長鏈非編碼RNA-CECR7在胃癌中的表達水平及與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系

趙文輝

胃癌起源于胃黏膜上皮惡性腫瘤，在我國惡性腫瘤發(fā)病中居首位[1]。胃癌的發(fā)病有明顯的地域、性別差異，飲食結(jié)構(gòu)不合理、工作壓力增大、幽門螺桿菌感染等使胃癌呈年輕化。胃癌的預(yù)后與胃癌的部位、大小、組織類型、病理分期有關(guān)；早期胃癌無明顯病理癥狀，極易被忽視；且目前尚無法精準(zhǔn)預(yù)測胃癌發(fā)病，因此尋找與胃癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后相關(guān)的特異性強的生物標(biāo)志物已成為臨床研究的重點[2]。長鏈非編碼RNA(LncRNA)在胃癌組織中異常表達可影響癌癥的發(fā)生發(fā)展等過程，但LncRNA在胃癌中的作用機制尚不明確[3]。長鏈非編碼RNA貓眼綜合征臨界區(qū)基因7(long non-coding RNA cat eye syndrome critical region gene 7，LncRNA CECR7)已被證明在食管癌中高表達[4]，而食管癌和胃癌都屬于消化道腫瘤，早期癥狀都不明顯、確診率低[5]，具有類似之處。本研究通過研究LncRNA CECR7在胃癌組織中的表達情況，探討其與胃癌病理特征及患者生存結(jié)局的關(guān)系，以期為胃癌的臨床治療和預(yù)后評價提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2014年7月至2015年12月在我院經(jīng)病理確診的胃癌患者胃癌組織89例，對應(yīng)癌旁組織89例。患者均符合《胃癌診斷標(biāo)準(zhǔn)》中的胃癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟胃癌腫瘤原發(fā)灶淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(tumor node metastasis，TNM)分期系統(tǒng)第7版[7]分析臨床病理特征。TNM分期按Ⅰ期(腫瘤侵犯固有層、黏膜肌層或黏膜下層 )、Ⅱ期(侵犯漿膜下層)、Ⅲ期(侵犯漿膜)、Ⅳ期(侵犯鄰近結(jié)構(gòu))分期，N分期按N0期(0 枚淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)、N1期(1～6枚淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)、N2期(7～15枚淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)、N3期(>15枚淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)分期，M分期按M0期(遠處轉(zhuǎn)移不存在)、M1期(遠處轉(zhuǎn)移存在)分期。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) (1)均初次確診為胃癌患者；(2)患者無化療治療；(3)患者無其他胃部相關(guān)疾病；(4)患者均知情并自愿簽署同意書。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) (1)其他組織合并癌變患者；(2)經(jīng)過免疫治療者；(3)臨床資料不完整者。

1.4 方法 實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR，qRT-PCR)法檢測組織中LncRNA CECR7的表達水平。RNA提取試劑盒(購自北京索萊寶科技有限公司)提取細胞總RNA，cDNA試劑盒(購自北京智杰方遠)將其逆轉(zhuǎn)錄成第一鏈cDNA。引物序列(生工生物工程有限公司合成)為：LncRNA CECR7-F:5’-TCAGTGACAGCCCCATGTAA-3’、LncRNA UCA1-R:5’-CAGCAGGA AGAGGTGCTAGAG-3’，內(nèi)參序列GADPH-F:5’-GAAGGTGAAGGTCGGA-3’、GADPH-R:5’-GAAGATGGTGATGGGAT-3’。qRT-PCR儀(購自賽默飛世爾科技有限公司)擴增LncRNA UCA1、GADPH序列，反應(yīng)體系為：2×Mix 10 μl，40 ng/μl總蛋白1 μl，上下游引物(10 μmol/L)各0.5 μl，ddH2O 8 μl。qRT-PCR反應(yīng)條件為95℃、30 s；95℃、15 s，62℃、15 s，共40個循環(huán)。2-ΔΔCt法計算相對表達水平。

1.5 隨訪 所有治療出院后的患者進行復(fù)查或電話隨訪，隨訪時間為出院后36個月，末次隨訪時間截止2018年12月31日，死亡患者以死亡時間作為隨訪截止期。觀察患者隨訪期間腫瘤復(fù)發(fā)情況、生存情況。

2 結(jié)果

2.1 LncRNA CECR7在胃癌組織及癌旁組織中的表達 胃癌組織中LncRNA CECR7表達水平顯著高于癌旁組織(P<0.05)。見表1。

組別LncRNA CECR7/GADPH癌旁組織1.00±0.04胃癌組織5.12±1.16t值33.487P值0.000

2.2 胃癌組織中LncRNA CECR7與臨床病理特征的關(guān)系 胃癌患者中LncRNA CECR7表達水平與TNM分期、腫瘤直徑、脈管浸潤呈相關(guān)性(P<0.05)，與患者年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(Node，N)分期、遠處轉(zhuǎn)移(Metastasis，M)分期、Lauren分型、腫瘤分化病理類型無明顯相關(guān)性(P>0.05)。見表2。

2.3 胃癌組織中LncRNA CECR7與胃癌患者預(yù)后的關(guān)系 胃癌組織中LncRNA CECR7低表達患者術(shù)后良好比例高于高表達組(P<0.05)，低表達患者術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)率(無死亡)、死亡率均低于高表達組(P<0.05)。見表3。

