一例犬口腔纖維肉瘤的病理學(xué)診斷

楊禹治 任義軍 安玉婷

摘要 通過對一例突然出現(xiàn)吞咽困難、口腔流血的病犬進行臨床檢查，發(fā)現(xiàn)下頜骨的硬顎位置出現(xiàn)一個雞蛋大小的肉瘤樣組織，瘤體組織呈浸潤生長，質(zhì)地堅硬，手術(shù)切除后發(fā)現(xiàn)切面呈粉紅色、魚肉樣。對切除組織進行組織病理學(xué)檢查，切片顯示腫瘤細胞多呈現(xiàn)梭狀和三角狀，細胞大小和形態(tài)不一，主要成分為成纖維細胞，細胞成分豐富，細胞排列紊亂，細胞核染色深淺不一，少量有核分裂相。手術(shù)后經(jīng)化療藥物治療14 d，很快又出現(xiàn)復(fù)發(fā)。綜合以上結(jié)果，確診該病犬患惡性口腔纖維肉瘤。

關(guān)鍵詞 犬;纖維肉瘤;組織病理學(xué);診斷

中圖分類號 S852.3 ?文獻標(biāo)識碼 A ?文章編號 0517-6611（2020）05-0103-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.05.028

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

Abstract By clinical examination of a dog that suddenly had the symptom of dysphagia and oral bleeding， a sarcomatoid tissue with the size of an egg was found on the hard palate of mandible， and the tumor tissue was infiltrating and hard after surgical resection. The cut surface was pink and fishlike. There histopathological examination was done for the removal tissues， the section showed the tumor cells are fusiform and triangular， cells size and shape varied. The main ingredient was fibroblast， the cell components were abundant and disorder， nuclear was staining unevenly， there was a small amount of mitosis. Through chemotherapy treatment for two weeks after surgery， the tumor soon recurred. Considering the above results， it was diagnosed as malignant oral Fibrosarcoma.

Key words Canine;Fibrosarcoma;Histopathology;Diagnosis

腫瘤是一種異常的組織團塊或細胞群，與正常的組織相比，其生長過速而且不協(xié)調(diào)，且當(dāng)引起癌變的刺激停止后仍可繼續(xù)生長[1]。腫瘤是動物機體在內(nèi)外因素作用下產(chǎn)生的，腫瘤的種類繁多，形態(tài)各異，有的形成腫塊，有的在組織中浸潤生長，破壞了正常的組織結(jié)構(gòu)，惡性腫瘤常發(fā)生轉(zhuǎn)移甚至危及動物生命。寵物腫瘤種類很多，從發(fā)生部位來看，犬皮膚腫瘤占首位，其次是乳腺瘤。每年犬患惡性腫瘤的比例為381.2×10-8，貓患惡性腫瘤為15.58%。某些品種犬惡性腫瘤發(fā)生在斗牛犬、圣伯納犬、大丹犬、拳師犬等[2-3]。在臨床上常見的病例發(fā)生于犬的口腔部位。筆者發(fā)現(xiàn)一犬患有口腔腫瘤病，通過對其發(fā)病部位、形態(tài)特征和實驗室病理切片檢查等，綜合診斷為犬惡性口腔纖維肉瘤。筆者對犬纖維肉瘤形態(tài)結(jié)構(gòu)和組織病理學(xué)特性進行了探討，并開展治療試驗，旨在為犬纖維肉瘤的相關(guān)研究和治療提供依據(jù)和積累經(jīng)驗。

1 材料與方法

1.1 病犬來源

患犬年齡2歲，體重30 kg，品種為德國牧羊犬，性別為雄性，主要表現(xiàn)為口腔內(nèi)有一腫瘤樣組織，后經(jīng)常規(guī)手術(shù)切除。

1.2 試劑與器械

福爾馬林（購自江蘇丹陽市埤城化工廠，型號XK13-201-0481-020）;正丁醇（購自上?；瘜W(xué)試劑有限公司，型號XK13-2010279-081）;組織切片機（購自華納-蘭伯特技術(shù)公司，型號A0820）;蘇木精染色液及伊紅染色液（由揚州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院病理教研組自行配制并提供）。

