MAP2K4、SUMO-1、BRCA1 在年輕子宮內膜癌患者中的表達分析

萬 麗，李 可，康 玉，陳 行

(1.江西省樂平市婦幼保健院產科，江西 樂平 333300；2.上海市復旦大學附屬婦產科醫院婦科，上海 200011)

子宮內膜癌(endometrial cancer, EC)屬于婦科常見三大惡性腫瘤之一，發病率約占婦科惡性腫瘤的7%，占女性生殖道惡性腫瘤的20%～30%，同時呈現發病率逐年增高與發病人群年輕化的趨勢[1-3]。因該病早期一般無明顯臨床癥狀或癥狀無特異性，易被臨床醫生及患者忽視，疾病確診時多進展到中晚期，治療難度增加，預后差。尋找一種靈敏的早期篩查與病情、預后評價方法對指導臨床及時合理治療、改善患者預后具有重要意義。絲裂原活化蛋白激酶4(mitogen activated protein kinase 4, MAP2K4)能編碼MAP激酶信號家族基因，在激活情況下可促使p38或c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinas, JNK)產生磷酸化，并通過促進應激活化蛋白激酶途徑激活，參與細胞惡性轉化、凋亡等過程[4]。小類泛素化修飾蛋白(small ubiquitination modifying proteins, SUMO)為一類結構與生成、降解循環通路和泛素化蛋白類似，但功能不同的蛋白質翻譯后修飾蛋白，其經異肽鍵和靶蛋白結合后，可調控靶蛋白各種生物學功能，參與惡性腫瘤發生進展[5]。乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene 1, BRCA1)結構、功能異常與性激素有關的卵巢癌、乳腺癌發病密切相關，因為子宮內膜也屬于性激素作用器官，因此BRCA1可能在EC發病中也具有一定作用[6]。本研究選取年輕EC患者、子宮內膜非典型增生患者、子宮內膜正常患者各80例，旨在分析MAP2K4、SUMO-1、BRCA1在年輕EC患者中的表達及臨床意義，現報告如下。

1 研究對象與方法

1.1 研究對象

選取2005年11月至2014年3月復旦大學附屬婦產科醫院收治的80例年輕EC患者設為EC組，同期80例子宮內膜非典型增生患者設為非典型增生組、80例行子宮脫垂手術治療的子宮內膜正常患者設為正常組。其中EC組年齡在26～45歲，平均(38.95±4.92)歲；病理類型：漿液性癌3 例，透明細胞癌6 例，鱗腺癌10 例，子宮內膜腺癌61 例；國際婦產科聯盟(Intemational Federation of Gynecology and Obstetrics, FIGO)分期：Ⅲ～Ⅳ期19例，Ⅰ～Ⅱ期61例；組織分化程度：中低分化(G2～G3)41例，高分化(G1)39例；肌層浸潤深度：≥1/2者46例，＜1/2者34例；淋巴結轉移：有21例，無59例。非典型增生組年齡24～44歲，平均(38.16±4.05)歲。正常組年齡在24～45歲，平均(37.89±4.37)歲；子宮內膜類型：萎縮型內膜13例，分泌期內膜29例，增殖期內膜38例。3組年齡對比，無顯著差異(P＞0.05)，本研究經醫院倫理委員會同意。

1.2 病例納入標準

EC組經術后病理檢查證實為EC，術前未采取放化療；非典型增生組、正常組經手術病理檢查證實為子宮內膜非典型增生患者、子宮內膜正常患者；3組臨床資料完整，年齡均≤45歲，知曉本研究方案，自愿簽訂知情同意書。

1.3 病例排除標準

合并血液系統、免疫系統、神經系統疾病者；合并其他惡性腫瘤者；合并腎、肝、心等臟器功能嚴重障礙者；合并全身感染、腦血管疾病者。

1.4 檢測方法

①MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表達檢測：所有組織標本均以甲醛(4%)固定，并制作厚4μm的石蠟切片，以免疫組織化學SP法檢測組織中MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表達，試劑盒均購自北京中山金橋生物有限公司，有關操作由醫院專業檢測人員嚴格按照試劑盒說明書執行，一抗均依據1:100比例進行稀釋，將已知陽性片設為陽性對照，磷酸鹽緩沖液(PBS)替代一抗設為陰性對照。②結果判定：MAP2K4、SUMO-1蛋白主要是于細胞質內表達，有時在細胞核內表達，BRCA1蛋白在細胞質、細胞核內均有表達，陽性表現為細胞質與(或)細胞核內出現棕褐色、棕黃色或黃色顆粒，于400倍顯微鏡下對每張切片隨機選取10個高倍鏡視野，按照陽性染色細胞占比與染色強度實施評分，陽性染色細胞占比：＞50%計3分，26%～50%計2分，10%～25%計1分，＜10%計0分；染色強度：棕褐色計3分，棕黃色計2分，淡黃色計1分，不著色計0分，將陽性染色細胞占比與染色強度兩項評分相加，得分為0～1分為陰性，≥2分為陽性[7]。

