吡非尼酮對L-精氨酸誘導的急性胰腺炎小鼠的治療作用研究

史曉賢 李高文

急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）是一種胰腺的炎癥性疾病，臨床表現為急性上腹痛、惡心、嘔吐、發熱等，嚴重者可伴有胰腺出血壞死、感染、休克等全身并發癥，發病率和病死率逐年升高[1]。AP的病因學和病理生理學尚不明確，因而也缺乏有效的治療策略，細胞因子和炎性介質在AP發病中起重要作用，其中白細胞介素（IL）升高和核因子-κβ（NF-κβ）激活被認為是 AP 發展的關鍵事件[2]。吡非尼酮（pirfenidone，PFD）是一種合成的吡啶酮衍生物，可抑制多種炎性因子合成與分泌、減少脂質過氧化，具有抗炎、抗氧化和抗纖維化作用[3]。本研究采用L-精氨酸誘導AP小鼠模型，觀察PFD對AP小鼠氧化應激、炎癥和細胞凋亡的影響，探討其可能的治療作用機制。

1 材料和方法

1.1 實驗動物 雄性C57BL/6小鼠32只，體重20～25g，鼠齡4～6周，均購自北京維通利華實驗動物技術有限公司[SCXK（京）2016-0006]；小鼠在標準實驗室條件下自由飲水和標準飲食，自適應飼養1周。

1.2 主要試劑和儀器 L-精氨酸粉末（25g，批號：1725413）、羧甲基纖維素（CMC，批號：419338）均購自美國 Sigma Aldrich公司，PFD粉劑（批號：53179-13-8）購自美國 Selleck公司，核因子-κβ（NF-κβ）p65 多克隆抗體（ab16502）、辣根過氧化物酶標記的二抗（ab205718）均購自英國Abcam公司，ApopTag過氧化物酶原位凋亡檢測試劑盒購自美國Millipore公司，二氨基聯苯胺（DAB）顯色試劑盒（2016206）、蘇木素-伊紅（HE）染液（2016006）、RIPA 裂解液（2016062）、SDS-PAGE 電泳緩沖液（2016070）、聚偏氟乙烯（PVDF）和增強化學發光（ECL）檢測試劑盒（2016028）均購自南京建成生物工程研究所，髓過氧化物酶（MPO）抗體（A0398）購自丹麥Dako公司，二喹啉甲酸（BCA）蛋白定量試劑盒（23227）購自美國Thermo公司，4-羥基壬烯醛（4-HNE）抗體（198960）、GAPDH（AF5718）均購自美國 R&D Systems公司，全自動生化分析儀（日立7600-020）購自日本Hitachi公司，光學顯微鏡（Olympus BX-50）購自日本Olympus公司。……