1.3 病理切片的制作方法

1.3.1 取材。取0.5 cm×0.5 cm×0.2 cm的病料，浸泡在10%福爾馬林中固定。

1.3.2 固定。放置組織塊體積10倍的甲醛水溶液（10%福爾馬林）固定26～36 h。

1.3.3 水洗。取出組織放入燒杯中，以單層紗布封閉燒杯口，置慢速水流下浸泡10～24 h。

1.3.4 脫水。先放入70%的乙醇脫水2～4 h后，放入80%乙醇中脫水2～4 h，再在90%乙醇中脫水2～4 h后，放入無水乙醇中脫水2 h，最后放入另一無水乙醇中脫水2 h。

1.3.5 透明。將組織放入二甲苯溶液中10 min，取出放入另一二甲苯溶液中10 min。

1.3.6 浸蠟與包埋。組織透明后，放入熔化的石蠟（60 ℃）內(nèi)浸漬，使石蠟滲入組織同時取代組織的二甲苯，浸蠟時間2～4 h，在此期間換1次石蠟將熔化好的石蠟倒入包埋框，將組織的切面朝下放置，將準(zhǔn)備好的標(biāo)簽放在未凝固的石蠟上面，冷卻，完全凝固后修整蠟塊，溫室放置過夜后進行冷凍[4]。

1.3.7 切片。將從冷凍冰箱中取出的蠟塊固定于切片機上，進行切片，厚度4～6 μm。

1.3.8 展片、撈片。將切好的切片放入30 ℃左右的溫水中進行展平，展平后用洗干凈的玻片撈起切片，放入40 ℃水中5 min后撈起。

1.3.9 烤片。將切片至于干燥箱中24 h，調(diào)整溫度為60 ℃繼續(xù)烤片1 h。

1.3.10 染色。采用HE染色法進行染色：二甲苯Ⅰ（10 min），二甲苯Ⅱ（10 min），無水乙醇（1 min），95%乙醇（1 min），85%乙醇（1 min），75%乙醇（1 min），自來水沖洗（3 min），蘇木精（5 min），流水沖洗（3 min），1%的鹽酸乙醇（1 s），5%氨水返藍1 min，自來水沖洗10 min，伊紅（1 min），自來水沖洗若干次。

1.3.11 封片。切片給染色透明后，取出切片，拭去多余的二甲苯，滴1滴中性樹胺，將玻片蓋于切片上。

1.4 讀片

制作后的切片在光學(xué)顯微鏡下進行觀察，讀片。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床癥狀及手術(shù)后瘤體照片

2歲體重30 kg的德國牧羊犬，檢查體溫和呼吸均正常。主訴消瘦，食欲不振，15 d前發(fā)現(xiàn)左側(cè)嘴外腫脹，逐漸變大流血3～4 d。

檢查口腔下頜骨的硬顎位置出現(xiàn)一個雞蛋大小的肉瘤樣組織（圖1），并呈現(xiàn)浸潤生長，考慮可能為腫瘤，進行了手術(shù)切除，切除后發(fā)現(xiàn)腫瘤呈球形（圖2），質(zhì)地堅硬，基底與硬顎相連，出血多。

2.2 組織病理學(xué)檢查結(jié)果

犬口腔腫塊的切片，低倍鏡下可見腫瘤組織血管豐富，有出血（圖3A）。某些出血部位出血深入到內(nèi)部（圖3B），犬的口腔腫瘤由于口腔運動，造成表面和內(nèi)部出血以及炎癥（圖3C）。高倍鏡下，腫瘤組織的特征如下：有些部位腫瘤細胞處于幼稚階段，細胞核和細胞圓形，核淡染，空泡狀，細胞排列密集，尚未形成條索狀排列（圖3D）;有些部位腫瘤細胞呈現(xiàn)梭狀、三角狀或條索狀細胞，細胞核染色深淺不一，胞漿為粉紅色膠原蛋白，細胞之間交織成網(wǎng)狀。細胞核大小不一（圖3E）。但是，除了細胞多形態(tài)外，核分裂相對少見。腫瘤雖然是獨立存在的，其細胞成分主要是成纖維細胞，細胞成分豐富，細胞大小不一、形態(tài)不一，染色深淺不一，細胞排列紊亂，具備纖維肉瘤的形態(tài)學(xué)特征。

