重組水皰性口炎病毒疫苗的研制現狀

李文桂,陳雅棠

重慶醫科大學附屬第一醫院 傳染病寄生蟲病研究所，重慶 400016

水皰性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus，VSV）所致的水皰性口炎是一種蟲媒介導的人獸共患病，主要感染家畜和野生嚙齒類動物，常用滅活疫苗和弱毒苗等進行免疫預防。VSV是一種負鏈RNA病毒，基因組大小為11 kb，可以插入4.5 kb的外源基因，研究發現插入的外源基因較穩定，可高水平表達外源蛋白[1-2]。采用基因重排或刪除技術可以使VSV減毒，從而改造成理想的疫苗載體[3-4]。pVSV-GFP和pVSV-EGFP等重組質粒可以表達綠色熒光蛋白（GFP）或增強型綠色熒光蛋白（EGFP），這為篩選水皰性口炎病毒提供了方便[5-6]。國內外學者報道了大量重組水皰性口炎病毒疫苗，以水皰性口炎病毒為載體的病原體疫苗包括：埃博拉病毒（rVSV-GP）、馬爾堡病毒（rVSV-G）、Ⅰ型人類免疫缺陷病毒（rVSV-env/gag）、猴免疫缺陷病毒（rVSV-Gag）、猴逆轉錄病毒2型（rVSV-env）、嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒（rVSV-St19）、豬流行性腹瀉病毒（rVSV-St19）、呼吸道合胞病毒（rVSV-G/F）、尼帕病毒（rVSV-G/F）、拉沙病毒（rVSV-GPC）、淋巴細胞脈絡膜炎病毒（rVSV-GP）、柯薩奇病毒B3型（rVSV-VP1）、腸道病毒 71型（rVSV-VP1）、口蹄疫病毒（rVSVVP1）、人乳頭瘤病毒16型（rVSV-E7）、棉尾兔乳頭瘤病毒（rVSV-L1/E7）、漢坦 病毒（rVSVGPC）、辛諾柏病毒（rVSV-GPC）、安第斯病毒（rVSV-GPC）、克里米亞-剛果出血熱病毒（rVSVGPC）、巨細胞病毒（rVSV-gB）、單純皰疹病毒2型（rVSV-gD）、禽流感病毒（rVSV-HA/NP）、乙型肝炎病毒（rVSV-MS）、基孔肯雅病毒（rVSV-E2）、諾如病毒（rVSV-VP1）、藍舌病毒8型（rVSV-VP2）、博爾納病病毒（rVSV-GPC）、牛痘病毒（rVSVL1R/B5R）、結核分支桿菌（rVSV-Ag85A/TFP846）、潰瘍分枝桿菌（rVSV-Mu13720）、鼠疫耶爾森菌（rVSV-LcrV）和曼氏血吸蟲（rVSV-SmHSP70）等。本文將綜述這些水皰性口炎病毒介導的病原體疫苗的研制現狀。

1 重組水皰性口炎病毒抗病毒

1.1 絲狀病毒

1.1.1 埃博拉病毒 埃博拉病毒（Ebola virus，EBOV）感染可導致埃博拉出血熱。EBOV通常有5種基因型，即扎伊爾型、蘇丹型、科特迪亞型、萊斯頓型和本迪布焦型，其中扎伊爾型和蘇丹型EBOV的致死率可高達50%～90%。其基因組的ORF1和ORF2分別編碼GP1和GP2蛋白，它們組成異二聚體GP1/GP2蛋白，主要參與病毒的復制。將GP1/GP2蛋白的DNA疫苗注射小鼠可誘導一定的保護力[7]。邵鈺等[8]以EBOV基因組的DNA為模板擴增GP基因，插入pCI-R2-VSV-FL得pCI-R2-VSVΔG-GP，加入pBS-N、pBS-L和pBS-N等輔助質粒后，共同轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的53 kD的GP53蛋白可被陽性血清所識別，免疫電鏡證實重組病毒的粒子外觀呈子彈樣狀態。Wong等[9]將2×104PFU的rVSV-GP疫苗腹腔注射BALB/c鼠，第一次注射后6.5、9和12個月分別腹腔注射103LD50埃博拉病毒MA株進行攻擊，攻擊后15 d提示第一次接種后6.5、9和12個月攻擊組的存活率分別為 100%（5/5）、100%（5/5）和 83%（10/12），而對照組為0（0/5）。接著，他們將2×105PFU的rVSV-GP疫苗腹腔注射豚鼠，分別在第一次注射后7、12和18個月用103LD50埃博拉病毒GA株進行腹腔注射攻擊，攻擊后15 d計數存活，提示第一次接種后7、12和18個月攻擊組的存活率分別為80%（4/5）、100%（6/6）和100%（6/6），而對照組均為 0（0/4）。Lennemann 等[10]將 2×103、2×104、2×105、2×106和 2×107PFU 的 rVSV-GP 疫苗肌肉注射C57BL/6鼠。第一次注射后3周加強1次，第一次注射后6周顯示106和107PFU接種組的血清IgG升高，此時借助腹腔注射途徑用103PFU埃博拉病毒GA株進行攻擊，攻擊后4周各組的存活率分別為 0（0/10）、0（0/10）、20%（2/10）、80%（8/10）和100%（10/10），而對照組為0（0/10）。