2.4 影響胃癌患者不良預(yù)后的COX回歸分析 單因素分析顯示，LncRNA CECR7表達、TNM分期、N分期、M分期、腫瘤分化程度、有無脈管浸潤均是影響胃癌患者預(yù)后的危險因素(P均<0.05)。多因素分析顯示，LncRNA CECR7表達、TNM分期、腫瘤分化程度是影響胃癌患者預(yù)后的獨立危險因素(HR=1.773，95%CI為1.176～2.673；HR=1.754，95%CI為1.435～2.145；HR=1.633，95%CI為0.842～3.167，P均<0.05)。見表4。

2.5 胃癌組織中LncRNA CECR7表達與患者3年總存活率的關(guān)系 胃癌組織中LncRNA CECR7低表達的患者3年總存活率明顯高于高表達組(F=5.785，P<0.05)。見圖1。

3 討論

胃癌是臨床上十分常見的惡性腫瘤。胃癌家族遺傳史，長期食用熏烤、鹽腌食品，吸煙，幽門螺桿菌感染等都能增加胃癌發(fā)生幾率[8]。胃癌的癌變是一個涉及多因素、多步驟、多階段發(fā)展的過程，涉及多種基因表達異常[9]。胃癌對人類健康影響嚴重，然而目前尚沒有相關(guān)的預(yù)測指標(biāo)，臨床主要根據(jù)患者癥狀給予對應(yīng)治療，存在一定的滯后性。

表2 LncRNA CECR7與胃癌臨床病理特征的關(guān)系 例

表3 LncRNA CECR7與胃癌患者預(yù)后的關(guān)系 例

表4 影響胃癌患者預(yù)后的危險因素分析結(jié)果

LncRNA是長度>200個氨基酸、不編碼蛋白質(zhì)的RNA。LncRNA在多種疾病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮一定的作用，與肝癌、肺癌、胃癌等多種疾病相關(guān)[10]。胃癌中，LncRNA TRERNA1、LncRNA SMARCC2、LncRNA BC005927在胃癌細胞中高表達能促進胃癌細胞的遷移和侵襲，加快胃癌患者疾病進程[11-13]。貓眼綜合征是一種基因過表達或部分染色體重復(fù)使患者眼部缺損、肛門閉鎖、耳部凹陷、心臟和腎臟缺陷等嚴重缺陷的疾病[14]。其中CECR7是貓眼綜合征中異常表達基因，CECR7是位于22號染色體上、長23 501個堿基，是一種功能尚未明確LncRNA。LncRNA CECR7在正常肝組織中表達水平相對較低，在肝癌組織中高表達，與肝癌患者的存活率顯著相關(guān)[15]。另有研究發(fā)現(xiàn)，LncRNA CECR7在胰腺癌、食管癌等腫瘤組織中高表達，可促進癌細胞的增殖、抑制其凋亡，可能作為致癌基因發(fā)揮作用[4,16]。

圖1 LncRNA CECR7低、高表達生存曲線

目前鮮少有LncRNA CECR7與胃癌的相關(guān)報道，因此本研究對LncRNA CECR7在胃癌中的表達進行研究。結(jié)果顯示LncRNA CECR7在胃癌組織中表達水平顯著高于癌旁組織，且與胃癌患者TNM分期、腫瘤直徑、脈管浸潤密切相關(guān)。已有研究表明，TNM分期可作為評估胃癌預(yù)后和提供臨床治療最重要的參考標(biāo)準(zhǔn)，腫瘤直徑可在一定程度上反應(yīng)腫瘤大小、脈管浸潤可一定程度上反應(yīng)癌細胞轉(zhuǎn)移情況[17]。LncRNA CECR7高表達患者術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)率(無死亡)、死亡明顯升高，患者生存率明顯低于LncRNA CECR7低表達患者，提示LncRNA CECR7的表達與胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移、病情嚴重程度密切相關(guān)，且能夠作為患者預(yù)后的預(yù)測指標(biāo)。胃癌組織中LncRNA CECR7低表達患者3年總存活率明顯高于高表達組，提示胃癌組織中LncRNA CECR7表達水平可在一定程度上反映患者存活時間長短。進一步分析發(fā)向，LncRNA CECR7表達、TNM分期、N分期、M分期、腫瘤分化程度、有無脈管浸潤均是影響胃癌患者預(yù)后的危險因素，LncRNA CECR7表達、TNM分期、腫瘤分化程度是影響胃癌患者預(yù)后的獨立危險因素，提示LncRNA CECR7表達水平可能作為一項判斷胃癌患者預(yù)后的獨立指標(biāo)，亦是判定胃癌患者臨床結(jié)局的重要依據(jù)。

綜上所述，LncRNA CECR7在胃癌中高表達，與TNM分期、預(yù)后密切關(guān)系，有望成為患者病情診斷及不良預(yù)后預(yù)測的潛在生物標(biāo)志物，為胃癌臨床治療提供新的策略，但其具體作用機制有待深入研究。但本研究中并沒有對患者飲食等影響胃癌的相關(guān)因素進行細分，存在一定的缺陷。