HPLC測定參苓白術丸中人參皂苷的含量

王登旭，趙文法，王洪梅

（1.聊城市藥品不良反應監測中心，山東 聊城 252000；2.聊城市食品藥品檢驗檢測中心，山東 聊城252000）

參苓白術丸收載于《中國藥典》2015年版一部[1]，是由人參、茯苓、白術（麩炒）、山藥、白扁豆（炒）、蓮子、薏苡仁（炒）、砂仁、桔梗、甘草10味中藥制成的水丸，具有補脾胃，益肺氣之功效。臨床主要用于脾胃虛弱，食多便溏，氣短咳嗽，肢倦乏力，該品種經多年的臨床驗證，證明療效顯著。本品現行質量標準中僅收載人參的薄層色譜鑒別，不能完全反應其產品質量。為有效控制產品質量，本研究采用高效液相色譜法（HPLC）對參苓白術丸主要成分人參中的人參皂苷Rg1、Re和Rb1進行定量控制。本研究參考國內外有關資料[2-7]，經多次試驗,建立了HPLC測定參苓白術丸中人參皂苷含量的新方法,實驗結果表明該方法準確、簡單、快捷、重現性好。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AE240型電子分析天平（瑞士Mettler）；Agilent1200高效液相色譜儀（配DAD檢測器，美國安捷倫）；HU6150B超聲波清洗器（天津恒奧）。

1.2 試藥

人參皂苷Rg1對照品（批號：110703-201832，中國食品藥品檢定研究院）；人參皂苷Re對照品（批號：110754-201827，中國食品藥品檢定研究院）；人參皂苷Rb1對照品（批號：110704-201827，中國食品藥品檢定研究院）；乙腈（色譜純，天津大茂）；水為超純水，其他試劑均為分析純；樣品為市售，陰性樣品為自制。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

2.1.1 色譜條件 色譜柱為Thermo ODS C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按表1進行梯度洗脫；檢測波長為203 nm；流速為1.0 ml/min；柱溫為30 ℃；進樣量為10 μl。

表1 梯度洗脫表

2.1.2 系統適用性試驗 取供試品溶液10 μl，照2.1.1項下色譜條件注入液相色譜儀，理論板數按人參皂苷Rg1峰計算應不低于4000，人參皂苷Rg1與相鄰峰的分離度均大于1.5。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液制備 精密稱取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品及人參皂苷Rb1對照品，加甲醇溶解并定量稀釋制成每l ml各含0.2 mg的混合溶液，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液制備 取本品10袋，粉碎，混勻，取約10 g，精密稱定，置索氏提取器中，加三氯甲烷50 ml，加熱回流3 h，藥渣揮去溶劑，連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中，加入2 %氫氧化鉀甲醇溶液50 ml，加熱回流1 h，放冷，濾過，用少量甲醇洗滌藥渣及容器3次，合并洗液和濾液，蒸干，殘渣加水50 ml使溶解，用水飽和的正丁醇提取4次（20 ml，20 ml，10 ml，10 ml），合并正丁醇提取液，分別用氨試液、1 % 磷酸二氫鉀溶液、正丁醇飽和的水各40 ml洗滌，棄去洗滌液，正丁醇液置旋轉蒸發儀中減壓蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液制備 按處方工藝制備不含人參的陰性樣品，照2.2.2項下方法操作，即得。

2.3 專屬性考察

取混合對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀中，照2.1.1項下色譜條件測定。結果供試品溶液在與混合對照品溶液相同保留時間處有色譜峰，陰性對照溶液無干擾峰，說明方法專屬性好，見圖1。

圖1 混合對照品溶液（A）、陰性對照溶液（B）、供試品溶液（C）HPLC圖譜

2.4 線性范圍考察

精密稱取人參皂苷Rg1對照品0.02010 g、人參皂苷Re對照品0.02019 g及人參皂苷Rb1對照品0.02036 g，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合對照品儲備液。精密吸取混合對照品儲備液0.5，1.0，2.0，5.0 ml，分別置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得系列標準溶液。照2.1.1項下色譜條件，取對照品儲備液及系列標準溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀，用峰面積（A）對濃度（C）進行線性回歸，結果表明，人參皂苷Rg1在0.0402～0.804 mg/ml濃度范圍內線性關系良好，線性回歸方程為A=5082.3C-6.6572，r=0.9995；人參皂苷Re在0.04038～0.8076 mg/ml濃度范圍內線性關系良好，線性回歸方程為A=4849.5C+16.458，r=0.9997；人參皂苷Rb1在0.04072～0.8144 mg/ml濃度范圍內線性關系良好，線性回歸方程為A=5541.7C-5.0939，r=0.9999。

2.5 精密度試驗

取供試品溶液（批號：20181001），照2.1.1項下色譜條件連續測定5次，人參皂苷Rg1、Re、Rb1峰面積的RSD均小于2.0 %，結果表明精密度良好，符合分析要求。

2.6 重復性試驗

取供試品（批號：20181001）6份，按2.2.2項下方法制備供試品溶液，按2.1.1項下色譜條件測定，分別計算6份樣品中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1的含量，結果顯示人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1含量的RSD均小于2.0 %。試驗結果表明，該方法重復性良好。

2.7 穩定性試驗

吸取2.6項下供試品溶液，按2.1.1項下色譜條件，分別在0，1，2，4，8，12，24 h測定1次。結果表明供試品溶液在24 h內穩定性良好，能滿足測定需要。

2.8 加樣回收試驗

取已知含量的供試品（批號：20181001）適量，加入適量混合對照品溶液，制成低、中、高3個不同濃度的供試品溶液各3份，分別測定其含量，結果見表2～4。試驗結果表明，該方法準確度符合規定。

表2 人參皂苷Rg1加樣回收試驗結果（n=6）

表3 人參皂苷Re加樣回收試驗結果（n=6）

表4 人參皂苷Rb1加樣回收試驗結果（n=6）

2.9 樣品測定

3批市售樣品分別按2.2.2項下方法制備供試品溶液，按2.1.1項下色譜條件測定，按外標法以峰面積計算含量。結果批號為20181001，20181002，20181101的樣品含量測定結果見表5。

表5 樣品測定結果

3 結論

本文參考國內外大量有關人參皂苷含量測定方法的文獻資料并經多次試驗，建立了HPLC測定參苓白術丸中人參皂苷含量的方法。實驗結果顯示，本方法專屬性良好，簡便、快捷、準確，可用于參苓白術丸中人參皂苷含量的質量評價。