七鰓鰻Lja-SHP2分子鑒定、重組表達及免疫學(xué)研究

李歆，渠成名，韓英倫,2，劉欣,2，李慶偉,2

研究報告

七鰓鰻分子鑒定、重組表達及免疫學(xué)研究

李歆1，渠成名1，韓英倫1,2，劉欣1,2，李慶偉1,2

1. 遼寧師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，七鰓鰻研究中心，大連 116029 2. 大連工業(yè)大學(xué)，海洋食品精深加工關(guān)鍵技術(shù)省部共建協(xié)同創(chuàng)新中心，大連 116034

高等脊椎動物的蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2(SH2 domain-containing protein-tyrosine phosphatase-2)由基因編碼，催化酪氨酸殘基去磷酸化，與其他能催化酪氨酸磷酸化的蛋白酪氨酸激酶共同調(diào)節(jié)機體內(nèi)多種信號通路的信號傳導(dǎo)。以往研究表明，SHP2在高等脊椎動物T細胞和B細胞的激活與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中起著重要作用。為了研究無頜類脊椎動物日本七鰓鰻()中與SHP2同源的分子——在免疫應(yīng)答反應(yīng)中的作用，本研究通過PCR 擴增獲取其開放閱讀框序列，并構(gòu)建到原核表達載體 pET-32a中，成功在大腸桿菌中實現(xiàn)重組蛋白表達并制備了其兔源多克隆抗體。用混合菌免疫刺激日本七鰓鰻后，通過實時熒光定量PCR和免疫印跡方法檢測了在日本七鰓鰻免疫相關(guān)組織中mRNA和蛋白水平表達譜。結(jié)果顯示，混合菌免疫刺激后，mRNA和蛋白表達在外周血白細胞和髓樣小體中無顯著變化，而在鰓組織中顯著性上調(diào)(<0.05)，說明Lja-SHP2在混合菌刺激后主要參與了鰓組織的免疫應(yīng)答反應(yīng)。為了進一步探究Lja-SHP2與淋巴細胞亞群免疫應(yīng)答反應(yīng)的相關(guān)性，本研究分別使用B細胞有絲分裂原脂多糖(lipopolysa-ccharide, LPS)和T細胞的有絲分裂原植物凝集素(phytohemagglutinin, PHA)免疫刺激日本七鰓鰻。經(jīng)LPS免疫刺激后，與對照組相比，白細胞中Lja-SHP2蛋白表達顯著上調(diào)，鰓組織和髓樣小體沒有顯著性差異表達；但經(jīng)PHA免疫刺激后，與對照組相比，白細胞、鰓組織和髓樣小體3種組織中Lja-SHP2均有上調(diào)，尤其在白細胞中上調(diào)最為顯著，大約是對照組的2.5倍，說明Lja-SHP2參與了日本七鰓鰻由PHA介導(dǎo)的免疫應(yīng)答反應(yīng)。由于PHA能刺激日本七鰓鰻鰓組織中VLRA+淋巴細胞的活化，這表明Lja-SHP2可能參與了PHA介導(dǎo)的VLRA+淋巴細胞亞群的免疫應(yīng)答反應(yīng)。上述研究結(jié)果為進一步探索Lja-SHP2在七鰓鰻免疫應(yīng)答過程中的功能奠定了基礎(chǔ)，也為揭示SHP2分子家族的系統(tǒng)發(fā)生及探索高等脊椎動物適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的早期發(fā)生及其進化歷程提供一定的線索。

日本七鰓鰻；Lja-SHP2；抗體制備；免疫應(yīng)答

蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phospha-tases, PTPs)具有催化蛋白酪氨酸殘基去磷酸化的功能，與能夠催化蛋白酪氨酸磷酸化的蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinases, PTKs)作用相反。在兩者的共同作用下，蛋白酪氨酸殘基發(fā)生可逆磷酸化，從而可以調(diào)節(jié)細胞膜酶聯(lián)受體的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，對生物的生長發(fā)育具有重要意義[1,2]。……