中晚期非小細胞肺癌患者化療前后T 淋巴細胞亞群表達差異分析及臨床意義

陳艷麗 王媛媛 張 勇 李文潔

肺癌是一種發病率、病死率較高的惡性腫瘤，分為小細胞肺癌和非小細胞肺癌兩種類型。其中非小細胞肺癌占肺癌患者的80%以上［1-5］。2015 年統計數據顯示，我國每年約有61 萬人死于肺癌［6］。據WHO 預測，中國在2025 年后年肺癌新增病例將大于100 萬，屆時中國將成為肺癌人數最多的國家［7］。大部分肺癌患者被確診時，已經是中晚期，喪失了根治性手術切除治療機會，目前針對于中晚期非小細胞肺癌治療更多是選擇化療。研究證實肺癌的發生發展過程與機體的免疫狀態具有密切關系［8-12］。T淋巴細胞亞群的表達狀態可以較好的反映機體的免疫狀態，在化療前后，機體的T 淋巴細胞亞群的表達狀態與化療療效的相關性，對于預測化療療效具有重要臨床價值［13］。本文通過探討中晚期非小細胞肺癌患者化療前后T 淋巴細胞亞群的表達水平差異，為肺癌的診療提供理論基礎。

資料與方法

一、臨床資料

選擇2014 年1 月至2018 年6 月在我院進行化療治療的中晚期非小細胞肺癌患者作為研究對象。納入標準：①患者年齡＜80 歲；②體力狀況ECOG 評分［14］在≤7 分；③病理診斷符合中晚期非小細胞肺癌診斷標準［15］；④患者肝腎功能夠耐受化療；⑤至少存在一個可測量評估的肺內病灶，評估標準為recist1.1 標準［10］。排除標準：①妊娠期或哺乳期；②患者有3 級高血壓；③嚴重肺內感染或者全身感染；④有血液系統疾病者；⑤對化療藥物過敏者；⑥中途退出治療者。符合納入標準和排除標準的患者122 例，其中男88 例，女34 例，年齡35～77 歲，平均年齡51.24 歲。同時選擇同期在我院進行健康體檢64 例作為對照，其中男48 例，女16 例，年齡42 ～65 歲，平均年齡49.57 歲。病例組和對照組基線資料，對比無差異（P＞0.05）。

二、研究方法

分別于化療治療前2 d 對病例組所有患者抽取外周血5 ml，及化療結束后抽出外周血5 ml，對照組也抽取外周血5 ml，所有樣本均在當日完成相關檢測，檢測采用流式細胞技術檢測CD3＋（%）、CD8＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋細胞比值，檢測采用流式細胞檢測儀器（生產廠家：美國Becton Dickinson公司生產，型號：BD FACSCalibur），嚴格按照儀器相關說明書進行操作。

詳細記錄所有入組對象T 淋巴細胞亞群檢測結果CD3＋（%）、CD8＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋細胞比值。及采用RECIST 標準評估病例組化療后患者的療效，評估時間為化療完成后3 個月，其中完全緩解（complete remission，CR），部分緩解（partial remission，PR），疾病穩定（stable disease，SD），疾病進展（progressive disease，PD）。疾病控制（CR＋PR＋SD，DCR）。

三、統計學方法

采用SPSS 20.0 軟件進行數據分析。其中計數資料采用率（%）表示，采用χ2檢驗分析。計量資料以（）表示，采用t 檢驗分析，P＜0.05 表示差異具有統計學意義。采用ROC 曲線分析T 淋巴細胞亞群預測非小細胞肺癌患者化療效果。其中P＜0.05表示差異有統計學意義。

結 果

一、病例組與對照組T 淋巴細胞亞群比較

病例組化療前及后的CD3＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋細胞比值均顯著低于對照組（P＜0.05）；化療后CD3＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋細胞比值均較同步化療前有顯著升高（P＜0.05）；化療前后病例組患者CD8＋（%）略高于對照組，但差異未發現統計學意義（P＞0.05），且化療前后CD8＋（%）對比，差異未發現統計學意義（P＞0.05），見表1。

二、DCR 及PD 期患者一般情況及T 淋巴細胞亞群表達

化療治療后，DCR 共90 例（73.77%），其中CR 0 例，PR 25 例（20.49%），SD 65 例（53.28%）。PD 32 例（26.23%）。DCR 期的年齡、性別與PD 期對比，差異無統計學意義（P＞0.05）。

DCR 期與PD 期患者對比治療前CD3＋（%）、CD4＋（%）、CD8＋（%）、CD4＋／CD8＋，差異均無統計學差異（P＞0.05），DCR 期患者治療后CD3＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋顯著高于PD 期患者，差異均具有統計學意義（P＜0.05）。DCR 與PD 期患者治療后CD3＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋細胞比值均顯著高于治療前。兩期患者治療后CD8＋（%）對比，差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

