高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法建立同時(shí)測(cè)定肌肉組織中4種藥物殘留的方法及其確認(rèn)

夏玲玲

摘 ?要：目的 ?研究與分析高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法建立同時(shí)測(cè)定肌肉組織中4種藥物殘留的方法及其確認(rèn)情況。方法 ?采取高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析方法來(lái)同時(shí)建立測(cè)定肌肉組織中新霉素、多黏菌素B、灰黃霉素、喹乙醇以及其代謝物3-甲基喹啉-2-羧酸，同時(shí)采取外標(biāo)法定量。結(jié)果 ?在質(zhì)量濃度1.0～200.0g/L范圍內(nèi)，4種藥物均表現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，且R2均超過(guò)0.9980。喹乙醇及MQCA的方法檢出限為0.5g/kg，灰黃霉素、新霉素以及多黏菌素B的方法檢出限為5.0g/kg，4種藥物在陰性樣品中的加標(biāo)回收率為82.1%～98.5%。結(jié)論 ?采取高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法來(lái)進(jìn)行處理，操作簡(jiǎn)單便捷，對(duì)結(jié)果干擾性較小，可以加以廣泛應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 ?肌肉組織 ?藥物殘留

中圖分類號(hào)：X824 ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-3791（2020）01（c）-0230-02

隨著藥物的濫用，在動(dòng)物肌肉組織中會(huì)殘留很多藥物，目前已經(jīng)有部分報(bào)道了灰黃霉素、喹乙醇、黏菌素以及新霉素等藥物的檢測(cè)方法，很多法律法規(guī)也對(duì)各類藥物的檢測(cè)方法進(jìn)行了規(guī)定[1]。該文對(duì)高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法建立同時(shí)測(cè)定肌肉組織中4種藥物殘留的方法及其確認(rèn)情況進(jìn)行研究與分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1. 材料與方法

1.1 材料和試劑

試驗(yàn)樣品選取購(gòu)買自市場(chǎng)的8份豬肉，4份兔肉以及8份雞肉。試劑選取德國(guó)Dr.Ehrenstorfe公司生產(chǎn)的純度>99.0%的MQCA、純度>99.0%的喹乙醇、純度>84.0%的硫酸多黏菌素B、純度>98.0%的灰黃霉素、純度>90.0%的硫酸新霉素標(biāo)準(zhǔn)品。德國(guó)Merck公司生產(chǎn)的乙腈以及甲醇。此次試驗(yàn)均為超純水，同時(shí)該實(shí)驗(yàn)使用甲酸為上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司生產(chǎn)，分析純?yōu)閺V州化學(xué)試劑廠生產(chǎn)。

1.2 儀器與設(shè)備

德國(guó)CNW公司生產(chǎn)的200mg、6mL HLB固相萃取小柱，德國(guó)IKA公司生產(chǎn)的T18高速均質(zhì)機(jī)以及MS3 Basic漩渦振蕩器，美國(guó)Agilent公司生產(chǎn)的6490串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜儀以及1260超高效液相色譜儀，昆山市超聲儀器有限公司生產(chǎn)的250W KQ-250DV超聲波清洗儀，美國(guó)Millipore公司生產(chǎn)的Milli-Q純水儀，KDC-1044離心機(jī)采用由北京中科佳儀科技有限公司生產(chǎn)的儀器。

1.3 方法

1.3.1 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

準(zhǔn)確稱取10.0mg5種標(biāo)準(zhǔn)品，放置于100mL的棕色容量瓶中，溶解標(biāo)準(zhǔn)品采用50∶50，V/V10mL乙腈-1%甲酸水溶液，采用乙腈進(jìn)行定容處理，將5種單標(biāo)儲(chǔ)備液分別吸取1.0mL，隨后定容至100mL，隨后得到混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。在-18℃條件下保存標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.2 樣品處理

（1）提取。

首先切碎肌肉組織，隨后將其打碎，混合均勻，將均質(zhì)后的5.00g樣品放置在塑料離心管（50mL）內(nèi)，向其內(nèi)加入提取溶劑10mL，隨后進(jìn)行渦旋，渦旋時(shí)間為1min，在超聲提取10min，離心速度為4000r/min，離心時(shí)間為3min，向25mL比色管中加入上清液，隨后進(jìn)行重復(fù)提取，合并2次對(duì)上清液進(jìn)行提取，使用提取溶劑進(jìn)行定容，需要定容至25.0mL，隨后進(jìn)行搖勻，待凈化[2-3]。