Geisbert等[11]將1×107PFU的rVSV-GP疫苗肌肉注射恒河猴，注射后30 d肌肉注射103PFU扎伊爾型Kikwrt株進行攻擊，攻擊后30 d取血和鼻拭子，熒光定量PCR檢測提示接種組的病毒負荷顯著降低，免疫組和對照組存活率分別為67%（4/6）和0（0/3）。Mire等[12]將2×107PFU重組病毒肌肉注射恒河猴，注射后4周血清IgG升高，滴度為1∶40～1∶80，此時經肌肉注射途徑用1×103PFU本迪布焦型EBOV進行攻擊，攻擊后4周免疫組和對照組存活率分別為 100%（3/3）和0（0/3）。Fal?zarano等[13]將2×107PFU重組病毒肌肉注射恒河猴，注射后3周經肌肉注射方法用104TCID50本迪布焦型EBOV進行攻擊，攻擊后4周接種組和對照組存活率分別為100%（4/4）和25%（1/4），接種組的肛門和喉拭子病毒負荷下降至1/104。Meni?cucci等[14]將5×107PFU重組病毒肌肉注射恒河猴，注射后28 d通過肌肉注射方法用103PFU埃博拉病毒進行攻擊，攻擊后1周經轉錄組學檢測接種組的外周血單核細胞（PBMC）提示其中的B細胞激活，攻擊后2周呈現大量基因表達變化，表明存在回憶反應。

Regules等[15]將3×106和2×107PFU重組病毒分別肌肉注射13例健康志愿者，發現血清IgG在注射后2～4周提升，注射后4周提升較高。Henao-Restrepo等[16]從446例感染埃博拉病毒的患者中挑選96例，通過肌肉注射途徑用2×107PFU重組病毒進行免疫治療，治療后84 d提示75.1%（72/96）患者的癥狀明顯改善。Regules等[17]將 3×107、2×108和1×109PFU重組病毒分別肌肉注射20例感染埃博拉病毒的患者，28 d加強1次，顯示血清IgG在第一次治療后14～180 d有提升，第一次治療后56 d提升較高，其中3個治療組的IgG滴度分別達1∶4222、1∶7352和1∶4079。

1.1.2 馬爾堡病毒 馬爾堡病毒（Marburg virus，MarV）是急性出血熱的病原之一，將重組G蛋白接種豚鼠和恒河猴均可產生有效的保護力[18]。Daddario等[19]采用肌肉注射方法將103PFU馬爾堡病毒Musoke株感染恒河猴，感染后30 min通過肌肉注射途徑用1×107PFU rVSV-G疫苗進行免疫治療，治療后37 d提示血清中和抗體提升，滴度可達1∶32～1∶32 100，流式細胞分析（FACS）證實血PBMC中IFN-γ+/TNF-α+CD4+T細胞數有一定程度的增加，治療后80 d免疫組和對照組存活率分別為100%（4/4）和0（0/4）。Woolsey等[20]通過肌肉注射途徑用50 PFU馬爾堡病毒Angola株感染恒河猴，感染后30 min肌肉注射107PFU rVSV-G疫苗進行免疫治療，治療后28 d血清IgG和IgM提升，病毒負荷降低，免疫組和對照組存活率分別為78%（7/9）和0（0/4）。Marzi等[21]將1×107PFU的rVSV-G疫苗肌肉注射恒河猴，注射后4周血清IgG提升，FACS顯現血PBMC中CD29+CD95+記憶性T細胞、CD28-CD95+記憶性T細胞和IgD-CD27+B細胞數目增加，ELISPOT提示血PBMC中IFN-γ+SFC增加，此時肌肉注射103PFU馬爾堡病毒Angola株進行攻擊，攻擊后5周血清的病毒負荷明顯降低，免疫組和對照組存活率分別為100%（6/6）和0（0/4）。

