tPA/gGH雙基因轉染山羊乳腺上皮細胞表達分析

宋紹征，于康英，張婷，陸睿，潘生強，周鳴鳴，成勇

研究報告

/雙基因轉染山羊乳腺上皮細胞表達分析

宋紹征1，于康英1，張婷2，陸睿2，潘生強1，周鳴鳴1，成勇2

1. 無錫太湖學院護理學院，基礎醫學系，無錫 214000 2. 揚州大學獸醫學院，江蘇省轉基因動物制藥工程研究中心，揚州 225009

人組織纖溶酶原激活劑(tissue-type plasminogen activator, tPA)是一種被廣泛應用于臨床的溶栓藥物。雙基因共整合入生物體內能夠產生協同作用，從而提高目的基因的表達水平。但是目前，利用基因與基因共整合以期提高tPA表達水平的相關研究較少。為篩選獲得tPA高表達的/雙基因整合的單克隆轉基因山羊乳腺上皮細胞株，本研究以基因作為調控序列，構建乳腺特異性表達載體PCL25/gGH，并通過電轉染將和雙基因共轉染山羊乳腺上皮細胞；通過G418篩選獲得抗性細胞株，經PCR檢測獲得轉基因單克隆細胞株；利用催乳素誘導tPA表達，收集48 h后細胞誘導液進行ELISA()和Western blotting檢測并分析其tPA表達水平。結果表明，共獲得142株抗性單克隆細胞，其中有53株單基因整合細胞株，34株/雙基因整合細胞株，雙基因整合率達23.9% (34/142)。共檢測出29株細胞能夠表達tPA，其中單基因表達細胞為12株，表達率為22.6% (12/53)；雙基因表達細胞為17株，表達率為50.0% (17/34)；且單基因細胞表達tPA含量為7.5~52.0 μg/mL，而雙基因細胞表達tPA含量為40~360 μg/mL，明顯高于單基因表達水平。本研究通過電轉染的方式成功獲得了/雙基因整合的單克隆山羊乳腺上皮細胞株，并證明雙基因整合的細胞株表達tPA水平明顯提高，為后期制備高表達轉基因山羊奠定了基礎。……