（2）凈化。

預(yù)先將HLB固相萃取柱進(jìn)行活化，活化采取超純水10mL，甲醇5mL，待完全流出液體后，對(duì)固相萃取柱采用5mL超純水淋洗，隨后進(jìn)行減壓抽干處理，目標(biāo)化合物采用10mL凈化洗脫液進(jìn)行洗脫，洗脫完畢后將其放置于15mL離心管內(nèi)，將洗脫液用氮?dú)庠?0℃條件下濃縮至近干。采用1.0mL初始流動(dòng)相溶解濃縮物，采取0.22m濾膜來(lái)進(jìn)行過(guò)濾處理，測(cè)定采用HPLC-MS/MS[4-5]。50℃條件下將洗脫液用氮?dú)鉂饪s至近干。濃縮物采用1.0mL初始流動(dòng)相溶解，過(guò)濾采取0.22m濾膜，最后采用HPLC-MS/MS進(jìn)行測(cè)定[4-5]。

2 ?結(jié)果

2.1 樣品提取和凈化條件的選擇

很多脂溶性的內(nèi)源性物質(zhì)存在于動(dòng)物肌肉組織內(nèi)，在檢測(cè)過(guò)程中這些物質(zhì)會(huì)對(duì)化合物的相應(yīng)產(chǎn)生影響，因此將干擾物質(zhì)采取合適的凈化方式和提取溶劑去除十分必要[6]。

2.1.1 選擇提取溶劑

極性較大的藥物包括新霉素、多黏菌素B和喹乙醇，可以使用極性溶劑進(jìn)行提取，而極性較小的藥物包括MQCA和灰黃霉素，可以使用有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，在酸性條件下多黏菌素B和新霉素具有較高的提取效率。此次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，喹乙醇、MQCA以及灰黃霉素可以通過(guò)單一有機(jī)溶劑體系來(lái)進(jìn)行提取，但是提取新霉素以及多黏菌素的效果較差，使用單一的5%甲酸水溶液來(lái)提取灰黃霉素幾乎沒(méi)有提取效果。

2.1.2 凈化洗脫液的選擇

利用固相萃取小柱凈化提取液，可以有效地去除雜質(zhì)，同時(shí)將基質(zhì)的干擾減少。此次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，采用體積分?jǐn)?shù)為20%和50%的乙腈來(lái)洗脫雜質(zhì)，具有較佳的去除效果，但是仍有30%和45%未被洗脫的灰黃霉素殘留，洗脫采用純乙腈洗脫液后，會(huì)具有較多的雜質(zhì)。而采取5%甲酸水-80%乙腈來(lái)進(jìn)行洗脫時(shí)，具有較少的雜質(zhì)，而藥物的回收率均超過(guò)80%，因此，最佳的洗脫液為10mL 5%甲酸水-80%乙腈。

2.2 線性方程和檢出限

在質(zhì)量濃度1.0～200.0g/L范圍內(nèi)，4種藥物均表現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，且R2均超過(guò)0.9980。喹乙醇及MQCA的方法檢出限為0.5g/kg，灰黃霉素、新霉素以及多黏菌素B的方法檢出限為5.0g/kg（見(jiàn)表1）。

2.3 回收率

4種藥物在陰性樣品中的加標(biāo)回收率為82.1%～98.5%。

3 ?結(jié)語(yǔ)

采取高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法來(lái)進(jìn)行處理，操作簡(jiǎn)單便捷，對(duì)結(jié)果干擾性較小，可以加以廣泛應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1] 寧霄，金紹明，高文超，等.QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源性食品中氟蟲(chóng)腈及其代謝物殘留[J].分析化學(xué)，2018，46（8）：1297-1305.

[2] 周廣運(yùn)，王桂姬，任皓威，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法鑒定豬肉的特異性肽生物標(biāo)志物[J].分析化學(xué)，2017，45（2）：205-210.

[3] 李文廷，瑞雨，師真，等.桑椹中11種真菌毒素的檢測(cè)分析[J].環(huán)境化學(xué)，2018，37（1）：185-187.

[4] 周理，鄒宇聰，張佩，等.急性非特異性腰痛的腰肌橫截面積、脂肪浸潤(rùn)與不對(duì)稱性及其臨床意義[J].中國(guó)疼痛醫(yī)學(xué)雜志，2017，23（2）：148-151.

[5] 吳紅然，陳雪曉，宋學(xué)琴，等.肯尼迪病一例患者的臨床表現(xiàn)、肌肉病理、基因檢測(cè)及其家系遺傳學(xué)分析[J].腦與神經(jīng)疾病雜志，2017，25（2）：107-110.

[6] 周艷芬，王芳煥，王澤嵐，等.串聯(lián)雙柱固相萃取-高效液相色譜-電噴霧多級(jí)質(zhì)譜法測(cè)定鹽酸二甲雙胍制劑中的鹽酸二甲雙胍及殘留物三聚氰胺和雙氰胺[J].色譜，2018，36（2）：159-166.