1.2 逆轉錄病毒

1.2.1Ⅰ型人類免疫缺陷病毒 Ⅰ型人類免疫缺陷病毒（Humanimmunodeficiencyvirustype1，HIV-1）的Gag基因編碼核衣殼蛋白P24、P7和內膜蛋白P14。Cooper等[22]將Gag基因插入pVSV得pVSV-Gag，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的55 kD的P55蛋白和39 kD的P39蛋白可被陽性血清所識別，將1×107PFU重組病毒肌肉注射或滴鼻接種BALB/c鼠，第一次接種后8周加強1次，第一次接種后12周血清IgG升高，脾CTL反應增強，ELISPOT顯現脾IFN-γ+SFC增多，流式細胞儀提示脾CD8+T細胞增加。HIV-1的env基因編碼前體蛋白gp160，gp160可分解為gp120和gp41。Wu 等[23]將 env基因插入 pTV-VSVNJ得 pTVVSVNJ-env，加入輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的160 kD的gp160蛋白、120 kD的gp120蛋白和41 kD的GP41蛋白可被陽性血清所識別。Haglund等[24]以pBSgpⅡa為模板擴增1.98 kb的Gag基因，插入 pVSV-MXA2得 pVSV-Gag，與pVSV-GP160重組得 pVSV-GagEnV，與 pVSV-89.6G重組得pVSV-GagEnVG，加入輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的55kD的P55蛋白和120 kD的gp120蛋白可被陽性血清所識別。Fuchs等[25]將 4.6×103、4.6×104、4.8×105、4.2×106和3.4×107PFU重組病毒分別肌肉注射10例健康志愿者，第一次注射后8周加強1次，血清中和抗體在第一次注射后2～10周提升，第一次注射后10周提升較高，第一次注射后10周經ELISPOT提示血PBMC中IFN-γ+SFCS增加，FACS表明血PBMC中IFN-γ+、IL-2+、CD4+T細胞以及CD40L+CD4+T細胞增多，以3.4×107PFU接種組的效果較好。

Tsuruno等[26]以pSGP34-1為模板擴增OX40L基因，插入pVSVΔG-CC4得pVSVΔG-CC4XL，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，免疫熒光顯示重組病毒可以表達融合蛋白分子。體外試驗表明用重組病毒處理HIV-1感染的molt-4/ⅢB/OX40細胞可增加細胞的融合，降低細胞內的病毒負荷。Okuma等[27]將CD4/CCR5基因插入pVSVΔG得pVSVΔG-CD4/CCR5，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，免疫熒光顯示重組病毒可以表達融合蛋白分子。將1×107人PBMC腹腔注射BALB/cARag2-RC-鼠，2 d后腹腔注射5 ng的HIV-1JRCSF病毒進行感染，3 d后腹腔注射4×106PFU重組病毒進行免疫治療，治療后7 d后取腹腔灌洗液，分離巨噬細胞，FACS提示HIV-1感染CD4+CD8+T細胞下降9%，而對照組下降61%。