1.5 觀察指標

①對比3 組子宮內膜組織MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表達情況；②分析MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表達與EC組患者臨床病理參數(病理類型、臨床分期、組織分化程度、肌層浸潤深度、淋巴結轉移)的關系； ③觀察MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表達與EC組患者5年生存率的關系。

1.6 統計學方法

所得研究數據納入SPSS 23.0軟件中處理，計數資料以[n(%)]表示，采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3 組子宮內膜組織MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表達比較

EC組子宮內膜組織MAP2K4、BRCA1表達低于非典型增生組、正常組(MAP2K4：χ2值分別32.89、50.26；BRCA1：χ2值分別14.48、60.67，均P ＜0.05)，SUMO-1表達高于非典型增生組、正常組(χ2值分別21.19、61.20，均P＜0.05)，見表1。

2.2 MAP2K4 表達與EC 組患者臨床病理參數的關系

MAP2K4表達與EC組患者病理類型之間無顯著相關性(P ＞0.05)；臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、組織分化程度為中低分化、肌層浸潤深度≥1/2、有淋巴結轉移EC組的患者MAP2K4表達均低于臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、組織分化程度為高分化、肌層浸潤深度＜1/2、無淋巴結轉移的患者(均P＜0.05)，見表2。

2.3 SUMO-1 表達與EC 組患者臨床病理參數的關系

SUMO-1表達與EC組患者病理類型之間無顯著相關性(P ＞0.05)；臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、組織分化程度為中低分化、肌層浸潤深度≥1/2、有淋巴結轉移EC組的患者SUMO-1表達均高于臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、組織分化程度為高分化、肌層浸潤深度＜1/2、無淋巴結轉移的患者(均P＜0.05)，見表3。

表1 3組患者子宮內膜組織MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表達比較[n(%)]Table 1 Comparison of the expression of MAP2K4, SUMO-1 and BRCA1 in endometrial tissues among the three groups[n(%)]

表2 MAP2K4表達與EC組患者臨床病理參數的關系[n(%)]Table 2 The relationship between MAP2K4 expression and pathological parameters in EC group [n(%)]

表3 SUMO-1表達與EC組患者臨床病理參數的關系[n(%)]Table 3 The relationship between SUMO-1 expression and pathological parameters in EC group [n(%)]

2.4 BRCA1 表達與EC 組患者臨床病理參數的關系

BRCA1表達與EC組患者病理類型之間無顯著相關性(P ＞0.05)；臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、組織分化程度為中低分化、肌層浸潤深度≥1/2、有淋巴結轉移的EC組患者BRCA1表達均低于臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、組織分化程度為高分化、肌層浸潤深度＜1/2、無淋巴結轉移的患者(均P＜0.05)，見表4。

表4 BRCA1表達與EC組患者臨床病理參數的關系[n(%)]Table 4 The relationship between BRCA1 expression and pathological parameters in EC group [n(%)]

2.5 MAP2K4、SUMO-1、BRCA1 表 達 與EC 組 患者5 年生存率的關系

MAP2K4、BRCA1在EC組織中呈陽性表達者5年生存率高于陰性表達者，SUMO-1在EC組織中呈陽性表達者5年生存率低于陰性表達者(均P＜0.05)，見表5。

表5 MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表達與EC組患者5年生存率的關系[%(n/N)]Table 5 The relationship between MAP2K4, SUMO-1 and BRCA1 expression and 5-year survival rate in EC group[%(n/N)]

3 討論

EC 屬于婦科常見惡性腫瘤，發病率及病死率較高，實現疾病早期防治對改善患者預后尤為重要[8-9]。臨床研究指出，EC發病是涉及多因素的生物學過程，體內存在多種腫瘤有關基因可參與調控，由于抑癌基因或癌基因調節細胞周期失常致使細胞出現癌變是EC發病重要機制[10-11]。

