葫蘆素B 固體分散體的制備

程佳慧武 倩劉喜綱

（承德醫學院中藥研究所，河北省中藥研究與開發重點實驗室，河北 承德067000）

葫蘆素B 是葫蘆科植物中提取分離得到的一種四環三萜類化合物［1］，用于治療肝炎、肝癌等［2］，對卵巢癌［3］、乳腺癌［4］、胃癌［5］、肺癌［6］、直腸癌［7］等，表現出良好的藥理作用，有望成為有效的抗腫瘤藥物，但它在生物藥劑學分類系統中為第Ⅳ類藥物，即低溶解性-低滲透性藥物，在水中溶解度僅為22 μg／mL，絕對生物利用度僅為1.37%［8］，極大程度限制了臨床應用。目前，葫蘆素B 劑型有磷脂復合物［9-10］、水-醇凝膠［11］、脂肪乳注射劑［12］、納米混懸凝膠劑［13］、固體脂質納米粒［14-15］、納米膠束［16］等，其中固體分散技術簡單可行，易實現工業化生產。

固體分散體是指藥物以分子、膠態、微晶或無定形狀態分散在適宜載體材料中形成的固體分散體系，對藥物溶出度、生物利用度均有顯著提高。本實驗采用溶劑法制備葫蘆素B 固體分散體后，通過結晶抑制實驗篩選載體，對其溶出度進行考察，再通過SEM、XRD 等進行物相表征，以期為相關新劑型研發提供參考。

1 材料

Agilent 1260 高效液相色譜儀（美國Agilent 公司）；AG-254 電子分析天平、STARe SW 11.00 熱分析儀（瑞士梅特勒-托利多公司）；RC806 溶出試驗儀（天津市天大天發科技有限公司）；SU8020掃描電鏡（日本日立公司）；Nicolet 6700 紅外光譜儀（美國Thermo Nicolet 公司）；D8-Advance X 射線衍射儀（德國Bruker 公司）；KQ-1000E 超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

葫蘆素B 對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號111945-201301）；交聯聚乙烯吡咯烷酮（北京鳳禮精求醫藥股份有限公司，批號95314575L0）；PEG-4000（天津市光復精細化工研究所，批號20160310）；低取代羥丙基纖維素（湖州展望藥業，批號20160346）；PVPk30（德國BASF 公司，批號G53326PT0）。乙腈、磷酸為色譜純（美國邁瑞達公司）；其他試劑均為分析純；水為蒸餾水。

2 方法與結果

2.1 樣品制備

2.1.1 固體分散體 采用溶劑法。按一定比例精密稱取葫蘆素B、載體適量，溶于適量二氯甲烷中，超聲完全溶解后混勻，50 ℃下減壓，揮去二氯甲烷，待呈黏稠狀后取出置干燥器中干燥24 h，研成細粉，即得，密封保存。

2.1.2 物理混合物 按一定比例精密稱取葫蘆素B、載體適量，置于研缽中混合均勻，即得，密封保存。

2.2 處方篩選

2.2.1 色譜條件 C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相乙腈-0.1% 磷酸（58∶42）；體積流量1.0 mL／min；柱溫30 ℃；檢測波長228 nm；進樣量10 μL。

2.2.2 藥載比篩選 根據預實驗結果，選擇PVP K30 作為載體，按1∶3、1∶5、1∶7、1∶11 比例精密稱取葫蘆素B、載體適量，按“2.1.1”項下工藝制備固體分散體。按照2015 年版《中國藥典》 第四部通則中0931 項下“溶出度與釋放度測定法”下槳法測定溶出度，取樣品（相當于原料藥3 mg）適量置于900 mL 純水中，介質溫度（37±0.5）℃，轉速100 r／min，于5、10、15、20、30，45，60 min 各取樣2 mL，0.45 μm 微孔濾膜過濾，補加同體積等溫溶出介質，續濾液在“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，結果見圖1。

由此可知，溶出60 min 時固體分散體累積溶出度明顯高于原料藥；隨著藥載比升高，累積溶出度也隨之增加，即1∶11 時溶出效果最優，與原料藥比較提高了277.2%，其次為1∶7。因此，選擇藥載比1∶11、1∶7 進行物相表征。

圖1 樣品溶出曲線Fig.1 Dissolution curves for samples

2.3 物相表征［17］

2.3.1 掃描電子顯微鏡（SEM）測定條件為電流10 mA，加速電壓5.0 kV，觀察原料藥、PVP K30、固體分散體（藥載比1∶7、1∶11）、物理混合物（藥載比1∶7、1∶11）外觀形貌和晶型結構，記錄圖像，結果見圖2。由此可知，原料藥（圖2A）以棱柱狀或錐狀結晶存在；PVP K30（圖2B）呈球狀或類球形，大小不完全相同；物理混合物（圖2D、2F）存在原料藥、PVP K30 球狀結構，表示只是藥物和載體的簡單混合；固體分散體（圖2C、2E）呈緊實的不規則團塊狀，與原料藥、PVP K30 顯微結構完全不同，而且原料藥晶體形狀消失。

