發酵中藥對免疫應激肉雞血液指標的影響

靳雙星，張桂枝，王 晶，任曉麗，張愛國

(1.河南牧業經濟學院動物醫藥學院，河南 鄭州 450046；2.鄭州市禽病診斷與防控工程技術研究中心，河南 鄭州 450046；3.河南牧業經濟學院動物科技學院，河南 鄭州 450046)

在高密度集約化肉雞生產中，疫苗免疫對控制和消滅傳染病發揮著極其重要的作用。但疫苗接種作為一種特殊的應激因子誘發機體產生免疫應激，破壞機體內環境的穩定，改變新陳代謝，降低生產性能，延長飼養周期，導致機體免疫力和抗病力的下降，給肉雞生產帶來的危害也愈來愈嚴重[1]。尋找安全有效的抗應激添加劑來預防和緩解免疫應激已成科技人員研究的熱點。本試驗通過給AA肉雞注射細菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)建立經典免疫應激模型，評估發酵中藥對LPS免疫應激肉雞的血液常規和血清生化指標的影響，以期為發酵中藥應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 脂多糖(LPS)，購自Sigma公司。雞新城疫疫苗(LaSota株)，購自哈藥集團生物疫苗有限公司；復方中藥，購自鄭州鶴眾堂醫藥有限公司，由黃芪、白術、黨參、茯苓、刺五加、酸棗仁、甘草按一定比例配制而成。中藥發酵參考張桂枝等[2]的方法。

1.2 主要儀器 全自動生化分析儀(型號：AU2700，Beekman Coulter Olympus公司產品)；全自動血液分析儀 (型號：XE2100，Sysmex公司產品)。

1.3 試驗動物與設計 選用7日齡健康AA肉雞200只隨機分為5組：對照組(基礎日糧)和4個處理組，即LPS應激組 (基礎日糧+LPS)、1%未發酵中藥組(基礎日糧+LPS+1%未發酵中藥)、0.5%發酵中藥組(基礎日糧+LPS+0.5%發酵中藥)、1%發酵中藥組(基礎日糧+LPS+1%發酵中藥)，每組8個重復，每個重復5只雞。按常規方式飼養，自由采食和飲水，7日齡進行2倍量新城疫滴鼻免疫接種，21日齡進行3倍量新城疫飲水免疫接種。飼養至15、17、19、21、23、25、27日齡時分別按照100、200、200、250、250、400、400 μg/(kg·bw)的劑量對4個處理組腹腔注射LPS，對照組注射等量生理鹽水。

1.4 指標測定 最后一次注射LPS后24 h，每組分別采集全血和血清16份，用全自動血液分析儀測定血液常規指標，用全自動生化分析儀測定血清生化指標。

1.5 數據統計分析 各指標檢測結果以平均值±標準差表示，采用SPSS 25.0統計軟件進行單因素方差分析，多重比較采用LSD檢驗，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結果

2.1 發酵中藥對免疫應激肉雞血液常規指標的影響 結果見表1。從表1可看出，LPS應激組白細胞數目顯著高于對照組(P<0.05)。3個中藥組與LPS應激組相比，白細胞數目均有所下降，尤其是2個發酵中藥組白細胞數目顯著低于LPS應激組(P<0.05)，與對照組無顯著差異(P>0.05)；其他指標各組之間無顯著差異(P>0.05)。

表1 肉雞的血常規指標Table 1 Blood routine indexes of broilers (n=16)

2.2 發酵中藥對免疫應激肉雞血清生化指標的影響 結果見表2。從表2可以看出，LPS應激組與對照組相比肉雞血清中總蛋白(TP)、球蛋白(GLO)、尿素氮(BUN)和總膽固醇含量明顯上升(P<0.05),谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)等血清酶活性明顯升高(P<0.05)。3個中藥組與LPS應激組相比總蛋白、白蛋白和球蛋白含量均無顯著差異(P>0.05)，但球蛋白含量有一定下降，白蛋白含量有一定提高(P>0.05)。3個中藥組尿素氮和總膽固醇含量均有所降低，可以使LPS應激引起的尿素氮和總膽固醇含量上升幅度降低到與對照組無顯著差異(P>0.05)。3個中藥組總蛋白和白蛋白含量均顯著高于對照組(P<0.05)。3個中藥組與LPS應激組相比，ALT、AST、CK、乳酸脫氫酶(LDH)等血清酶活性有不同程度下降，其中1%發酵中藥組的ALT、2組發酵中藥組的AST和0.5%發酵中藥組的CK血清酶活性顯著低于LPS應激組(P<0.05)。

表2 肉雞的血液生化指標Table 2 Blood biochemical indexes of broilers (n=16)

3 討論

3.1 發酵中藥對免疫應激肉雞血液常規指標的影響 LPS是一種十分有效的應激源，許多研究者通過給動物腹腔或靜脈注射一定劑量的 LPS 來建立動物模型，是建立免疫應激模型最經典的方式之一[3-6]。LPS是革蘭陰性細菌外璧層中特有的一種化學成分，可導致血常規指標在短時間內呈現異常變化[7]。白細胞為機體主要的免疫細胞，通過游走、趨化和吞噬消除進入機體的病原微生物和壞死組織，在發生細菌感染或炎癥時，白細胞數目通常增加。本試驗中LPS應激組白細胞含量顯著高于對照組(P<0.05)，說明LPS誘導肉雞產生了類似于細菌感染的炎性反應，使白細胞數目顯著升高。3個 中藥組與LPS應激組相比，白細胞數目均下降，2個發酵中藥組白細胞數目顯著低于LPS應激組(P<0.05)，可以使LPS應激引起的白細胞數目上升幅度降低到與對照組無顯著差異(P>0.05)。說明該發酵中藥組方在一定程度上能夠降低LPS應激引起的炎癥反應。

