保嬰散對(duì)幼齡SD大鼠急性毒性的毒理學(xué)研究

蔣文慶，杜青云，郭秋平*，盧 圓，齊珍珍

（1.廣州白云山奇星藥業(yè)有限公司，廣東 廣州 510530；2.廣州醫(yī)藥研究總院有限公司藥物非臨床評(píng)價(jià)研究中心，廣東 廣州 510240）

兒童的生長發(fā)育不同于成人，同時(shí)由于兒童的器官及組織發(fā)育未完善，不能用成人的臨床數(shù)據(jù)和成年動(dòng)物的臨床前安評(píng)數(shù)據(jù)來支持臨床兒科用藥的安全性。因此，采用幼齡動(dòng)物開展兒科藥物的臨床安全性評(píng)價(jià)非常有必要。近年來，隨著在臨床上兒科用藥需求的增加，兒科藥物的安全性受到更多的關(guān)注。保嬰散是廣州白云山奇星藥業(yè)有限公司的獨(dú)家中成藥品種，由膽南星、鉤藤、人工牛黃、冰片、僵蠶（姜制）、全蝎（制）、珍珠、人工麝香、白附子（醬醋制）、天麻（姜制）、蟬蛻（去頭足）、琥珀、防風(fēng)、天竺黃、朱砂組成，具有除痰、定驚、清熱解毒的功效，可用于治療小兒驚風(fēng)、痰涎壅盛。保嬰散方中含有膽南星、全蝎、白附子、朱砂等毒性中藥[1-3]，有必要開展保嬰散的毒理學(xué)試驗(yàn)。本試驗(yàn)以保嬰散為研究對(duì)象，在出生19天的幼齡大鼠上進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)，為保嬰散的臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料與儀器

1.1 藥物

保嬰散，廣州白云山奇星藥業(yè)有限公司提供。批號(hào)：20160704，有效期至：2018年6月30日。臨用時(shí)用0.5%羧甲基纖維素鈉配成所需濃度的藥液。

1.2 動(dòng)物

成年SD大鼠，19～20周齡，SPF級(jí)，雌雄各12只，購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（湘）2011-0003。本試驗(yàn)使用的幼齡SD大鼠源于購進(jìn)的雌雄大鼠交配繁殖。飼養(yǎng)于屏障級(jí)動(dòng)物房，溫度20～26℃，相對(duì)濕度40～70%，12h/12h明暗光照交替。使用時(shí)體重范圍：雌性仔鼠42～56 g；雄性仔鼠42～57 g。

2 方 法

2.1 口服給藥急性毒性

取出生后19 d的幼齡大鼠30只，按體重隨機(jī)分為陰性對(duì)照組、保嬰散低劑量和高劑量（分別為2.2 g/kg、4.4 g/kg，按公斤體重折算，分別相當(dāng)于人臨床用量37倍和74倍）組，每組10只大鼠，雌雄各半。給藥前禁食不禁水12 h，各組均以10 mL/kg灌胃給藥，24 h給藥兩次，兩次時(shí)間間隔6 h以上。陰性對(duì)照組給予等體積的0.5%CMC-Na溶液。給藥后觀察至少4 h，以后每天至少觀察1次，持續(xù)觀察14天。并于給藥后第2、3、5、7、11、14天測(cè)定動(dòng)物體重。一般觀察包括動(dòng)物體重變化、飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物等。記錄所有動(dòng)物的死亡情況、中毒癥狀及中毒反應(yīng)的起始時(shí)間、嚴(yán)重程度、持續(xù)時(shí)間、是否可逆等。給藥后第14 d，處死動(dòng)物，解剖，肉眼觀察動(dòng)物心、肝、脾、肺、腎等主要器官。

