KL-6 和Th1／Th2 細胞因子在結締組織病相關性間質性肺炎中的表達及臨床意義

岳歡歡 黎 聯，2

結締組織相關性間質性肺炎（connective tissue disease-associated interstitial pneumonia，CTD-IP）是結締組織性疾?。╟onnective tissue disease，CTD）常見并發癥［1］。但目前尚無特異性血清標志物用以評估CTD-IP 患者病情。涎液化糖鏈抗原（Krebs von den Lungen-6，KL-6）是一種大分子唾液酸糖蛋白，其在不同肺泡上皮細胞中表達量差異明顯，研究顯示，血清KL-6 濃度在反映肺間質性病變中具有良好價值。此外，肺間質性病變與Th1／Th2 細胞因子失衡密切相關，其中干擾素-γ（interferon-γ，IFN-γ）及白介素-4（interleukin-4，IL-4）分別是典型的Th1及Th2 細胞因子，IFN-γ／IL-4 可反映Th1／Th2 平衡程度［2-3］。為探究KL-6、Th1／Th2 在CTD-IP 中表達水平及其在反映患者病情中的應用效果，報道如下。

資料與方法

一、一般資料

選擇2017 年1 月至2019 年1 月收治的77 例CTD-IP 患者為CTD-IP 組，CTD-IP 診斷標準參照2002 年ATS 與ERS 發布的特發性間質性肺炎診斷標準［4］。同時將60 例無間質性肺病變的CTD 患者納為CTD 組。排除慢性阻塞性肺疾病者膠原血管病合并間質性肺病者、不穩定心絞痛者、職業或環境暴露所致間質性肺疾病者。將50 例健康體檢合格者納為對照組，對照組無心肺疾病。其中CTD-IP組男36 例，女41 例，年齡44 ～63 歲，平均年齡（53.25±7.85）歲，CTD 組男28 例，女32 例，年齡45～66 歲，平均年齡（52.64±8.11）歲，健康對照組男23 例，女27 例，年齡42 ～63 歲，平均年齡（51.69±6.63）歲，三組年齡及性別比例無顯著性差異（P ＞0.05）。

二、研究方法

1.血清相關指標、肺功能檢查：（1）血清KL-6水平檢測：采集空腹靜脈血5 ml，置于促凝管分離血清，-70 ℃冰箱保存，檢測前1 d 放入4 ℃冰箱凍融，使用化學發光酶免疫檢測法檢測血清KL-6 水平；（2）血清IFN-γ 及IL-4 水平檢測：采用酶聯免疫吸附法檢測血清IFN-γ 及IL-4 水平；（3）肺功能檢測：采用德國耶格（MasterScreen）肺功能檢測儀，測定被研究者肺功能，記錄肺功能指標，包括1 s 用力呼氣容積（forced expiratory volume in 1 second，FEV1）、用力肺活量（forced vital capacity，FVC）、一氧化碳彌散量（DLCO）。

2.影像學檢查：采用德國西門子64 層螺旋CT行肺部HRCT 檢查，患者平躺于待檢床上，兩上臂上舉，掃描條件：120 kV，60 ～80 mA／s，層厚1 mm，層距5 mm，從肺尖部掃描至膈肌頂部，所有圖像均以肺窗拍攝成片。

3.分組方法：（1）根據肺通氣功能，將CTD-IP組患者分為肺通氣輕度障礙組、中度障礙組及重度障礙組，肺通氣障礙程度分級標準［5］：FEV1%≥70%為輕度，50%≤FEV1%≤69%為中度，FEV1≤49%為重度；（2）根據肺彌散功能，將CTD-IP 組患者分為輕度彌散功能障礙組、中度彌散功能障礙組及重度彌散功能障礙組，肺彌散功能障礙分級標準［6］：60%≤DLCO%＜80%為輕度障礙，50%≤DLCO%＜60%為中度障礙，DLCO%＜40%為重度障礙；（3）根據HRCT 表現，將CTD-IP 組患者分為以磨玻璃樣改變、斑點斑片狀影等滲出性病變為主者納為活動性組，以纖維條索狀、網格狀及蜂窩狀改變為纖維化病變為主者納為非活動性組。

4.觀察指標：（1）觀察CTD-IP 組、CTD 組及健康對照組血清KL-6、IFN-γ、IL-4 及IFN-γ／IL-4 水平；（2）比較輕、中、重度肺通氣障礙組CTD-IP 患者血清KL-6、IFN-γ、IL-4 及IFN-γ／IL-4 水平；（3）比較輕、中、重度肺彌散功能障礙組CTD-IP 患者血清KL-6、IFN-γ、IL-4 及IFN-γ／IL-4 水平；（4）比較活動性組及非活動性組IP 患者血清KL-6、IFN-γ、IL-4及IFN-γ／IL-4 水平。

