CLEC12B在肝癌中的表達及其臨床意義*

盧雪蘭 劉 娟 嚴景全 王春玲 藍云翠 林占洲

廣東省惠州市中心人民醫院肝病內科 516001

肝癌是全世界最常見的惡性腫瘤之一，其具有高發、易復發、危害大等特點[1]，死亡率占所有惡性腫瘤死亡率的第二位[2]。目前肝癌主要采用手術聯合放化療進行治療，術后死亡主要因肝癌復發。因此，研究肝癌術后復發的機制成為降低肝癌死亡率的重要突破口。凝集素受體是一類高特異性的糖蛋白，已有研究證實凝集素受體表達量可作為肝癌診斷的輔助標準之一[3]。此外，研究表明凝集素受體陽性可作為急性淋巴細胞性白血病的易復發標志之一。然而，凝集素受體是否能預測肝癌復發尚不確定。C型凝集素受體12B(CLEC12B)作為凝集素受體超家族的一員，與肝癌易感性相關[4]。因此，本研究利用TCGA公共數據庫，分析CLEC12B在肝癌中的表達情況，探討CLEC12B在肝癌發生發展及預后中的作用。

1 資料和方法

1.1 資料數據來源 從TCGA官方網站下載數據，包括肝癌數據集的mRNA表達數據以及對應的臨床資料數據。臨床資料包括生存時間、生存狀態、年齡；病理資料包括組織學分型、TNM分期等。TCGA肝癌數據集樣本數為424例，其中癌組織樣本374例，癌旁組織樣本50例。

1.2 數據庫篩選和分組 利用R軟件對數據進行預處理，篩選生存資料完整的370例進行相關性分析和生存分析。利用肝癌與癌旁配對樣本(50例)比較CLEC12B在癌及癌旁組織的表達。利用Survminer包計算CLEC12B表達量最佳截斷值，并依據最佳截斷值將樣本分為高表達組和低表達組。

1.3 基因富集分析 利用clusterProfiler包進行基因富集分析，分析CLEC12B的表達水平對其他功能集的影響，參照基因集為h.all.v6.2.entrez.gmt數據集，設置隨機組合次數1 000次。

1.4 統計學方法 所有數據處理和統計分析利用R 3.4.0完成。癌組織和癌旁組織表達量比較用單因素方差分析。生存分析采用Kaplan-Meier曲線，顯著性分析采用Log-rank檢驗。利用Cox回歸模型分析臨床特征與肝癌預后的關系，將單因素分析中P<0.1的參數納入多因素分析。

2 結果

2.1 癌組織與癌旁組織中CLEC12B的表達 在同一個患者中，與癌旁組織相比，癌組織中CLEC12B表達量明顯較低(P<0.001)。提示肝癌的發生過程中CLEC12B表達被抑制，見圖1。

圖1 CLEC12B在配對的癌組織和癌旁組織的表達水平

2.2 CLEC12B表達量對肝癌預后的影響 將CLEC12B表達≥5.75定義為高表達組，<5.75定義為低表達組。CLEC12B表達與總體生存顯著相關，高表達患者總體生存期優于低表達患者，見圖2。在單因素COX回歸模型中，TNM分期、年齡、CLEC12B表達狀態能夠影響患者的預后(P<0.05),性別、病理分期對預后沒有明顯影響(見表1)。將以上P<0.1的因素納入多因素分析，TNM分期、年齡、CLEC12B表達狀態是影響肝癌患者預后的獨立因素，見表1。

圖2 CLEC12B表達狀態與肝癌患者預后的關系

2.3 CLEC12B表達與臨床病理學參數相關性 相關性分析顯示CLEC12B表達與年齡、性別、TNM分期以及病理分期均無關，見表2。

2.4 基因富集化分析 基因富集分析示，CLEC12B高表達樣本富集到DNA修復相關的基因集(P<0.05,FDR=0.012)，低表達樣本富集到炎癥反應相關的基因集(P<0.05,FDR=0.002)，見圖3。

表1 影響肝癌預后的因素

表2 CLEC12B表達與臨床病理學參數相關性

圖3 GSEA分析CLEC12B表達相關富集分析

A：DNA修復 B：炎癥反應

3 討論

CLEC12B是C型凝集素受體超家族的一員[5]。本研究顯示，相比癌旁組織，CLEC12B在癌組織中呈現低表達，CLEC12B高表達組總體生存期明顯優于低表達組。這些結果提示CLEC12B與肝癌的發生發展呈負相關，可以作為肝癌預后的預測指標。基因富集分析提示CLEC12B高表達與炎癥反應、DNA修復相關，提示CLEC12B可能通過影響肝臟炎癥反應以及DNA修復調節了腫瘤的發生發展。

研究發現CLEC12B主要表達在骨髓細胞表面，能夠抑制單核細胞來源的免疫細胞的活性，從而參與機體的炎癥調控[6-7]。肝癌的發生發展與肝臟炎癥密切相關[8]，基因富集分析提示CLEC12B高表達與炎癥反應有關。因此，我們推測CLEC12B可能通過影響肝臟的炎癥，進而影響肝癌的發生。此外，DNA損傷是肝癌發生的重要機制之一[9]，基因富集分析提示CLEC12B高表達與DNA修復有關，因此推測CLEC12B可能通過上調DNA修復相關的基因，從而抑制肝癌的發生發展[10]。

本研究有一定不足之處。首先，TCGA數據庫提供的是CLEC12B的mRNA表達水平，無法完全代表CLEC12B的蛋白質表達水平。其次，本研究的結論來源于在線數據庫分析，分析結果具有一定的提示作用，但還需要臨床以及基礎研究進一步證實。

綜上所述，CLEC12B可能通過炎癥及DNA修復等影響肝癌發生發展及預后。該結果將為深入研究CLEC12B在肝癌中的作用提供線索和依據。