T細胞因子3水平對鼻咽癌放化療患者預后的影響

張婷宇

隨著治療手段的提高和醫療設備的進步，鼻咽癌患者的預后在過去一段時間內并未發生顯著變化[1,2]。因此，識別能預測鼻咽癌患者預后的特異性分子標志物對于提高患者預后具有重要意義。T細胞因子3(T cell factor 3，Tcf3)是Wnt信號通路的關鍵效應分子，已被證實在非小細胞肺癌、睪丸胚胎癌、霍奇金淋巴瘤等多種惡性腫瘤的發生進展及預后中發揮抑制靶基因轉錄和調控細胞增殖與分化等作用[3-5]。然而，筆者所見卻缺乏相關Tcf3對鼻咽癌放化療患者臨床預后影響的研究報道。本研究收集160例鼻咽癌患者的臨床資料，探討組織中Tcf3表達水平對鼻咽癌放化療患者總生存率的影響，為鼻咽癌放化療患者預后提供新的分子生物學預測指標。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2008年1月至2012年12月來我院接受放化療治療的160例鼻咽癌患者作為研究對象，治療前均未接受放療及化療，臨床病理資料完整，均為初治患者。鼻咽癌患者診治參照《頭頸部腫瘤綜合治療專家共識》標準[6]。放化療前收集患者的病理標本，計算組織中Tcf3表達水平。

1.2 放化療方法 參照放化療體位制作真空體模，U形面膜固定頭部。行患者治療體位螺旋CT增強掃描，層厚3 mm。將CT圖像輸入治療計劃系統工作站。由2名副主任及以上職稱醫師根據國際輻射單位和測量委員會指南來勾畫靶區，包括大體腫瘤靶區、微小病灶的臨床靶區、靶區運動的內靶區邊緣和每日靶區定位誤差邊緣來制定的計劃靶區。腫瘤部位的放射劑量為60～70 Gy，頸部放射劑量為50～70 Gy。本研究中，采用單純放療40例，采用序貫放化療15例，采用2個周期的同期放化療105例。序貫或同期化療方案為順鉑聯合氟尿嘧啶化療或多西紫杉醇聯合順鉑化療。

1.3 免疫組織化學染色及結果判定方法

1.3.1 免疫組織化學染色：10%甲醛固定組織標本后常規石蠟包埋并切片。60℃烘片，常規二甲苯脫蠟，梯度乙醇復水，檸檬酸緩沖液高壓修復抗原，3%過氧化氫溶液封閉后滴加一抗與二抗(英國Abcam公司)，利用二氨基聯苯胺進行染色，后經蘇木精復染、中性樹脂封片。由2名副主任及以上職稱醫師獨立閱片。Tcf3表達定位于細胞質和細胞膜，呈淺黃色、黃色、棕黃色。

1.3.2 結果判定：染色強度積分按不染色0分、淺黃色1分、黃色2分、棕黃色3分計算；隨機觀察高倍鏡(×200)下5個視野染色細胞數，每視野計數200個細胞，染色面積積分按染色細胞數占所有細胞數<5%記0分、5%～25%記1分、26%～50%記2分、51%～75%記3分、>75%記4分計算；結果判定積分=染色強度積分×染色面積積分，應用受試者工作特征曲線截點值來區分高低表達組(0～5分為Tcf3低表達，>5分為Tcf3高表達)[7]。本研究中，Tcf3低表達組120例，Tcf3高表達組40例。見圖1。

A:Tcf3在鼻咽癌組織中無表達B:Tcf3在鼻咽癌組織中低表達C:Tcf3在鼻咽癌組織中高表達

圖1 組織中Tcf3在鼻咽癌組織及癌旁正常組織中的表達(免疫組化染色×400)

1.4 隨訪 術后每隔3～6個月復查1次頸部X線、超聲。采用門診復查或電話形式進行隨訪，隨訪時間59～81個月，平均(70.55±10.65)個月，隨訪至患者死亡或2017年12月31日。總生存期規定為從手術日至因任何原因引起死亡日或隨訪截止日。

2 結果

2.1 組織中Tcf3表達水平與臨床病理特征的關系 組織中Tcf3表達水平與患者年齡、性別、吸煙史、嗜酒史、BMI、組織類型、臨床分期無關(P>0.05)，與T分期、N分期、局部復發、遠處轉移有關(P<0.05)。見表1。

2.2 組織中Tcf3表達水平與總生存率的關系 Kaplan-Meier法生存曲線結果顯示，組織中Tcf3低表達組5年總生存率高于Tcf3高表達組，差異有統計學意義(P=0.00)。見圖2。

