叉頭框轉錄因子M1和轉移相關基因1蛋白在非小細胞肺癌中的表達及其與臨床特征和預后的相關性分析

楊 昕，劉 芳，杜 靜，張繼朋

肺癌發病率、病死率位居惡性腫瘤首位，是一個嚴重影響人群健康和生活質量的公共衛生問題。非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer， NSCLC)是肺癌最常見類型，占肺癌的80%～85%[1]。手術是早期NSCLC的首選治療手段，而治療失敗的原因主要為腫瘤晚期轉移及惡性程度較高所致，其中腫瘤轉移是多種因素引發的生物學行為。腫瘤轉移涉及多個基因產物，其中轉移相關基因1蛋白(crosshead box transcription factor M1， MTA1)、叉頭框轉錄因子M1(transfer related gene 1 protein， FOXM1)在腫瘤的發生、發展中起著重要作用，有望成為腫瘤治療的新靶點。本研究探討FOXM1和MTA1在NSCLC中的表達及其與臨床特征和預后的相關性，現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2012年6月—2014年2月陜西中醫藥大學第二附屬醫院收治的符合納入及排除標準的行手術治療的86例NSCLC，其中男63例，女23例；年齡25～81(63.15±6.93)歲；病程6個月～1.1年，平均7.69個月；腫瘤直徑1.36～6.58 cm，平均3.96 cm；TNM分期為Ⅰ期16例，Ⅱ期20例，Ⅲ期31例，Ⅳ期19例；吸煙72例；術后接受放療21例，接受化療11例；腫瘤部位為左肺41例，右肺45例；腫瘤分化程度為低分化25例，中分化43例，高分化18例。本研究經醫院倫理委員會批準。

1.2納入及排除標準

1.2.1納入標準：①所有患者均符合NSCLC診斷標準[2]；②所有患者均行手術治療，術中及術后均經病理學檢查確診為NSCLC。

1.2.2排除標準：①合并血液系統或免疫系統疾病者；②存在其他部位惡性腫瘤者；③有嚴重原發性肝腎功能不全者；④臨床資料不完整或缺乏準確性者。

1.3觀察指標 記錄患者的臨床資料，包括年齡、性別、TNM分期、吸煙史、腫瘤部位等，檢測FOXM1、MTA1表達情況，隨訪5年(電話隨訪、短信隨訪及回院復查)，觀察疾病轉移(復查影像學結果發現轉移病灶)、預后情況，分析FOXM1、MTA1表達與NSCLC患者臨床特征的關系。

1.3.1FOXM1檢測：所有患者手術切除病灶常規固定制作石蠟標本，切成厚4 μm薄片，采用SP法進行免疫組織化學染色(免疫組化)，操作步驟參考美國Santa Cruz公司的試劑盒說明書，同時利用磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。若FOXM1胞核或胞質出現棕黃色顆粒即為陽性細胞。所有免疫組化結果均由兩位病理科醫師在雙盲條件下進行獨立判斷，按照文獻[3]進行染色判讀，將(-)和(+)計為陰性，(++)計為弱陽性，(+++)計為強陽性，并將弱陽性和強陽性計為陽性。

1.3.2MTA1檢測：所有患者手術切除病灶常規固定制作石蠟標本，切成厚4 μm薄片，標本常規脫蠟脫水，經高壓抗原修復2 min，抗原修復液為枸櫞酸鹽緩沖液，3%過氧化氫溶液作用10 min以阻斷內源性過氧化物酶活性，鼠抗人MTA1多克隆抗體按1∶100稀釋后于4℃環境下孵育過夜，次日取出后于室溫恢復30 min，磷酸鹽緩沖液清洗，滴加即用型二抗，37℃作用30 min后用磷酸鹽緩沖液清洗，DAB染色，復染后封片，置于高倍顯微鏡下觀察。用已知MTA1陽性表達的NSCLC組織作為陽性對照，磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。鼠抗人MTA1多克隆抗體來源于美國Abcam公司，兔抗鼠二抗及DAB顯色液購自邁新生物技術公司。MTA1陽性表達為細胞核出現棕黃色顆粒，根據免疫組化結果進行半定量分析計數[4]，若≤6分為低表達，>6分為高表達。

2 結果

2.1免疫組化結果 FOXM1陽性表達76例，陰性表達10例，陽性率為88.37%，其中強陽性52例，弱陽性24例；MTA1高表達68例，低表達18例，高表達率為79.07%。34例生存，52例死亡，生存率39.53%。