三、非小細胞肺癌患者化療效果預測

治療后CD3＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋水平在預測非小細胞肺癌患者化療效果的AUC 面積分別為：0.789、0.823、0.758，見圖1。通過最大約登指數計算得出CD3＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋指標的最大AUC 面積相應參數截止值，其中CD3＋（%）截止值為65.95（%）（敏感度＝83.30%，特異性＝78.60%），CD4＋（%）截止值為39.81（%）（敏感度＝87.30%，特異性＝85.20%），CD4＋／CD8＋截止值為1.250（敏感度＝81.20%，特異性＝76.70%）。

圖1 ROC 曲線圖

表1 肺癌組與對照組T 淋巴細胞亞群比較

表1 肺癌組與對照組T 淋巴細胞亞群比較

組 別 例數 CD3＋（%） CD4＋（%） CD8＋（%） CD4＋／CD8＋對照組 64 69.12±5.92 37.98±6.11 24.22±4.84 1.69±0.42病例組 化療前 122 57.37±5.16 27.48±6.12 25.01±5.26 1.23±0.52化療后 122 61.28±6.14 36.18±6.13 25.82±5.19 1.51±0.48

表2 疾病控制組及疾病進展組治療前及治療后的T 淋巴細胞亞群表達情況對比

討 論

近年來，我國肺癌發病率及病死率都呈明顯上升趨勢。研究證實肺癌的發生發展呈現受多因素影響，且其發展具有呈階段性［16-19］。隨著腫瘤免疫學方面的研究逐漸深入，越來越多的研究證實機體的免疫系統及免疫功能在非小細胞肺癌的發生發展過程扮演著重要作用，尤其是T 淋巴細胞亞群的表達狀態，當機體的T 淋巴細胞亞群的表達水平失衡時往往會預示著機體免疫功能處于紊亂狀態［20-22］。

T 淋巴細胞包含殺傷性T 細胞、抑制性T 細胞、誘導輔助性T 細胞、遲發性超敏反應性T 細胞4 種類型［23］，成熟的T 淋巴細胞表面均可表達CD3 分子，CD3＋的T 淋巴細胞正常情況下是代表著機體總T 淋巴細胞的水平，若CD3＋（%）降低則可能提示機體免疫功能下降，數值越低，表示免疫功能越低下。成熟的T 淋巴細胞是不能同時表達CD4 分子、CD8分子，因此CD3＋細胞接近于CD4＋細胞與CD8＋細胞兩者之和［24］，其中CD4＋更多是通過分泌細胞因子、激活趨化因子、募集靶細胞等方式來調控細胞內免疫反應［25］，從而發揮免疫作用。生理狀態下CD4＋／CD8＋細胞比值是呈動態平衡狀態，這對穩定維持機體細胞免疫功能有著十分重要的意義，當CD4＋／CD8＋細胞比值下降可能預示著機體T 淋巴細胞亞群處于失衡狀態，這對疾病診斷與治療，預后均有著十分重要參考價［26］。目前化療是治療中晚期非小細胞肺癌的主要手段，在殺傷腫瘤細胞的同時也會損害正常組織細胞，當然也包括機體T 淋巴細胞［27-31］。本文分析化療前后患者外周血T 淋巴細胞亞群表達水平，旨在探討胞中晚期非小細胞肺癌患者的細胞免疫功能狀況及其對預后的預測價值，從而為肺癌的治療提供一定的參考依據。

本文發現病例組化療前后患者的CD3＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋細胞比值均顯著低于對照組（P＜0.05），提示病例組患者的免疫功能較健康人群是有所下降，這與胡靜等［26］研究報道結果具有一致性。化療后CD3＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋細胞比值均較化療前有顯著升高（P＜0.05），提示當腫瘤得到較好控制時，機體免疫功能也處于相對正常的狀態；化療前后病例組患者CD8＋（%）略高于對照組，但差異未發現統計學意義（P＞0.05），且化療前后CD8＋（%）對比，差異未發現統計學意義（P ＞0.05）。化療治療后，DCR 患者共90 例（73.77%），其中CR 0 例，PR 25 例（20.49%），SD 65 例（53.28%）。PD 患者32 例（26.23%）。DCR 患者治療后的CD3＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋細胞比值均顯著高于PD 患者（P＜0.05），且與對照組對比，差異無統計學意義（P ＞0.05）。治療后CD3＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋水平在預測非小細胞肺癌患者化療效果的AUC 面積分別為：0.789、0.823、0.758，且具有較好的特異度和靈敏度。說明了化療后患者的外周血T 淋巴細胞亞群表達狀態有可能成為預測化療臨床效果的一種標記物。

綜上所述，中晚期非小細胞肺癌患者的T 淋巴細胞呈現低表達狀態，細胞免疫功能呈現一種紊亂狀態。化療治療的效果可能與機體外周血T 淋巴細胞表達狀態有關，提示肺癌患者的外周血T 淋巴細胞亞群表達狀態有可能成為預測化療臨床效果的一種標記物。