝管采取患者外周血 5 mL，3 000 r/min離心15 min后留取上層血清備用。實驗步驟: 吸取50 μL血清標本、標準品及質(zhì)控置于相應(yīng)微孔中，室溫孵育60 min(25℃)，用洗板機清洗3次，每次300 μL清洗液。在患者血清樣本及質(zhì)控中加入100 μL相應(yīng)過敏原-生物素，在標準品中加入100 μL抗IgE抗體-生物素。封板，室溫孵育30 min，用洗板機清洗3次，每次300 μL清洗液。每孔加入100 μL辣根過氧化物酶-鏈霉親和素結(jié)合液，封板、室溫孵育30 min，用洗板機清洗3次后，每孔加入100 μL TMB底物液，封板、避光、室溫孵育30 min后加入100 μL終止液，5 min后用酶標儀在450 nm波長處讀數(shù)。

1.3.2 食物經(jīng)口負荷實驗[2]在部分sIgE檢測陽性且知情同意的患者中進行，患者病情處于穩(wěn)定狀態(tài)，即停藥2周，治療期間避免食用雞蛋、牛奶。要求受試者均為空腹狀態(tài)，由醫(yī)生為受試者統(tǒng)一提供水煮雞蛋和純牛奶，攝入劑量見表1。每次攝入時間不超過5 min，每次攝入完成后觀察30 min[3]。出現(xiàn)臨床癥狀或最后一次攝入完成后，觀察3 h，以明確實驗成敗。研究表明，sIgE陽性閾值在食物種類、患者年齡等因素下發(fā)生改變，具體參考數(shù)值見表2[4]。為避免發(fā)生嚴重過敏，我們僅對sIgE濃度為0.35～2.0 IU/mL的患者行OFC[5]，且所有受試者均在醫(yī)院由專業(yè)醫(yī)生指導進行實驗，實驗室備急救藥物及設(shè)施(腎上腺素、沙丁胺醇、抗組胺藥、吸氧設(shè)備等)。

表1 OFC雞蛋及牛奶攝入劑量

表2 sIgE陽性閾值在不同食物種類及不同年齡的參考數(shù)值

1.4 結(jié)果判讀 通過專用過敏原掃描分析軟件(HOB提供)進行分析，sIgE濃度判定依據(jù)REAST分級：0級，檢測不到(<0.35 IU/mL)；1級，低(0.35≤讀數(shù)<0.70 IU/mL)；2級，中(0.70≤讀數(shù)<3.50 IU/mL)；3級，高(3.50≤讀數(shù)<17.50 IU/mL)；4級，非常高(17.50≤讀數(shù)<50 IU/mL)；5級，很高(50≤讀數(shù)<100 IU/mL)，6級，極高(≥100 IU/mL)。其中大于1級包括1級為陽性。OFC結(jié)果：服用后引起風團的為陽性，無反應(yīng)的為陰性。

1.5 統(tǒng)計學方法 數(shù)據(jù)分析采用Excel及IBM SPSS Statistics 24.0進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)采用頻數(shù)/百分比進行統(tǒng)計描述，組間比較采用Pearson卡方檢驗，理論頻數(shù)小于1(或超過20%的格子理論頻數(shù)小于5)組間比較采用Fisher確切概率法，檢驗水準α=0.05。P<0.05為存在統(tǒng)計學差異。

2 結(jié)果

2.1 食入性過敏原總體檢測結(jié)果 在416例AU患者中，食物性過敏原中陽性檢出率最高為雞蛋56例(13.5%)，其中牛肉、羊肉和鱈魚均未檢測出有過敏者。其中對1種過敏原呈陽性反應(yīng)者39例(9.3%)，同時對2種及以上過敏原呈陽性反應(yīng)者76例(18.3%)。見表3。

表3 416例患者食入性sIgE檢測結(jié)果 n(%)

2.2 食入性過敏原的性別分布 在416例患者中，男性患者186例，sIgE陽性者79例(19.0%)，女性230例，陽性者83例(20.0%)，男女間各食入性過敏原分布差異無統(tǒng)計學意義。見表4。

表4 416例患者食入性sIgE檢測性別比較分析 n(%)

注：*Pearson卡方檢驗

2.3 食入性過敏原的年齡分布 將416例急性蕁麻疹患者按照年齡分組進行統(tǒng)計分析，1～6歲人群sIgE陽性的檢出率最高26.4%(110/416)；雞蛋和牛奶在不同年齡段人群的陽性檢出率存在統(tǒng)計學差異(P<0.05)。見表5。