2.2FOXM1、MTA1在NSCLC患者不同臨床特征中的表達情況 是否吸煙、腫瘤分化程度、是否發生遠處轉移的NSCLC患者FOXM1表達情況比較差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01)，是否吸煙、不同TNM分期、不同腫瘤直徑、不同腫瘤分化程度、是否發生遠處轉移的NSCLC患者MTA1表達情況比較差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01)。見表1。

表1 FOXM1、MTA1在NSCLC患者不同臨床特征中的表達情況

注：FOXM1指叉頭框轉錄因子M1，MTA1指轉移相關基因1蛋白，NSCLC指非小細胞肺癌

2.3影響NSCLC患者預后的單因素分析 單因素分析顯示，年齡、是否吸煙、TNM分期、腫瘤直徑、腫瘤分化程度、是否發生遠處轉移、FOXM1及MTA1表達情況是影響NSCLC患者預后的相關因素(P<0.05或P<0.01)。見表2。

2.4影響NSCLC患者預后的多因素分析 多因素logistic回歸分析顯示，年齡≤60歲、吸煙、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤直徑>3 cm、腫瘤分化程度低分化、發生遠處轉移、FOXM1表達陽性、MTA1高表達為影響NSCLC患者預后的獨立危險因素(P<0.05或P<0.01)。見表3。

表2 影響NSCLC患者預后的單因素分析[例(%)]

注：NSCLC指非小細胞肺癌，FOXM1指叉頭框轉錄因子M1，MTA1指轉移相關基因1蛋白

3 討論

肺癌是我國發病率、病死率最高的惡性腫瘤，全球肺癌的發病率占患癌總數的15%，且呈逐年上升趨勢。肺癌早期無特征性臨床表現，早期正確診斷率低，晚期肺癌患者往往已不能行根治性手術治療或手術治療后易復發，直接影響患者的生存時間[5-8]。有研究認為，腫瘤組織中FOXM1表達與肺癌臨床病理因素存在一定相關性[9]。有學者發現FOXM1在NSCLC中呈高表達，參與肺血管的形成、腫瘤細胞的增殖、浸潤和轉移，并與NSCLC的預后相關，抑制其表達可延緩腫瘤的發生、發展[10]。付軍科等[11]運用RNA干擾技術下調FOXM1表達水平，發現通過下調FOXM1表達水平可降低肺癌細胞的侵襲能力，進而降低肺癌細胞基質金屬蛋白酶-2表達，推測FOXM1有望作為NSCLC治療的新靶點。

本研究結果顯示，FOXM1陽性表達76例，陰性表達10例，陽性率為88.37%；MTA1高表達68例，低表達18例，高表達率為79.07%，表明FOXM1、MTA1與NSCLC發生、發展密切相關。有文獻報道，FOXM1失調對惡性腫瘤細胞增殖、腫瘤新生血管生成及腫瘤細胞侵襲均有一定的影響，且FOXM1在中低分化的鱗癌細胞中更易檢測，同時FOXM1陽性表達與NSCLC的分化程度、TNM分期、淋巴結轉移密切相關[12-14]。本文發現FOXM1表達與是否吸煙、腫瘤分化程度、是否發生遠處轉移存在密切相關性，與高映浩等[15]報道一致。轉移相關基因是一類新發現的與腫瘤發生、轉移有關的基因家族，其中MTA1由核小體重構及組蛋白脫乙酰基酶復合物構成，參與核小體重塑及組蛋白去乙酰化[16-18]。

表3 影響NSCLC患者遠期預后的多因素logistic回歸分析

注：NSCLC指非小細胞肺癌，FOXM1指叉頭框轉錄因子M1，MTA1指轉移相關基因1蛋白

有研究證實，MTA1表達陽性與FOXM1高表達存在相似之處，均具有促進腫瘤細胞惡性增殖的作用，并且MTA1在多種人類腫瘤中呈異常高表達，參與腫瘤血管生成及細胞侵襲和轉移過程[18-20]。本研究多因素logistic回歸分析顯示，FOXM1表達陽性、MTA1高表達為影響NSCLC患者預后的獨立危險因素，提示FOXM1、MTA1表達與NSCLC的轉移和預后密切相關，推測FOXM1、MTA1可能成為NSCLC腫瘤細胞轉移的標志物，故探索FOXM1、MTA1在NSCLC發生、發展中的生物學和分子學機制有助于進一步解析NSCLC的生物學行為。

綜上所述，FOXM1表達陽性、MTA1高表達為影響NSCLC患者預后的不良因素，臨床應提高警惕。然而，本研究不足之處在于樣本量較小，研究結論需加大樣本量以進一步證實。