2.2 統(tǒng)計(jì)方法

根據(jù)所觀察到的各種毒性反應(yīng)（其出現(xiàn)時(shí)間、嚴(yán)重程度、持續(xù)時(shí)間等）和死亡情況，進(jìn)行分析比較，確定最大給藥量。對(duì)體重進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，各實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行組間比較之前先進(jìn)行組間方差分析（F-test），當(dāng)組間方差齊同時(shí)，組間比較采用Student-T檢驗(yàn)（非配對(duì)的T檢驗(yàn)）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，組間方差不齊時(shí)，采用校正的Student-T檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。病理檢查異常情況則按其發(fā)生率和程度進(jìn)行組間比較。

3 結(jié) 果

3.1 一般狀態(tài)觀察結(jié)果

保嬰散低劑量組給藥當(dāng)天及第2～14天全部動(dòng)物一般觀察未見異常。保嬰散高劑量組在第二次給藥后30 min內(nèi)，10例動(dòng)物中有3例雄性動(dòng)物出現(xiàn)活動(dòng)減少、閉眼癥狀，給藥后1～4h陸續(xù)恢復(fù)正常。第2～14天全部動(dòng)物一般觀察未見異常。

3.2 大鼠死亡情況

連續(xù)14 d觀察中，保嬰散低、高劑量組均未見動(dòng)物死亡。

3.3 保嬰散對(duì)大鼠體重的影響

與陰性對(duì)照組比較，保嬰散低、高劑量組雌雄動(dòng)物體重均未見統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異，在觀察期14 d體重均保持增長趨勢(shì)。

表1 保嬰散對(duì)SD大鼠體重的影響（±s，n=10）

表1 保嬰散對(duì)SD大鼠體重的影響（±s，n=10）

組別 劑量(g/kg) 性別 D1 D2 D3 D5 D7 D11 D14 增重(g)陰性對(duì)照 - ♂ 47±5 52±5 60±7 73±8 86±8 115±16 145±15 98±11♀ 47±4 53±4 59±5 72±7 82±7 110±10 131±10 84±8保嬰散 2.2 ♂ 49±2 53±2 60±3 73±2 87±4 115±9 147±6 99±5♀ 47±2 51±2 58±2 72±2 83±2 113±3 135±5 88±6保嬰散 4.4 ♂ 49±5 52±7 59±9 73±9 87±10 117±15 147±14 98±11♀ 47±4 51±5 57±4 71±6 80±6 109±7 132±7 84±5

3.4 保嬰散對(duì)大鼠病理學(xué)的影響

各組全部動(dòng)物大體剖檢未見明顯異常。

4 結(jié)果討論及評(píng)價(jià)

根據(jù)中華人民共和國《藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范》[4-5]，在GLP條件下，本試驗(yàn)選用出生19 d的幼齡大鼠（大約相當(dāng)于2歲左右的嬰幼兒）進(jìn)行了保嬰散的急性毒性試驗(yàn)。保嬰散2.2、4.4 g/kg（按公斤體重折算相當(dāng)于每日臨床用量的37、74倍）動(dòng)物未見動(dòng)物死亡，體重與陰性對(duì)照組相比無明顯差異，大體解剖也未見明顯異常。高劑量組動(dòng)物在第二次給藥后30 min內(nèi)，有3例雄性動(dòng)物出現(xiàn)活動(dòng)減少、閉眼的癥狀，給藥后1～4 h陸續(xù)即恢復(fù)正常。第2～14天全部動(dòng)物一般觀察未見異常。

綜上所述，保嬰散每日最大給藥量為4.4 g/kg，約為每日臨床用量的74倍。保嬰散4.4 g/kg給藥后30 min內(nèi)可引起部分雄性動(dòng)物出現(xiàn)活動(dòng)減少、閉眼癥狀，給藥后4 h可恢復(fù)正常。結(jié)合灌胃給藥的藥液體積和其它各項(xiàng)檢查指標(biāo)綜合分析，該反應(yīng)可能為胃部撐漲、飽腹疲憊的反應(yīng)，非藥物毒性所致，無明顯毒理學(xué)意義。各組均未見明顯的毒性靶器官。