三、統計學方法

結 果

一、三組血清KL-6、IFN-γ、IL-4 及IFN-γ／IL-4水平比較

健康對照組、CTD 組及CTD-IP 組中，血清KL-6及IL-4 水平呈依次上升趨勢，IFN-γ 及IFN-γ／IL-4水平呈依次下降趨勢，組間差異均顯著（P＜0.05），見表1。

二、不同肺通氣障礙分級組血清KL-6、IFN-γ、IL-4 及IFN-γ／IL-4 水平比較

CTD-IP 患者肺通氣輕度障礙組、中度障礙組及重度障礙組中，血清KL-6 及IL-4 水平呈依次上升趨勢，IFN-γ 及IFN-γ／IL-4 水平呈依次下降趨勢，組間差異均有統計學意義（P＜0.05），見表2。

三、不同肺彌散功能障礙分級組血清KL-6、IFN-γ、IL-4 及IFN-γ／IL-4 水平比較

CTD-IP 患者肺彌散輕度障礙組、中度障礙組及重度障礙組中，血清KL-6 及IL-4 水平呈依次上升趨勢，IFN-γ 及IFN-γ／IL-4 水平呈依次下降趨勢，組間差異均顯著（P＜0.05），見表3。

表1 三組血清KL-6、IFN-γ、IL-4 及IFN-γ／IL-4 水平比較

表1 三組血清KL-6、IFN-γ、IL-4 及IFN-γ／IL-4 水平比較

注：與健康對照組比較，aP＜0.05，與CTD 組比較，bP＜0.05

組 別 例數 KL-6（U／ml） IFN-γ（pg／ml） IL-4（pg／ml） IFN-γ／IL-4健康對照組 50 176.65±23.58 319.54±50.13 211.62±26.58 1.47±0.36 CTD 組 60 216.58±26.51a 246.69±53.33a 253.46±30.16a 0.94±0.27a CTD-IP 組 77 544.42±54.16ab 213.26±41.26ab 286.65±33.67ab 0.76±0.31ab F 值 1 823.821 78.548 96.521 85.661 P 值 0.000 0.000 0.000 0.000

表2 不同肺通氣障礙分級組血清KL-6、IFN-γ、IL-4 及IFN-γ／IL-4 水平比較

表2 不同肺通氣障礙分級組血清KL-6、IFN-γ、IL-4 及IFN-γ／IL-4 水平比較

注：與肺通氣輕度障礙組比較，aP＜0.05，與肺通氣中度障礙組比較，bP＜0.05

組 別 例數 KL-6（U／ml） IFN-γ（pg／ml） IL-4（pg／ml） IFN-γ／IL-4輕度 26 369.49±42.15 253.69±36.44 243.64±31.26 1.04±0.35中度 30 523.64±55.47a 213.67±41.25a 267.69±25.53a 0.82±0.25a重度 21 584.15±76.62ab 153.69±25.47ab 323.44±29.67ab 0.56±0.17ab F 值 87.920 53.003 51.396 20.772 P 值 0.000 0.000 0.000 0.000

表3 不同肺彌散功能障礙組血清KL-6、IFN-γ、IL-4 及IFN-γ／IL-4 水平比較

表3 不同肺彌散功能障礙組血清KL-6、IFN-γ、IL-4 及IFN-γ／IL-4 水平比較

注：與肺彌散輕度障礙組比較，aP＜0.05，與肺彌散中度障礙組比較，bP＜0.05

組 別 例數 KL-6（U／ml） IFN-γ（pg／ml） IL-4（pg／ml） IFN-γ／IL-4輕度 33 416.26±44.59 276.46±35.43 244.53±32.17 1.14±0.25中度 25 544.33±46.67a 226.69±34.56a 271.16±29.54a 0.84±0.21a重度 19 573.64±63.35ab 173.68±23.64ab 337.49±30.26ab 0.53±0.14ab F 值 65.353 67.010 61.947 56.237 P 值 0.000 0.000 0.000 0.000

