抗黃萎病番茄種質材料的篩選

王明耀 王學穎 鹿秀云 張桂海 張釗 黃志輝 田慶武 王長浩 馬德明

摘要?通過對117份番茄種質材料（品種或品系）斷根后分別接種1×107番茄黃萎病菌、1×107茄子黃萎病菌、清水（對照），并進行田間檢測，篩選出高抗黃萎病的番茄種質材料15份、感黃萎病的種質材料2份，經對17份材料29個樣本的DNA分子檢測，結果與田間抗性表現的吻合度為75.86%。該研究為篩選適合茄子生產用抗黃萎病砧木（番茄）育種提供抗源材料，并為實驗室番茄抗性DNA分子檢測提供理論依據。

關鍵詞?番茄種質，抗黃萎病篩選，DNA抗性分子檢測

中圖分類號?S641.2文獻標識碼?A

文章編號?0517-6611（2020）06-0048-02

Abstract?117 tomato germplasm materials （varieties or strains） were inoculated with 1×107 tomato verticillium，wilt bacteria 1×107 eggplant verticillium ，wilt bacteria water （control） and field test， respectively，15 tomato germplasm materials with high resistance to verticillium wilt and 2 tomato germplasm materials with high resistance to verticillium wilt were selected. Through the DNA molecular detection of 29 samples of 17 materials， the result and the resistance performance in the field were 75.86%.The study provides antisource materials for screening rootstock breeding suitable for eggplant production，and theoretical basis for laboratory tomato resistant DNA molecular detection.

Key words?Tomato germplasm，Resistance to verticillium wilt screening，DNA resistance molecular detection

茄子是我國主要蔬菜作物，栽培面積居世界前列[1]。生產中，因茄子抗黃萎病種質資源匱乏[2]和重茬、連作，茄子黃萎病發生普遍，一般減產20%～30%，危害嚴重的達60%[3]。茄子黃萎病屬土傳病害，其病菌在土壤中通常存活4～5年，一般常規植保方法很難根治，選用抗病品種能有效防治茄子黃萎病[4]。采用優良的抗病砧木嫁接茄子對黃萎病的防治效果顯著[5]。

番茄與茄子同科異屬，其抗黃萎病種質材料較多。我國在20世紀90年代以來陸續有以番茄品種作砧木與茄子嫁接進行栽培且有效防治茄子黃萎病、增加茄子產能的報道。目前，國內尚無茄子專用番茄抗黃萎病砧木育成的報道，菜農用于茄子嫁接砧木用的番茄多為自行留種或相互交換而來，存在混雜嚴重、種源和抗性不穩的難題，制約茄子產業發展[6]。為此，廊坊市農林科學院立項番茄屬茄子抗病砧木種質資源創新課題，培育適合茄子嫁接用抗黃萎病的番茄品種，2018年對117份番茄種質材料進行黃萎病抗性田間鑒定，并經實驗室DNA分子檢測，從中篩選出15份符合育種要求的種質材料，旨在為選育茄子嫁接用番茄抗黃萎病砧木品種提供了抗源材料。

1?材料與方法

1.1?材料?番茄品種8個：中研紅2號、東風一號、白果強豐、銀劍312、迪奧、銀魅、科砧1號、科砧2號，番茄品系109個。

病原菌：茄子黃萎病病原菌，由北京市農林科學院惠贈，番茄黃萎病病原菌ENAUTVD-1，由東北農業大學贈予。

1.2?番茄秧苗培育

在日光溫室中，采用50孔塑料穴盤填裝由草炭和蛭石混配的無土育苗基質育苗。2018年3月8日播種，4月9日育成有3片真葉的健壯秧苗。

1.3?病原菌分生孢子懸浮液制備

在超凈工作臺上，將茄子黃萎病病原菌和番茄黃萎病病原菌ENAUTVD-1分別接種在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基（PDA）平板上進行活化，25 ℃恒溫培養7 d，挑取菌落邊緣的新鮮菌絲塊（直徑5 mm）4～5塊分別轉接于馬鈴薯葡萄糖培養液（PDB）中，25 ℃、180 r/min 條件下恒溫振蕩培養5 d，培養液用2層滅菌紗布濾去菌絲得到分生孢子懸浮液[7]，在顯微鏡下用血球計數板檢查濾液中分生孢子數量，并用滅菌水將其濃度調整為1.0×107孢子/mL，備用。

1.4?病原菌人工接種

采用斷根法[8]接種茄子黃萎病病原菌和番茄黃萎病病原菌。試驗設置3個處理，同一個番茄種質材料秧苗分成數量相等的3份，每份50棵秧苗，其中一份接種茄子黃萎病病原菌分生孢子懸浮液，一份接種番茄黃萎病病原菌分生孢子懸浮液，另一份接種等量清水。接種時，先將長滿番茄秧苗根系的苗坨逐棵從50孔穴盤中整體取出，隨即用鋒利的剪刀在距離苗坨底部1/3處橫向將番茄根系和苗坨一并剪掉，將上部2/3苗坨連同秧苗一起栽到事先已經填充且壓實1.5 cm厚無土育苗基質的50孔穴盤中，之后用注射器每穴加注10 mL的1.0×107/mL病原菌分生孢子懸浮液或清水。