2.3 影響鼻咽癌放化療預后的單因素分析 160例鼻咽癌放化療患者5年后生存120例(75.0%)，死亡40例(25.0%)。單因素分析發現，臨床分期、N分期、局部復發、遠處轉移、組織中Tcf3表達水平與鼻咽癌放化療患者5年總生存率相關(均P<0.05)。見表2。

2.4 影響鼻咽癌放化療預后的多因素分析 將上述單因素分析有意義的變量應用COX風險比例模型進行多因素分析，臨床分期、局部復發、遠處轉移、N分期、組織中Tcf3表達水平，差異有統計學意義(P<0.05)，均為影響鼻咽癌放化療5年總生存率的獨立因素。見表3。

3 討論

鼻咽癌屬于我國高發惡性腫瘤之一[8]。有統計資料證實，鼻咽癌惡性程度高，患者預后差[1,2]。臨床上，年齡、遺傳、淋巴結轉移、臨床分期、病毒感染等是影響鼻咽癌患者預后的主要因素[9-11]。然而，目前鼻咽癌的確切發病機制仍然不清楚。近年來，隨著現代分子生物學的發展和臨床診斷水平的提高，許多分子標志物的出現對于實現鼻咽癌患者個體化精準治療、提高鼻咽癌治愈率意義重大。

表1 組織中Tcf3表達水平與臨床病理特征的關系 n=160

圖2 組織中Tcf3表達水平與總生存率的關系

表2 影響鼻咽癌放化療預后的單因素分析n=160，例(%)

Tcf3作為一種分子標志物，是Wnt通路下游的重要核轉錄因子，可通過競爭性抑制T細胞因子4與β-catenin結合促進Wnt通路下游靶蛋白的表達，發揮Wnt通路調控細胞增殖及凋亡的作用[12]。在胚胎發育的早期，Tcf3具有調節表皮、胚胎干細胞特性和功能的作用，并能保持細胞處于未分化狀態[13]。另一項研究表明，Tcf3可通過調節下游靶點P21、Id1、c-Myc

表3 影響鼻咽癌放化療預后的多因素分析

等基因表達水平發揮其生物學功能[14]。最近的研究表明，Tcf3在非小細胞肺癌、睪丸胚胎癌、霍奇金淋巴瘤等多種惡性腫瘤的發生進展及預后中發揮重要作用[3-5]。然而，Tcf3在鼻咽癌患者中的作用機制仍然未知。據報道，Tcf3表達水平增加與腫瘤低分化和乳腺癌侵襲性基底樣亞型相關[15]。本研究發現，Tcf3表達定位于細胞質和細胞膜，與閔利等[16]研究結果相同，他指出Tcf3在癌組織及細胞系中均表達，且以細胞核表達為主。本研究還發現，組織中Tcf3低表達患者5年總生存率為81.67%(98/120)，顯著高于Tcf3高表達患者5年總生存率的55.00%(22/40)。且經單因素、多因素分析發現，組織中Tcf3表達水平與鼻咽癌放化療患者5年總生存率密切相關。本研究結果提示，組織中Tcf3表達水平影響鼻咽癌放化療患者臨床預后。在本研究中，T3～T4期、N3～N4期、局部復發、遠處轉移的鼻咽癌患者組織中Tcf3表達水平顯著偏高，這表明Tcf3或許還參與了鼻咽癌的復發及轉移，并在鼻咽癌的進展中發揮重要作用。本研究與Shen等[7]的研究結果類似，均指出Tcf3影響鼻咽癌患者預后。組織中Tcf3表達水平對鼻咽癌患者預后的作用機制或許為：Tcf3通過Wnt通路調控癌細胞增殖及凋亡，參與鼻咽癌的發生、發展。王士猛[3]的研究指出，Tcf3可顯著抑制A549細胞和H1299細胞的增殖和遷移能力，誘導細胞凋亡，其分子機制可能通過下調Wnt通路活性以及調控基質金屬蛋白酶家族關鍵成員的表達而實現；Tcf3與臨床病理特征之間的關系證實，Tcf3參與鼻咽癌的復發及轉移。Li等[17]研究指出，Tcf3表達水平與結直腸癌患者復發及轉移密切相關，而Tcf3啟動子低甲基化是Tcf3表達上調的關鍵因素。此外，本研究還發現臨床分期、局部復發、遠處轉移、N分期均為影響鼻咽癌放化療5年總生存率的獨立因素，這與既往研究結果[18,19]一致。

本研究為單中心回顧性研究，制約本研究結論的有效性和容易造成選擇偏倚；收集鼻咽癌病理標本的時間差異可造成組織中Tcf3檢測時間不一致，影響研究結果的準確性。總之，組織中Tcf3表達水平是預測鼻咽癌放化療患者預后的重要指標，但其影響機制還需進一步探討。