常德本地泥鰍與大鱗副泥鰍雜交育種的可行性探究

付瑩，馮宗友，陸娟娟，胡海燕，李洋洋，劉葉，皮杰

（湖南應(yīng)用技術(shù)學(xué)院，湖南 常德 415100）

我國傳統(tǒng)養(yǎng)殖的泥鰍包括了泥鰍（Misgurnus anguillicaudatus）（俗稱青鰍）和大鱗副泥鰍（Paramisgurnus dabryanus）（俗稱黃板鰍），分屬花鰍亞科中的泥鰍屬（Misgurnus）和副泥鰍屬（Paramisgurnus）[1]。泥鰍和大鱗副泥鰍是近年來最為熱門的名特養(yǎng)殖品種之一，營養(yǎng)豐富，有極高的營養(yǎng)價值、藥用價值和保健功能[2-5]。國際市場對我國泥鰍的需求量逐年增加，尤其是日本、韓國，年需求量超過100 000 t[6]。隨著需求的不斷增加，對泥鰍苗種的需求也逐步增加。因此，人工繁育苗種成為促進(jìn)泥鰍養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的重點。泥鰍和大鱗副泥鰍的人工繁育技術(shù)已經(jīng)較為成熟[7-10]，為泥鰍養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展提供了保證。隨著養(yǎng)殖技術(shù)的不斷提高，集約規(guī)模化、園區(qū)工廠化養(yǎng)殖發(fā)展迅猛，養(yǎng)殖過程中出現(xiàn)的病害問題也日漸凸顯，如水質(zhì)惡化，細(xì)菌性疾病、病毒、病蟲害等，直接造成經(jīng)濟(jì)損失[11]。目前，我國利用遠(yuǎn)緣雜交方法在魚類雜交優(yōu)勢利用上已經(jīng)取得系列成果[12]。泥鰍在一些含氧量低、水質(zhì)較差的惡劣環(huán)境中適應(yīng)能力很強(qiáng)，是一種有很大生產(chǎn)潛力的低碳養(yǎng)殖品種[13]，大鱗副泥鰍生長快、抗逆性強(qiáng)[14-15]，可通過遠(yuǎn)緣雜交獲得可供養(yǎng)殖的、生長速度快的雜交泥鰍新品種[16]。

該研究主要是利用大鱗副泥鰍（P♀）×泥鰍（M♂）和大鱗副泥鰍（P♂）×泥鰍（M♀）開展研究，通過雜交育種的方法為泥鰍養(yǎng)殖培育新品種提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 親本的來源與飼養(yǎng)

用于繁殖的大鱗副泥鰍購買于江西省余江縣宏鑫特種水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，雌性2 000尾，雄性1 000尾。泥鰍購買自常德水產(chǎn)市場，雌性2 000尾，雄性1 000尾。將購買的親本在湖南應(yīng)用技術(shù)學(xué)院校水產(chǎn)養(yǎng)殖基地進(jìn)行飼養(yǎng)。親本投喂商品飼料（粗蛋白≥36.0，粗脂肪≥3.0，賴氨酸≥1.9，粗纖維≤8.0，水分≤10，灰分≤15，食鹽≤3.5，鈣≤1.0～4.5，總磷≥0.8～2.5），同時每天投喂少量的蚯蚓和蠅蛆。

1.2 親本的選擇

選擇親本2—4齡，進(jìn)行雜交試驗。大鱗副泥鰍雌性選擇體長20～26 cm，體質(zhì)量90～140 g以上的個體；雄性選擇體長14～16 cm，體質(zhì)量120～130 g以上的個體。常德本地泥鰍雌性和雄性均選擇體質(zhì)量45～80 g，體長12～16 cm以上的個體。此外，雌鰍要求腹部膨大、富有彈性，腹部明顯向外突出，將雌鰍腹部朝上，可看到明顯的卵巢輪廓，隱約可見腹中卵粒，生殖孔圓形外翻，呈粉紅色，用手輕壓腹部，有卵粒流出；雄鰍要求腹部沒有明顯膨大，生殖孔狹長凹陷，呈暗紅色，輕壓腹部有乳白色精液流出，胸鰭追星明顯，尾部上1/3處有狹長的隆起[13，17-18]。