1.2.2 猴免疫缺陷病毒 猴免疫缺陷病毒（Simi?an immunodeficiency virus，SIV）與HIV的核苷酸序列相似度較高，對CD4+T細胞和巨噬細胞均具有親嗜性。Egan等[28]將5×106PFU的rVSV-Gag疫苗肌肉注射或滴鼻接種恒河猴，第一次接種后8、16周加強2次，血清IgG和中和抗體在第一次接種后2～18周提升，第一次接種后18周提升較高。ELISPOT顯現血PBMC中IFN-γ+SFC在免疫后2～18周增多，第一次接種后10周提升較高，FACS提示血PBMC中CD3+CD8+T細胞在第一次接種后2～18周提升，第一次接種后10周提升較快，在第一次接種后21周陰道內滴入600 TCID50猴免疫缺陷病毒SHIV896PD株進行攻擊，攻擊后98 d血清的病毒負荷下降至1/105，FACS證實免疫組血PBMC中CD4+T細胞丟失50%，而對照組丟失90%。Okuma等[29]以pCD-CCR5為模板擴增CCR5基因，插入 pVSVΔG 得 pVSVΔG-CCR5，與 pBSCD4重組得pVSV-CCR5-CD4，與pCD-DC-SIGN重組得pVSV-CCR5-CD4-DC-SIGN，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的60 kD的CD4蛋白可被陽性血清所識別。體外試驗提示重組病毒可殺死SIV感染的細胞株，降低感染細胞內的病毒負荷。

1.2.3 猴逆轉錄病毒2型 猴逆轉錄病毒2型（Simian retrovirus type 2，SRV-2）可感染恒河猴和豬尾猴，主要引起免疫抑制疾病。將重組Env蛋白免疫豬尾猴可產生一定的保護力[30]。Gautam等[31]以SRV-2總RNA為模板擴增Env基因，插入p3X-FLAG得 p3X-env，與 pVSV-XN2重組得pVSV-EnV，加入輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的75 kD的Env蛋白可被陽性血清所識別。將1×107PFU疫苗滴鼻接種恒河猴，第一次接種后1個月加強1次，第一次接種后2個月經FACS提示血PBMC中CD20+B細胞增加，但CD4+T細胞無變化，此時靜脈注射2×106PFU猴逆轉錄病毒2型有毒株進行攻擊，攻擊后3個月接種組血清的病毒負荷顯著降低，接種組和對照組存活率分別為100%（4/4）和0（0/4）。

1.3 冠狀病毒

1.3.1 嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒 嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒（Severe acute respiratory syn?drome coronavirus，SARS-CoV）的棘突蛋白（S蛋白）是一種結構蛋白，St19是刪除了C端19個氨基酸殘基的S蛋白，將其DNA疫苗接種小鼠可誘導中和抗體的產生[32]。Fukushi等[33-34]以SARS-CoV的cDNA為模板擴增St19基因，插入pVSVΔG得pVSVΔG-St19，加入輔助質粒轉染293T細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的180 kD的St19蛋白可被陽性血清所識別。體外試驗提示33/34份SARS-CoV患者的血清可中和重組病毒的活性。Ge等[35]以SARS-CoV的cDNA為模板擴增S基因，插入pCAGGS得pCAGGS-S，加輔助質粒轉染293T細胞，對重組病毒進行陽性篩選，免疫熒光顯示重組病毒可以表達融合蛋白，體外試驗表明SARS-CoV感染的患者血清可阻斷重組病毒感染Vero E6細胞株。Kapadia等[36]以pVSV-S為模板擴增S基因，插入pVSV-XN2得pVSVXN2-S，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的180 kD的S蛋白可被陽性血清識別。將5×105PFU疫苗肌肉注射BALB/c鼠，血清IgG在第一次注射后4～13周提升，第一次注射后5周提升較高，滴度可達1∶906。

1.3.2 豬流行性腹瀉病毒 豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）感染是豬流行性腹瀉的病因之一。病毒的棘突蛋白（S蛋白）主要參與病毒的黏附和融合，St19是刪除C端19個氨基酸殘基的S蛋白，可誘導仔豬產生一定的保護力[37]。Ke等[38]以PEDV的基因組DNA為模板擴增St19基因，插入pVSVMT得pVSV-St19，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的170 kD的St19蛋白可被陽性血清識別。將1×107PFU重組病毒肌肉注射仔豬，第一次注射后2和4周加強2次，第一次注射后6周血清中和抗體提升，此時口服100 TCID50豬流行性腹瀉病毒SH2012株進行攻擊，攻擊后10 d直腸拭子的病毒負荷顯著降低，免疫組和對照組存活率分別為100%（10/10）和 0（0/10）。