表4 不同HRCT 表現組血清KL-6、IFN-γ、IL-4 及IFN-γ／IL-4 水平比較

表4 不同HRCT 表現組血清KL-6、IFN-γ、IL-4 及IFN-γ／IL-4 水平比較

組 別 例數 KL-6（U／ml） IFN-γ（pg／ml） IL-4（pg／ml） IFN-γ／IL-4活動性組 37 563.49±73.25 263.66±35.15 235.16±44.52 1.11±0.22非活動性組 40 513.69±77.54 163.66±26.69 334.16±46.58 0.52±0.11 t 值 2.891 14.124 9.518 15.054 P 值 0.005 0.000 0.000 0.000

四、不同HRCT 表現組血清KL-6、IFN-γ、IL-4及IFN-γ／IL-4 水平比較

CTD-IP 患者HRCT 表現活動性組血清KL-6、IFN-γ、IFN-γ／IL-4 水平明顯高于非活動性組（P ＜0.05），IL-4 水平顯著低于非活動性組（P＜0.05），見表4。

討 論

CTD 是一組以機體各部位結締組織成分損害為主要特征的自身免疫性疾病，肺部結締組織含量豐富，是最常見的受累器官［7-10］。CTD-IP 是CTD 常見并發癥，CTD-IP 病死率高預后差，尋找特異性血清指標準確判斷CTD-IP 患者病情，是積極用藥改善患者預后的有效前提［11-13］。研究發現，血清KL-6、IFN-γ、IL-4 及IFN-γ／IL-4 水平在反映CTD-IP 患者肺功能通氣障礙、肺彌散功能障礙及疾病活動性中具有良好的應用效果，可作為反映CTD-IP 患者病情的可靠參考。

KL-6 主要表達于肺泡Ⅱ型上皮細胞表面，是一種大分子唾液酸糖蛋白，而正常肺組織細胞表面及肺泡Ⅰ型上皮細胞上幾乎不表達［14-17］。肺功能正常者血清KL-6 水平通常在500 U／ml 以下，而出現間質性肺炎者血清KL-6 水平將明顯上升，研究發現，血清KL-6 在診斷CTD-IP 中具有較強的特異性［18-19］。本文結果顯示，與健康對照組及CTD 組相比，CTD-IP 組患者血清KL-6 水平明顯上升，且隨著CTD-IP 患者肺通氣功能障礙及肺彌散功能障礙的加深，其血清KL-6 水平均呈依次上升趨勢，提示血清KKL-6 在反映CTD-IP 患者肺部功能障礙中也具有良好的應用價值，與史傳見等［20］研究結果一致。此外，本文還發現，HRCT 表現為活動期的CTD-IP患者血清KL-6 水平明顯高于非活動期者，提示血清KL-6 有助于醫師了解患者疾病活動程度。

輔助性T 細胞是機體內重要的免疫調節細胞，按照分泌的細胞因子種類可將其分為Th1 及Th2 型細胞亞群，Th1 細胞主要介導急性炎癥、超敏反應及細胞免疫等，分泌的細胞因子包括IFN-γ、IL-2、IL-12 等，Th2 主要介導慢性炎癥及體液免疫，分泌的細胞因子包括IL-4、IL-5 等［21-24］。研究顯示，CTDIP 疾病的發生及發展與患者機體Th1／Th2 細胞因子失衡密切相關。

IFN-γ 是特征性Th1 型細胞因子，在抗纖維化、抗增殖及免疫調節中發揮重要作用，IL-4 是特征性Th2 型細胞因子，在抑制Th1 型反應進行拮抗IFN-γ作用中發揮作用［25-27］。體外實驗表明，IL-4 是成纖維細胞強有力的化學趨化因子［28-31］。本文研究發現，相比于健康對照組與CTD 組，CTD-IP 組患者血清IFN-γ 水平明顯下降，IL-4 水平明顯升高，IFN-γ／IL-4 比例明顯失衡，且隨著CTD-IP 患者肺通氣功能障礙及肺彌散功能障礙的嚴重化，患者Th1／Th2細胞因子失衡程度逐漸升高，提示Th1／Th2 細胞因子失衡在評估CTD-IP 患者病情中具有一定的價值。HRCT 提示肺纖維化病變者血清IFN-γ 水平明顯低于磨玻璃樣改變者，IL-4 水平明顯高于磨玻璃樣改變者，且IFN-γ／IL-4 失衡更為嚴重，提示Th1／Th2 失衡在評估CTD-IP 患者病情中具有良好應用價值。

綜上所述，血清KL-6、IFN-γ、IL-6 及IFN-γ／IL-6水平在反映CTD-IP 患者肺通氣功能障礙、肺彌散功能障礙、疾病活動期中具有良好應用價值，可作為反映患者病情的可靠血清參考物質。