3.1 MAP2K4 與EC 的關系

MAP2K4為MAPK家族中一員，屬于一種抑癌基因，本研究顯示，EC 組子宮內膜組織MAP2K4 表達低于非典型增生組、正常組，且臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、組織分化程度為中低分化、肌層浸潤深度≥1/2、有淋巴結轉移的EC 患者MAP2K4 表達低于臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、組織分化程度為高分化、肌層浸潤 深度＜1/2、無淋巴結轉移的患者。表明EC患者子宮內膜組織中MAP2K4呈低表達，且表達同患者臨床分期、組織分化程度、肌層浸潤深度、淋巴結轉移等病理參數密切相關。MAP2K4基因位置處于第17號染色體，在MAPK的信號傳導途徑中起著重要作用，可激活p38 MAPK及JNK兩個下游目標，影響細胞病變及衰亡[12]。有研究發現，在人上皮性腫瘤尤其是乳腺癌與卵巢癌患者體內，MAP2K4可以7%～10%速率丟失，作為一種抑癌基因，可對乳腺癌、卵巢癌等腫瘤起到抑制作用[13]。張競[14]研究指出，EC組織內MAP2K4表達低于子宮內膜增生及子宮內膜正常患者，且表達與腫瘤臨床分期、分化程度等密切相關。亦提示可將MAP2K4作為EC早期篩查、惡性程度判斷的重要依據。

3.2 SUMO 與EC 的關系

SUMO分子在進化中有高度保守性，廣泛存在于真菌、植物、動物中，SUMO化修飾過程包括分離、連結、綴合、激活、成熟等步驟[15]。本研究結果中，EC組子宮內膜組織SUMO-1表達高于非典型增生組、正常組，且臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、組織分化程度為中低分化、肌層浸潤深度≥1/2、有淋巴結轉移的EC患者SUMO-1表達高于臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、組織分化程度為高分化、肌層浸潤深度＜1/2、無淋巴結轉移的患者。表明EC患者子宮內膜組織中SUMO呈高表達，且表達與患者臨床分期、組織分化程度、肌層浸潤深度、淋巴結轉移等病理參數密切相關。韓志堅等[16]研究指出，p53、鼠雙微體2(mouse bimicrosome 2, MDM2)、早幼粒細胞性白血病基因(promyelocytic leukemia gene, PML)等癌基因及抑癌基因的功能均可受到SUMO化修飾調節，SUMO化修飾在癌癥發生、進展、轉移中均扮演著重要角色。同時，相關研究報道，SUMO-1可調控雌激素受體α(estrogen receptor alpha, ERα)蛋白及其他多組蛋白質表達及功能，以此促進EC發生、進展[17]。亦說明SUMO-1在EC發生、進展中起著重要作用。

3.3 BRCA1 與EC 的關系

BRCA1 為遺傳性卵巢癌、乳腺癌易感基因，且屬于抑癌基因之一，本研究中，EC 組子宮內膜組織BRCA1 表達低于非典型增生組、正常組，臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、組織分化程度為中低分化、肌層浸潤 深度≥1/2、有淋巴結轉移的EC患者BRCA1表達低于臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、組織分化程度為高分化、肌層浸潤深度＜1/2、無淋巴結轉移的患者。說明EC患者子宮內膜組織中BRCA1呈低表達，且表達與患者臨床分期、組織分化程度、肌層浸潤深度、淋巴結轉移等病理參數具有密切關系。有研究指出，BRCA1在DNA雙鏈斷裂修復過程中發揮著重要作用，可參與DNA形成與蛋白表達、保持基因組的穩定性、細胞程序性衰亡、細胞增殖等過程[18]。若BRCA1產生基因突變可致使細胞基因穩定性受到破壞，對外界環境變化的敏感性增高，且可干擾機體內DNA損傷監測，影響細胞中DNA損傷修復，從而造成基因表達產物發生改變，例如，無法產生蛋白產物或蛋白缺陷，會使抑制腫瘤作用減弱，進而造成腫瘤發生、進展。趙寧等[19]研究亦表明，BRCA1基因突變與其蛋白表達降低具有顯著相關性，且其蛋白表達下降與EC發生、進展具有密切關系。

本研究還觀察了MAP2K4、SUMO-1、BRCA1與EC患者預后的關系，發現MAP2K4、BRCA1在EC組織中呈陽性表達者5年生存率高于陰性表達者，SUMO-1在EC組織中呈陽性表達者5年生存率低于陰性表達者。提示三者與患者生存率也有密切關系，其具體原因仍有待將來進一步探討。

綜上，MAP2K4、BRCA1在年輕EC患者中呈低表達，SUMO-1呈高表達，且三者表達與患者臨床分期、組織分化程度、肌層浸潤深度、淋巴結轉移等病理參數及生存率密切相關，可將其作為疾病惡性程度、預后評定的重要依據。