1.4 副粘病毒

1.4.1 呼吸道合胞病毒 呼吸道合胞病毒（Respi?ratory syncytial virus，RSV）感染主要引起嬰幼兒毛細支氣管炎和支氣管肺炎，重組G/F蛋白在RSV的黏附和融合中起作用，它們可誘導棉鼠產生一定的保護力[39]。Kahn等[40-41]將G/F基因插入pVSVΔG得pVSVΔG-G/F，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的90 kD的G蛋白和140 kD的二聚體F蛋白可被陽性血清識別。將1.25×103PFU重組病毒滴鼻接種BALB/c鼠，第一次接種后4周加強1次，第一次接種后6周血清IgG和中和抗體提升，第一次接種后8周用1.2×105PFU呼吸道合胞病毒進行滴鼻攻擊，攻擊后4 d，rVSV-G接種組、rVSV-F接種組和對照組每克肺組織的病毒負荷分別為106、50和106PFU，提示rVSV-F疫苗可產生較好的保護力。Johnson等[42]以p5039為模板擴增F基因，插入pVSV-Gstem得pVSV-F，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的70 kD的F蛋白可被陽性血清識別。將107PFU重組病毒肌肉注射BALB/c鼠，第一次注射后4周加強1次，第一次注射后8周血IgG、IgG1和IgG2a提升，IgG2a和IgG1比值大于1，此時用106PFU呼吸道合胞病毒A2株進行滴鼻攻擊，攻擊后7 d接種組肺組織的病毒負荷下降至1/103，FACS證實肺和脾IFN-γ+/IL-2+/TNF-α+CD8+T細胞及CD62LCD44+記憶性T細胞增加。Wilmschen等[43]人工合成密碼子優化的Fsyn基因，將其插入pVSVΔG得pVSVΔG-Fsyn，加入輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的140 kD的二聚體F蛋白可被陽性血清識別。將106PFU重組病毒肌肉注射BALB/c鼠，第一次注射后4和8周加強2次，第一次注射后12周血清IgG提升，第一次注射后16周用106PFU呼吸道合胞病毒進行滴鼻攻擊，攻擊后5 d免疫組肺組織的病毒負荷下降至1/103。

1.4.2 尼帕病毒 尼帕病毒（Nipah virus，NiV）主要引起呼吸道感染，重癥常伴有病毒性腦炎等并發癥。糖蛋白（G）和融合蛋白（F）是病毒包膜的主要成分，將它們接種貓可抵抗尼帕病毒的致死攻擊[44]。Lo等[45]將1×106感染粒子（infectious parti?cles，IP）的rVSV-G/F疫苗肌肉注射倉鼠，注射后4周血清中和抗體提升，滴度為1∶2560～1∶5160，此時腹腔注射105TCID50尼帕病毒Malaysia株進行攻擊，攻擊后4周，rVSV-G接種組、rVSV-F接種組和對照組的存活率分別為100%（10/10）、100%（10/10）和0（0/10）。DeBuysscher等[46]將 1×105PFU的rVSV-G疫苗腹腔注射倉鼠，第一次注射后4和6 d加強2次，第一次注射后9 d腹腔注射103LD50尼帕病毒Malaysia株進行攻擊，攻擊后6周血清中和抗體提升，肺組織病變減輕，肺組織的病毒負荷降低，免疫組和對照組存活率分別為100%（6/6）和 0（0/6）。Mire等[47-48]將1×107PFU 的rVSV-G/F疫苗皮下注射雪貂，注射后4周血清IgG和中和抗體提升，此時用5×103PFU尼帕病毒進行滴鼻攻擊，攻擊后4周腦、肺和脾組織的病毒負荷均顯著降低。隨后將1×107PFU的rVSV-G/F疫苗肌肉注射非洲綠猴，注射后4周血清中和抗體提升，滴度為1∶640，此時氣管內注射5×105PFU尼帕病毒B株進行攻擊，攻擊后4周接種組和對照組存活率分別為100%（3/3）和0（0/3）。Prescott等[49]將1×107PFU的rVSV-G疫苗肌肉注射非洲綠猴，注射后2周血清IgG提升，FACS顯示血PBMC中IFN-γ+CD8+T細胞增加，此時氣管內注射105TCID50尼帕病毒Malaysia株進行攻擊，攻擊后2周肺組織的病毒負荷下降至1/104。