2.3.2 傅里葉變換紅外光譜（FTIR）將原料藥、PVP K30、固體分散體（藥載比1∶7、1∶11）、物理混合物（藥載比1∶7、1∶11）與適量KBr 研磨、混勻后壓片，在4 000～500 cm-1波數范圍內進行掃描，結果見圖3。由此可知，原料藥存在2 個特征峰，分別是3 450 cm-1左右的羥基峰和1 718、1 693 cm-1處的酮基峰；PVP K30 由于共軛效應的存在，C＝O 的伸縮振動峰向低頻方向移動，出現在1 655 cm-1左右；物理混合物在3 450 cm-1左右仍存在原料藥特征峰，同時PVP K30 C＝O 的伸縮振動峰也清晰可見，表明它是兩者簡單疊加；固體分散體中原料藥羥基峰向低頻方向移動至3 420 cm-1，酮基峰由1 718、1 693 cm-1合并為單峰，向低頻方向移動而且峰變寬，與載體羰基峰基本重合，出現在1 650 cm-1處，未出現其他特征峰，表明原料藥與PVP K30 可能發生氫鍵相互作用。

圖2 樣品SEM 圖（×200）Fig.2 SEM images for samples（×200）

圖3 樣品FTIR 圖譜Fig.3 FTIR spectra for samples

2.3.3 差示掃描量熱（DSC）取原料藥、PVP K30、固體分散體（藥載比1∶7、1∶11）、物理混合物（藥載比1∶7、1∶11）適量，均勻放入鋁盤內，測定條件為升溫速度10 ℃／min，掃描溫度范圍30～400 ℃，樣品氣氮氣，結果見圖4。由此可知，原料藥特征熔點峰出現在181.57 ℃，與文獻報道一致；PVP K30 熔點峰出現在71.56 ℃；物理混合物中原料藥、PVP K30 特征熔點峰均存在，但前者強度變弱，表明其結晶度降低，但仍以晶體形式存在；固體分散體中未出現原料藥特征熔點峰，僅有PVP K30 的，表明原料藥晶型發生了改變。

圖4 樣品DSC 曲線Fig.4 DSC curves for samples

2.3.4 X 射線衍射（XRD）取葫蘆素B、PVP K30、固體分散體（藥載比1∶7、1∶11）、物理混合物（藥載比1∶7、1∶11）適量，測定條件為波長（Cu 靶）1.540 6 nm，工作電流40 mA，工作電壓40 kV，掃描范圍3°～50°，結果見圖5。由此可知，原料藥在6.80°、7.22°、13.15°、13.60°、16.65°、17.62°、20.77°等處均存在晶體峰；PVP K30 峰較寬而平緩，無晶型結構存在，為無定形結構；物理混合物（藥載比1∶ 7）在7.22°、13.15°、16.69°、17.62°、20.77°仍可見強度變弱的原料藥特征峰，表明原料藥仍以晶體形式存在；物理混合物（藥載比1∶11）中原料藥特征峰不明顯，可能是其濃度較低所致；固體分散體中未發現原料藥晶體衍射峰，表明它可能以無定形狀態存在。

圖5 樣品XRD 圖譜Fig.5 XRD patterns for samples

3 討論

葫蘆素B 難溶于水，生物利用度較低，而將其制備成固體分散體時可在一定程度上改善這些問題。本實驗考察了PVPP、PEG-4000、低取代羥丙基纖維素、PVP K30 這4 種常用載體，通過比較四者抑晶效果，篩選出最佳載體為PVP K30。

制備固體分散體時選擇二氯甲烷作為溶劑，它對葫蘆素B 的溶解性較好，同時揮發性優于無水乙醇，故在制備過程中既能保證該成分和載體完全溶解，又可使溶劑用量較少。結果表明，葫蘆素B制成固體分散體后溶出度高于原料藥；在一定范圍內其溶出度隨載體比例的增大而升高，可能是因為它在載體PVP K30 中為無定形狀態，從而分散度得到提高；它可能以無定形狀態存在，改變了原有晶體結構，故在很大程度上提高了累積溶出度。

綜上所述，以PVP K30 為載體、1∶11 為藥載比時，葫蘆素B 固體分散體的體外溶出度顯著提高，對相關制劑開發具有一定應用價值。