1.3 懷卵量測定

挑選用于雜交試驗的大鱗副泥鰍和常德本地泥鰍雌性親本各18尾，其中大鱗副泥鰍體重平均體質(zhì)量為（121.45±12.51）g，平均體長為（23.75±1.94）cm；常德本地泥鰍平均體質(zhì)量為（58.45±4.67）g，平均體長（15.48±0.52）cm，用麻醉劑間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽（MS-222）麻醉后，用清水洗凈，毛巾擦干后稱重并解剖，統(tǒng)計絕對懷卵量，并計算相對懷卵量。

1.4 催產(chǎn)

將大鱗副泥鰍（P♀）×常德本地泥鰍（M♂）的雜交模式分為6組，每組親本30尾（雌雄比1∶1）放入裝有曝氣后自來水的塑料箱81 cm×59 cm×51 cm）中，水深 40 cm；大鱗副泥鰍（P♂）×泥鰍（M♀）也分為 6組，每組親本30尾（雌雄比1∶1）放入裝有曝氣后自來水的塑料箱（81 cm×59 cm×51 cm）中，水深40 cm。催產(chǎn)劑選用DOM、HCG、LRH－A2三種組合，用量為 DOM 0.25 mg＋LRH－A23μg＋HCG 150 IU[19]。采用兩次注射催產(chǎn)，第一次注射時間為20：30，采用肌肉注射，在背鰭后緣針頭與軀體成45°，注射深度為0.2～0.3 cm。每尾雌鰍注射0.5 mL，雄鰍劑量減半，將打過催產(chǎn)針的雄鰍和雌鰍放入不同的水箱。12 h后第2次注射，注射劑量與第1次相同，注射后的雌雄個體按1∶1放入同一水箱中。催產(chǎn)期間水溫 21～22 ℃，溶氧 4.2～5.7 mg/L，pH 值 7.1～7.5。每8 h換水1次，換水量為總量的1/3。

1.5 人工授精

當(dāng)雄性個體追逐雌性個體，輕壓雌性腹部有卵粒流出，輕壓雄性有白色精液流出時。采用干法人工授精，將親本撈出，使毛巾擦干，將2～3條雌鰍的卵粒擠入消毒干凈的白瓷碗中。同時，殺死雄鰍，取出精巢，剪碎研磨，制成精液，隨后倒入瓷碗中，用羽毛輕輕攪動，然后用清水沖洗幾次，用羽毛將受精卵輕輕劃入孵化設(shè)備中。

1.6 人工孵化

受精卵采用120目、容積為30 cm×20 cm×25 cm的充氣式網(wǎng)箱孵化，網(wǎng)箱懸掛于81 cm×59 cm×51 cm的水箱中，水深40 cm。放卵密度為80 000粒/m3，每4 h換水1次，每次換水量為總量的1/3。孵化期間水溫 22～24℃，溶氧 5.0～6.5 mg/L，pH 值為 7.0～7.2。

1.7 苗種培育

池塘提前進(jìn)行消毒，7 d后注水，利用微生態(tài)產(chǎn)品培育開口餌料。當(dāng)孵出的幼苗平游后，轉(zhuǎn)移至池塘進(jìn)行培育。幼苗下塘后7 d，利用粉狀商品飼料加水稀釋后全池潑灑，早晚各1次。當(dāng)幼苗長至3 cm左右時，投喂粒徑0.5 mm的膨化商品飼料。

1.7 數(shù)據(jù)處理

試驗測得的數(shù)據(jù)用Excel 2016進(jìn)行初步整理，用SPSS22進(jìn)行單因素方差分析，所有數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 懷卵量

大鱗副泥鰍和常德本地泥鰍的相對懷卵量與絕對懷卵量結(jié)果見表1。結(jié)果表明，大鱗副泥鰍絕對懷卵量顯著高于本地泥鰍（P＜0.05），而大鱗副泥鰍的相對懷卵量顯著低于本地泥鰍（P＜0.05）。