3.2 發酵中藥對免疫應激肉雞血清生化指標的影響 血清球蛋白是多種蛋白質的混合物，包括具有防御作用且含量較多的免疫球蛋白、補體和多種糖蛋白。血清白蛋白由肝實質細胞合成，在維持血漿膠體滲透壓和物質運輸過程中起重要作用。閆偉[8]采用LPS刺激建立鵝免疫應激模型，發現應激組血清總蛋白、球蛋白含量顯著升高。鄭肖川[9]研究報道，LPS刺激顯著提高了血清總蛋白和球蛋白的水平，降低了血清白蛋白的水平；日糧添加冬凌草甲素顯著降低了總蛋白和球蛋白的水平。本試驗LPS應激組與對照組相比肉雞血液中的總蛋白和球蛋白含量顯著升高(P<0.05)；1%發酵中藥組可以使LPS應激引起的球蛋白含量上升幅度降低到與對照組無顯著差異(P>0.05)；并且中藥組可顯著提高血清中白蛋白的水平。說明復方中藥可以減輕LPS引起的免疫應激而且可以促進肝臟合成白蛋白。

畜禽在免疫應激狀態下，體內的糖皮質激素分泌增加，糖、脂肪和蛋白質的分解代謝加強。尿素氮、總膽固醇、甘油三酯是衡量機體三大物質代謝的重要指標。雖然家禽尿素氮含量較低，但尿素氮濃度在一定范圍內可以反映蛋白質的代謝情況，濃度升高時，氨基酸分解增加，相應蛋白質沉積減少；如果超過一定范圍，則說明腎臟功能異常[10]。免疫應激對脂類代謝的影響主要是通過細胞因子對關鍵酶活性的調節來實現的，細胞因子可降低甘油三酯的清除率，促進肝臟脂肪酸合成以及非必需脂肪酸重新酯化，導致血脂升高。宋志學等[11]研究表明，LPS應激可使血液中的尿素氮、總膽固醇、甘油三酯和葡萄糖均顯著升高。本試驗LPS應激組與對照組相比尿素氮、總膽固醇和甘油三酯含量均有所升高，尿素氮和總膽固醇含量顯著高于對照組(P<0.05)；飼料中添加復方中藥后可以使LPS應激引起的尿素氮和總膽固醇含量上升幅度降低到與對照組無顯著差異(P>0.05)。說明復方中藥可以緩解LPS應激對脂肪和蛋白質代謝的影響。

血清中的酶具有高度的特異性，其活性變化可以反映機體器官的代謝水平和功能狀態，當機體器官代謝旺盛或受到損傷時，血清酶活性會發生顯著的變化[12]。谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶在肝細胞中存在較多，當肝細胞受到損傷時，肝細胞內的酶就會進入血液中，導致血清酶的活性升高[13]。肌酸激酶主要存在于骨骼肌、心肌和腦組織中，骨骼肌及心肌活動增加或受損會引起血清肌酸激酶活性升高。本試驗結果表明，LPS免疫應激使血清中ALT、AST、CK等血清酶活性顯著升高(P<0.05)；添加中藥能使谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶和肌酸激酶的血清酶活性顯著下降(P<0.05)，說明發酵中藥對肝臟細胞具有潛在的保護作用，也可能與中藥含有刺五加、酸棗仁具有鎮靜安神，減少肉雞活動有關。

許多研究表明[14-16]，四君子湯在調節胃腸運動，促進消化吸收和免疫調節、促進代謝等方面具有重要作用。本試驗的中藥組方是在四君子湯的基礎上加減黃芪、酸棗仁、刺五加而成，具有益氣健脾、鎮靜安神等功效。本試驗結果表明，添加中藥能夠顯著降低肉雞炎癥反應，調控蛋白質和脂肪代謝，減輕免疫應激造成的臟器損傷。分析原因可能是中藥組方中四君子湯成分可以調節機體免疫功能，降低炎癥介質在體內的殘留，改善過度免疫所造成的病理性損傷有關[17]；黃芪對細胞免疫、體液免疫及非特異性免疫均具有增強作用[18]，因此，該發酵中藥具有降低炎癥反應效果；四君子湯還可以增加食欲，提高采食量，增加營養物質消化吸收，使血液總蛋白和白蛋白水平升高；同時，中藥組方中的刺五加、酸棗仁具有鎮靜安神作用，使肉雞在免疫應激條件下保持安靜，較少活動，降低了免疫應激反應和能量消耗；中藥方劑中黃芪具有抗氧化和穩定肝細胞膜的作用，甘草具有減輕肝細胞損害程度，促進肝細胞再生，因此該中藥方劑具有保護肝臟的作用，促進肝臟轉化合成了較多白蛋白，參與組織修復，調節血清酶活性下降。