1.5 沙粒病毒

1.5.1 拉沙病毒 拉沙病毒（Lassa virus，LasV）感染是病毒性出血熱的病因之一，其基因組的S片段編碼核蛋白（NP）和糖蛋白前體（GPC），它們均是有希望的免疫分子[50-51]。Satronetz等[52]以LasV的總RNA為模板擴增NP基因，插入pVSV4.1得pVSV4.1-NP，加入輔助質粒轉染Vero細胞，對重組病毒進行陽性篩選，免疫熒光顯示重組病毒可以表達融合蛋白。將1×106PFU重組病毒腹腔注射豚鼠，注射后4周用104TCID50拉沙病毒Z-132株進行腹腔注射攻擊，攻擊后45 d血、肝、肺和脾組織的病毒負荷降低，免疫組和對照組存活率分別為 100%（9/9）和0（0/5）。Stein等[53]將 1×106PFU的rVSV-GPC腹腔注射豚鼠，注射后4周用104TCID50拉沙病毒Soromba-R株進行攻擊，攻擊后42 d肺和脾組織的病毒負荷降低，免疫組和對照組存活率分別為100%（6/6）和16.7（2/6）。

1.5.2 淋巴細胞脈絡叢腦膜炎病毒 淋巴細胞脈絡膜炎病毒（Lymphocytic choriomeningitis virus，LCMV）的糖蛋白gP具有嗜神經性[54]。Muik等[55]以LCMV基因組的DNA為模板擴增gP基因，插入pVSVΔG得pVSVΔG-GP，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，免疫熒光顯示重組病毒可以表達融合蛋白。

1.6 腸道病毒

1.6.1 柯薩奇病毒B3型 柯薩奇病毒B3型（Cox?sackievirus type 3，CVB3）感染是病毒性心肌炎的病因之一。VP1蛋白是一種結構蛋白，可誘導小鼠產生一定的保護力[56]。Wu等[57-58]以CVB3的基因組DNA為模板擴增VP1基因，插入pVSV-XN2得pVSVXN2-VP1，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的VP1蛋白可被陽性血清識別。將1×105PFU重組病毒滴鼻接種BALB/c鼠，接種后2周血清IgG、糞SIgA升高，脾細胞CTL反應增強，FACS顯現脾IFN-γ+/IL-2+/TNF-α+CD4+T細胞增加，此時肌肉注射3 LD50柯薩奇病毒B3型進行攻擊，攻擊后2周接種組和對照組存活率分別為50%（6/12）和0（0/12），接種組的心肌炎癥減輕。

1.6.2 腸道病毒71型 腸道病毒71型（Enterovi?rus type 71，EV71）感染可導致幼兒手足口病，VP1蛋白是一種有效的疫苗候選分子。Yan等[59]以pCD-EV71為模板擴增VP1基因，插入pVSVXN2得pVSV-VP1，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的VP1蛋白可被陽性血清識別。將107PFU重組病毒肌肉注射BALB/c鼠，第一次注射后3周加強1次，第一次注射后5周血清IgG提升，脾細胞產生大量IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10等細胞因子，此時腹腔注射106PFU腸道病毒71型進行攻擊，攻擊后13 d接種組和對照組存活率分別為100%（5/5）和20%（1/5）。

1.6.3 口蹄疫病毒 口蹄疫病毒（Foot-andmouth disease virus，FMDV）感染可引起口蹄疫。將VP1蛋白的DNA疫苗接種小鼠可誘導一定的抵抗力[60]。Capozzo等[61]以口蹄疫病毒C3株的基因組DNA為模板擴增VP1基因，插入pVSV得pVSV-VP1，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的60 kD的VP1蛋白可被陽性血清識別。將5×107PFU重組病毒肌肉注射5月齡小牛，血清IgG在第一次注射后2～14周提升，第一次注射后14周血清IFN-γ升高。

1.7 乳頭瘤病毒

1.7.1 人乳頭瘤病毒16型 人乳頭瘤病毒16型（Human papillomavirus type 16，HPV-16）可導致宮頸癌和生殖器感染。重組E6E7蛋白具有一定的抗瘤活性[62]。Liao等[63]以HPV16的基因組DNA為模板擴增E7基因，插入pVSV-XN1得pVSVE7，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的20 kD的E7蛋白可被陽性血清識別。將5×104TC-1癌細胞株皮下注射C57BL/6鼠建立腫瘤模型，建模后1周肌肉注射5×106PFU重組病毒進行免疫治療，治療后1周脾CTL反應增加，FACS顯現脾IFN-γ+CD8+T細胞增多，治療后4周接種組的腫瘤數目減少，腫瘤體積縮小。