表5 416例患者食入性sIgE檢測各年齡組比較分析 n(%)

注：*Pearson卡方檢驗，* *Fisher確切概率法

2.4 OFC實驗結(jié)果 雞蛋sIgE陽性患者56例，濃度在0.35～0.70 IU/mL之間且同意行OFC的共36例，僅1例出現(xiàn)風團；濃度在0.70～2.0 IU/mL之間且同意行OFC的共11例，6例出現(xiàn)風團。牛奶sIgE陽性患者29例，濃度在0.35～0.70 IU/mL之間且同意行OFC的共16例，無人出現(xiàn)風團；濃度在0.70～2.0 IU/mL之間且同意行OFC的共8例，3例出現(xiàn)風團。

3 討論

AU的發(fā)病機制包括IgE介導的和非IgE介導的機制，主要是IgE介導的肥大細胞活化和嗜堿粒細胞的激活[6]。有研究基于未成年AU人群得出，AU最常見的病因是感染(48.4%)，其次是食物(23.5%)，特發(fā)性病因(13.2%)，藥物(11.5%)，吸入劑(1.7%)，蚊蟲叮咬(1.5%)和接觸材料(0.2%)[7]。與本試驗結(jié)果27.6%食物過敏原陽性基本一致。詳細的病史詢問和體格檢查有時難以確定其病因，此時過敏原檢測就顯得尤為重要。

血清sIgE檢測是國內(nèi)外公認的過敏原檢測手段之一[8]，我們采用的是新一代全定量檢測試劑，采用酶聯(lián)免疫捕獲法對樣本進行全自動分析，此法可去除IgE抗體干擾并完全捕獲血清中的sIgE，靈敏度達到0.008 IU/mL,并且試劑盒與其他免疫球蛋白的交叉反應(yīng)率均小于0.04%,準確性好、精密度高。開放式OFC是由試驗者提供天然食品，食品不進行遮蔽，也不會提供安慰劑的一種食物激發(fā)試驗[9]，適用于臨床工作，被認為是在已經(jīng)確定需要OFC的情況下，評估食物過敏的首選方法。

目前國內(nèi)尚無基于AU患者此類研究數(shù)據(jù)，本研究結(jié)果顯示，共71例患者同意行OFC，10例(14.1%)為陽性，故85.9%的sIgE檢測陽性患者無需行OFC。Fleischer等[10]對食物過敏的兒童人群(并非全是AU)進行OFC驗證得出11%結(jié)果為陽性，即89%的sIgE檢測陽性患者行OFC結(jié)果為陰性。本研究結(jié)果與此結(jié)果基本一致。分析sIgE檢測結(jié)果與臨床癥狀不符可能與sIgE檢測存在假陽性有關(guān)，其原因主要有四個方面：(1)食物過敏原蛋白組分的復雜性，一種食物往往含有多種可易導致過敏的蛋白質(zhì)[11]，而目前國內(nèi)還沒有將食物蛋白組分過敏原檢測應(yīng)用于臨床，有可能導致IgE檢測陽性的蛋白組分在食物的加工烹調(diào)過程中失去了它的抗原性，或者檢測到的不是引起過敏反應(yīng)的主要抗原[12]；(2)IgE抗體耗竭，本來血清中IgE抗體濃度就很低，而急性發(fā)作后短期中和了大量抗原導致血清中抗體含量微乎其微[13]，不足以激發(fā)變態(tài)反應(yīng)；(3)存在交叉反應(yīng)性糖類抗原決定簇，其僅能產(chǎn)生與過敏原結(jié)構(gòu)類似的sIgE抗體，不能使肥大細胞活化，故僅能測出sIgE陽性而無臨床癥狀[11]；(4)AU發(fā)病機制的復雜性，雖然檢測到了特異性IgE抗體，只能表示機體處于一種敏感狀態(tài)，不一定發(fā)病，或者是非免疫機制的發(fā)病[10]。

本研究有一些局限性。首先，并不是對所有可疑食物行OFC驗證。其次，本研究采用開放式OFC，而不是診斷食物過敏“金標準”的雙盲安慰劑食物激發(fā)試驗。目前國內(nèi)單一過敏原檢測手段并不完美，之前研究發(fā)現(xiàn)，皮膚點刺試驗檢測食物過敏的敏感性高，特異性低，而sIgE敏感性低，特異性高[14]，今后可開展二者聯(lián)合診斷AU患者食物過敏的研究。且今后的研究重點在行大樣本量臨床實驗以期得出適合我國人群的食物sIgE陽性預測值上。