1.5?番茄苗栽植培養

接種后放置24 h，使接種番茄秧苗的根系和苗坨充分吸收加注的孢子懸浮液，之后取出秧苗和苗坨整體定植在日光溫室內的普通土壤中。在日光溫室中栽植，每份番茄種質材料設置為一個小區，每個小區栽植3行，每個處理栽種1行，每行50株，平均行距0.7 m、株距0.1 m。其中，1行栽植接種番茄黃萎病菌的秧苗，1行栽植接種茄子黃萎病菌的秧苗，1行栽植清水處理的秧苗（對照）。

1.6?番茄黃萎病調查方法與抗性評價標準

自秧苗定植后第7天開始，采用6級分級法每7 d調查一次番茄黃萎病發病情況，計算病情指數，按照病情指數劃分番茄對黃萎病的抗病性。番茄對黃萎病的抗病性劃分標準見表1。

番茄黃萎病分級標準：0級，無病癥，1級，發病株有≤10%的葉子發病，病葉現淡黃色病斑，2級，病株有11%～25%的病葉，發病葉顯現淡黃色病斑，3級，病株上病葉達26%～50%，病斑淡黃色和黃褐色，4級，病株有50%以上的病葉，現淡黃色和黃褐色病斑，5級，病株葉片全部染病，植株萎蔫或死亡[9]。

病情指數=100×Σ（病級×該病級株數）/（最高級值×總株數）

1.7?番茄植株黃萎病抗性檢測

2018年8月10日播種當年篩選的部分優異番茄種質材料41份，育成健壯秧苗，在秧苗達3片真葉時采用上述接種方法接種番茄黃萎病病原菌菌ENAUTVD-1分生孢子懸浮液，當植株達3穗果膨大期，從其中的17份番茄種質材料中隨機抽取29株，每株取嫩枝1份做樣本分別標號后送河北科技大學進行番茄黃萎病抗性檢測。

2?結果與分析

2.1?番茄品種（品系）對2種病菌引發的黃萎病的抗性評價

通過對117份栽植在日光溫室中分別接種了茄子黃萎病菌、番茄黃萎病菌2種致病菌的番茄種質材料的田間調查，篩選出對2種黃萎病免疫的種質材料5份：FY-9-5-7-4-1、FY-6-7-6-4-2、Z2-7-2-6-7-4、WM2-4-5-9-3、26-12-9-7-5-4，高抗材料 10份：17B-5-3-6-7-3、QX-4-10-9-5-2、LH-4-9-7-10-6、L8-6-3-11-6-5、L9-7-4-1-9-2-4、KR-9-2-17-6-5-4、XXA-6-12-8-6-4、GPM6-6-5-7-9-1、KN-9-11-8-6-7-3、KC-2-10-6-7-2，感病材料2份：53-6-11-6-4-1、11-7-12-9-5-7（表2）。

2.1.1?田間番茄種質材料對茄子黃萎病的抗性表現。

接種茄子黃萎病菌的117份番茄種質材料在日光溫室中栽培，抗性表現可分5種類型。其中，免疫材料7份、高抗材料33份、中抗材料42份、耐病22份、感病材料13份。

2.1.2?田間番茄種質材料對番茄黃萎病的抗性表現。

接種番茄黃萎病菌的117份番茄種質材料在日光溫室中栽培，抗性表現也有5類。其中，免疫材料5份、高抗材料10份、中抗材料26份、耐病40份、感病材料36份。

2.2?番茄種質抗黃萎病的DNA分子檢測?2018年11月，在3穗果膨大期從15份抗病番茄材料和2份感病番茄材料中隨機選取29株，每株取嫩枝1份送河北科技大學進行抗黃萎病DNA分子檢測，其結果與在日光溫室中的田間調查結果吻合度達75.86%（表3）。

3?結論與討論

（1）抗番茄黃萎病的番茄種質材料全部抗茄子黃萎病，抗茄子黃萎病的番茄種質材料中只有部分材料表現抗番茄黃萎病。感病番茄黃萎病的番茄種質材料，全部感病茄子黃萎病，感病茄子黃萎病的番茄種質材料，多數感病番茄黃萎病。該試驗結果表明番茄種質中僅有部分材料表現抗黃萎病，抗性表現因染病病原菌的不同而有所不同。

（2）抗性DNA檢測對田間篩選抗性番茄材料有較強的引導作用，可縮減田間篩選范圍和數量，提高篩選精度，加速選育速度[10]。因DNA檢測結果與田間調查結果吻合度尚未達到100%，故經DNA檢測出的番茄抗性材料仍需經田間接種檢驗證明具有相應的抗性后才能作為抗性育種種質材料使用。

參考文獻

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[2] 胡建坤，黃蓉，方榮，等.茄子種質資源對黃萎病的抗性鑒定[J].江西農業大學學報，2019，41（1）：68-73.

[3] 蘇春森. 茄子黃萎病發生規律及綜防技術[J].長江蔬菜，2000（5）：23-24.

[4] 劉晶晶. 茄子黃萎病病原菌分化、檢測及生物防治的研究[D].杭州：浙江大學，2019.

[5] 趙青春，趙娜，張力，等.嫁接對茄子生長發育和黃萎病抗性的影響[J].中國蔬菜，1997（6）：7-9.

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[8] 李穎儀，司雨，王怡玫，等.抗青枯病番茄嫁接砧木的篩選[J].長江蔬菜，2016（12）：48-51.

[9] 黃婷婷，吉玉玲，王媛，等.茄子抗黃萎病砧木97-16的嫁接抗病研究[J].中國農學通報，1999（4）：69-70，72.

[10] 荊子桓，王先裕，龍安四，等.廣西番茄砧木多抗材料篩選[J].中國蔬菜，2016（10）：28-32.