3 結(jié)論與討論

纖維肉瘤是一種纖維細胞的惡性腫瘤，是由惡性成纖維細胞和產(chǎn)生膠原的混合間質(zhì)細胞構(gòu)成，占皮膚腫瘤的9%～14%[5-6]。犬口腔纖維肉瘤是繼黑色素細胞瘤和鱗狀細胞癌之后，排名第三位常見的惡性腫瘤。常發(fā)生在1～12歲的犬上，平均發(fā)病年齡為8歲，多見于金毛尋獵犬、多伯曼平犬和德國牧羊犬等大型犬，尤其是雄性犬有多發(fā)傾向。該病病因不明，或與病毒有關(guān)。

犬口腔纖維肉瘤常見部位是犬齒和肉齒之間的硬腭和上頜骨齒齦[7]，表現(xiàn)為一種堅實、新鮮的腫瘤，瘤體呈節(jié)狀、分葉狀或不規(guī)則形，與周圍組織界限清楚，有時還見有包膜;質(zhì)地比正常的組織稍硬;大小數(shù)量不一;切面呈粉紅色或灰白色，均質(zhì)似魚肉樣。出現(xiàn)的癥狀決定于腫瘤位置和大小伴有吞咽困難、流涎、厭食或食欲不振，口臭，夸張的咀嚼動作或咀嚼困難，或用爪子抓嘴等癥狀。纖維肉瘤與很多的腫瘤癌癥有相似之處（鱗狀細胞癌、惡性黑色素細胞瘤、血管肉瘤、其他口腔腫瘤），所以鑒別它們是非常重要的。該病診斷時要依據(jù)犬的年齡、品種、性別和位置特點也可結(jié)合X光片和CT進行診斷。但是，最后確診還需要依靠切除的組織進行組織病理學(xué)檢查確診[8]。

纖維肉瘤之間的差異較大。分化程度高、惡性程度低的纖維肉瘤與纖維瘤相近;分化程度低、惡性程度高的纖維肉瘤與纖維瘤有明顯差異。表現(xiàn)為瘤細胞大小不等，瘤巨細胞多見;瘤細胞形態(tài)不一，多形性顯著;瘤細胞核染色深，常有核分裂相;瘤細胞多，而膠原纖維很少。異型性最大的纖維肉瘤，瘤細胞呈梭形或比較短胖，此時很難同間變癌區(qū)別。大多數(shù)纖維肉瘤的基質(zhì)很細致，血管較多。貓纖維肉瘤較犬多發(fā)。

對于該病的治療，大多采用手術(shù)切除、輔助化學(xué)治療的方法。但是纖維肉瘤對放化療不敏感，且復(fù)發(fā)率高[9-10]。手術(shù)后，也采用注射環(huán)磷酰氨及阿糖胞苷的方法進行治療，但14 d后又出現(xiàn)復(fù)發(fā)現(xiàn)象，因此目前尚沒有一個有效的治愈腫瘤的方法。人類醫(yī)學(xué)上目前大多采用聯(lián)合治療的方法，即生物治療與放化療法相結(jié)合。其中，生物治療的前沿技術(shù)有生物細胞免疫治療、基因治療、癌癥干細胞靶向治療等，目前臨床上比較成熟的生物治療方法是生物細胞免疫治療。生物細胞免疫治療是一種新興的、具有顯著療效的腫瘤治療模式，是一種自身免疫抗癌的新型治療方法。生物治療是繼手術(shù)、放療和化療之后的第四大腫瘤治療技術(shù)[11]。據(jù)報道，通過此方法在哈爾濱成功治愈了1例結(jié)腸癌病例，但今后病例治療中具體還需根據(jù)病畜的病情而定。

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