表1大鱗副泥鰍和常德本地泥鰍的相對懷卵量與絕對懷卵量

2.2 受精率與孵化率

大鱗副泥鰍（P♀）×泥鰍（M♂）的產(chǎn)卵量5 940～8 193粒/尾，平均為7 279±1 024 粒/尾。受精率為6.40～29.00%，平均為15.00%±9.02%；孵化率為6.30～35.90%，平均為 22.10±4.25%（表 2）。

泥鰍（M♀）×大鱗副泥鰍（P♂）的產(chǎn)卵量為5 430～8 760粒/尾，平均為 7 184粒/尾。受精率為4.00%～34.40%，平均為17.63±12.92；孵化率為 5.00%～36.10%，平均為21.63%±5.50%（表 2）。泥鰍與大鱗副泥鰍正反交受精率和孵化率差異不具統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討論

雌性親本懷卵量是苗種繁育數(shù)量的多少的前提條件。研究表明，12～15 cm體長的大鱗副泥鰍雌鰍懷卵約1～1.5萬粒；20 cm體長的親鰍懷卵達(dá) 2.4萬粒以上[20]。本地泥鰍體長8 cm的雌鰍，懷卵量約2 000粒，10 cm的懷卵量為7000粒，12 cm的懷卵量1～1.4萬粒，體長15 cm的懷卵量為1.2～1.8萬粒，體長20 cm的懷卵量為2.4萬粒[20]。個體越大，泥鰍和大鱗副泥鰍的平均絕對懷卵量越大[6，13]。楊興麗研究表明，四倍體泥鰍為父本與大鱗副泥鰍為母本雜交的到的三倍體泥鰍多項營養(yǎng)指標(biāo)明顯高于大鱗副泥鰍[22]。該試驗結(jié)果表明，大鱗副泥鰍的絕對懷卵量顯著大于常德本地泥鰍（P＜0.05），因此，選擇常德本地泥鰍作為父本，大鱗副泥鰍作為母本是比較優(yōu)選的雜交育種方案。

李懋等[23]和趙振山等的研究表明[24]，泥鰍與大鱗副泥鰍遠(yuǎn)緣雜交具備可行性，且無論以泥鰍為母本，還是以大鱗副泥鰍為母體，雜交子代都可正常發(fā)育，且有較高成活率，這一現(xiàn)象反映兩者雜交具有較高親和性[21]。該研究的結(jié)果也表明，大鱗副泥鰍與常德本地的泥鰍進(jìn)行雜交育種是可行的。但泥鰍和大鱗副分屬花鰍亞科中的泥鰍屬和副泥鰍屬[1]，泥鰍的染色體有2n=100和2n=50兩種，其染色體組型分別為四倍體和二倍體[5，16]，而大鱗副泥鰍的染色體只有n=48一種，染色體倍性為二倍體[25]。泥鰍和大鱗副泥鰍兩者進(jìn)行雜交，為不同屬間的遠(yuǎn)緣雜交[26]。方禮豹研究表明，用二倍體泥鰍與大鱗副泥鰍進(jìn)行正反交，其受精率與孵化率分別為87.32%±2.29%、61.41%±3.45%和84.64%±2.21%、74.46%±4.19%；用四倍體泥鰍與大鱗副泥鰍進(jìn)行正反交，其受精率與孵化率分別為，85.66%±2.54%、55.91%±5.42%和82.62%±3.11%、63.34%±4.39%[25]。不同地區(qū)分布的泥鰍群體有所不同，其染色體倍性不盡相同[27]，該研究并未對本地泥鰍的染色體倍性進(jìn)行鑒定，可能存在兩種染色體數(shù)目不同的精子與同一種卵子受精（P♀ ×M♂）或2種不同染色體數(shù)目的卵子與同一種精子受精（M♀ ×P♂）的情況，有可能存在受精混亂，進(jìn)而導(dǎo)致泥鰍與大鱗副泥鰍雜交受精率和孵化率極低。因此，在后期研究中需要鑒別泥鰍的染色體倍性。

4 結(jié)論

該研究表明，大鱗副泥鰍與常德本地泥鰍進(jìn)行雜交育種是可行的，但需要對常德本地泥鰍的染色體倍性進(jìn)行鑒定。大鱗副泥鰍的絕對懷卵量顯著大于常德本地泥鰍，可選擇大鱗副泥鰍為母本，常德本地泥鰍作父本進(jìn)行雜交育種。