地桃花不同部位中銀鍛苷的含量比較

陳貴，夏稷子，史娟，鄧言歡，王濤，張華，盧婭玲

(黔南州檢驗(yàn)檢測(cè)院，貴州 都勻 558000)

地桃花為錦葵科梵天花屬植物地桃花UrenalobataL.的干燥根、地上部分或全草，具有清熱解毒、活血消腫、祛風(fēng)利濕的功效，主治感冒、痢疾、帶下、月經(jīng)不調(diào)、喉痹等[1-3]。地桃花主含黃酮、有機(jī)酸及多酚類成分，其黃酮類中的銀鍛苷具有顯著的抗氧化和抗炎作用[4-5]。蘇聰?shù)萚6]研究表明，廣西和廣東不同地區(qū)地桃花地上部分中銀鍛苷的含量差別較大，考慮為不同莖葉比造成，但未考察銀鍛苷在地桃花各部位中的分布差異。本研究建立了HPLC方法對(duì)貴州不同采集地、不同部位地桃花中的銀鍛苷含量進(jìn)行比較，為更加合理制定地桃花質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 儀器與材料

LC-2010A型高效液相色譜儀(日本島津公司)；AG135型電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)；BSA224S型電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)；HH-6型數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州國華電器有限公司)。銀鍛苷對(duì)照品(批號(hào)：170305，含有量99.34%，北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司)；乙腈為色譜純；水為哇哈哈純凈水；其余試劑為分析純。地桃花樣品采于貴州丹寨、安順、盤縣等地，經(jīng)貴州省食品藥品檢驗(yàn)所中藥標(biāo)本館李楊館長鑒定為錦葵科植物地桃花UrenalobataL.的干燥全草。具體樣品信息見表1。

表1 地桃花樣品信息

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[7]

島津InertSustain?C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相為乙腈-0.1%冰醋酸溶液(22∶78)；柱溫30 ℃；檢測(cè)波長315 nm；體積流量1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量為10 μL。在此條件下，不同部位樣品中銀鍛苷與相鄰成分的分離度均大于1.5，其理論塔板數(shù)均大于6 000，HPLC色譜見圖1。

注：A.對(duì)照品；B-E.地桃花不同部位樣品(B.根；C.莖；D.葉；E.果實(shí))；1.銀鍛苷

圖1 地桃花不同部位樣品HPLC色譜

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取銀鍛苷對(duì)照品，加入80%甲醇制成每1 mL含銀鍛苷238.2 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取各部位地桃花粉末(過三號(hào)篩)約1 g，精密加入80%甲醇25 mL，稱重后置水浴上加熱回流提取1 h，放冷，加入80%甲醇補(bǔ)足減失的重量，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。

2.4 方法學(xué)考察[7]

取“2.2“項(xiàng)下對(duì)照品溶液制備不同稀釋濃度對(duì)照品溶液，測(cè)定其峰面積后，以銀鍛苷質(zhì)量濃度(X)對(duì)峰面積(Y)作線性回歸，得回歸方程為Y=31 242X+475(r=1.000 0)，線性范圍為0.4764～238.2 μg·mL-1。精密度試驗(yàn)：將同一稀釋濃度對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，銀鍛苷峰面積的RSD為0.14%，表明儀器具有良好的精密度。穩(wěn)定性試驗(yàn)：分別測(cè)定供試品溶液制備后0、2、4、6、12和24 h銀鍛苷的含量，結(jié)果其含量的RSD為0.56%，表明供試品溶液在制備后24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。重復(fù)性試驗(yàn)：6份平行樣品中銀鍛苷含量的RSD為0.28%，表明該方法的重復(fù)性良好。加樣回收率試驗(yàn)銀鍛苷平均回收率為99.2%，RSD為2.34%，回收率符合要求。

2.5 樣品測(cè)定

分別取不同采集地、不同部位的地桃花粉末約1 g，每個(gè)樣品照“2.3”項(xiàng)下方法平行制備3份供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件外標(biāo)法測(cè)定其銀鍛苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 不同采集地不同部位地桃花中銀鍛苷的含量測(cè)定結(jié)果 (n=3)

3 討論

含量測(cè)定結(jié)果顯示，不同采集地地桃花相同部位的銀鍛苷含量存在一定差別，采用SPSS 18.0軟件分析得出貴州荔波產(chǎn)地桃花莖和葉測(cè)定結(jié)果為離群值，這可能與不同生長環(huán)境有關(guān)。同一采集地不同部位之間也存在較大差異，其分布規(guī)律為果實(shí)>葉>莖>根，其中根部少含或幾乎不含；莖中含量較少，大部分含量低于萬分之一；葉和果實(shí)中含量較高。因此，銀鍛苷用于地桃花葉或果實(shí)的質(zhì)量控制更具意義。若用于地上部分或全草的含量測(cè)定，則應(yīng)注意含量限度確定的科學(xué)性和合理性，同時(shí)應(yīng)注意取樣的均勻性和代表性。