1.7.2 棉尾兔乳頭狀瘤病毒 棉尾兔乳頭瘤病毒（Cottontail rabbit papillomavirus，CRPV）感染可導致兔乳頭瘤。L1蛋白和E7蛋白在病毒復制和致病過程中起作用，是有效的免疫分子[64]。Reuter等[65]以pLAⅡ-CRPV為模板擴增L1基因，插入pVSVMXA2XN2得PVSV-L1，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的55 kD的L1蛋白可被陽性血清識別。將5×105PFU重組病毒滴鼻接種新西蘭大白兔，第一次接種后7周加強1次，第一次接種后13周血清中和抗體提升，滴度為1∶6400～1∶12 800，此時用5×105PFU棉尾兔乳頭瘤病毒進行滴鼻攻擊，攻擊后8周接種組和對照組的 保 護 力 分 別 為 100%（10/10）和 0（0/12）。Brandsma等[66]以pShuttle-E7為模板擴增E7基因，插入pVSV-XN2得pVSV-E7，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，免疫熒光顯示重組病毒可以表達融合蛋白。首先將5×105PFU棉尾兔乳頭瘤病毒感染新西蘭大白兔，隨后皮下注射4×107PFU重組病毒進行免疫治療，治療后11周血清中和抗體升高，滴度為1∶640～1∶1813，治療組的腫瘤數目和體積減少。

1.8 布尼亞病毒

1.8.1 漢坦病毒 漢坦病毒（Hantavirus）感染可導致流行性出血熱，其基因組M片段編碼的包膜糖蛋白前體（GPC）具有較強的免疫原性[67]。Ogino等[68]以漢坦病毒的總RNA為模板擴增GPC基因，插入pCAGGSmcs得pCAGGS-GPC，加輔助質粒轉染293T細胞，對重組病毒進行陽性篩選，免疫熒光顯示重組病毒可以表達融合蛋白。Lee等[69]將1×107PFU重組病毒皮下注射BALB/c鼠，第一次注射后3和6周加強2次，第一次注射后7周血清IgG和中和抗體提升，FACS顯示脾IFN-γ+CD8+T細胞增加，此時腹腔注射4個病灶形成單位（fo?cus-forming units，FFU）漢坦病毒 76-118株進行攻擊，攻擊后3周接種組和對照組存活率分別為100%（8/8）和0（0/8）。

1.8.2 辛諾柏病毒和安第斯病毒 辛諾柏病毒（Sin Nombre virus，SNV）和安第斯病毒（Andes vi?rus，ANDV）都是新型漢坦病毒，可引起漢坦病毒心 肺 綜 合 征（Hantaviruscardiopulmonary syn?drome，HCPS）。重組GPC蛋白可裂解為G1和G2蛋白，誘導宿主產生一定的保護力[70]。Warner等[71]以SNV/ANDV的總RNA為模板擴增GPC基因，插入pVSVΔG得pVSVΔG-GPC，加輔助質粒轉染Vero E6細胞，對重組病毒進行陽性篩選，免疫熒光顯示重組病毒可以表達融合蛋白。將105PFU重組病毒腹腔注射倉鼠，注射后4周血清中和抗體提升，此時腹腔注射2×105PFU辛諾柏病毒進行攻擊，攻擊后1周血、肝、脾和肺組織的病毒負荷下降至1/103，接種組和對照組存活率分別為100%（6/6）和16.7%（1/6）。Brown等[72]將105PFU重組病毒腹腔注射倉鼠，注射后4周血清IgG和中和抗體升高，此時腹腔注射100 LD50安第斯病毒進行攻擊，攻擊后2周接種組和對照組存活率分別為100%（12/12）和0（0/9）。

1.8.3 克里米亞-剛果出血熱病毒 克里米亞-剛果出血熱病毒（Crimean-Congo haemorrhagic fe?ver virus，CCHFV）感染可引起克里米亞-剛果出血熱，該病的主要癥狀是發熱、頭痛、出血和低血壓休克等。其基因組M節段編碼的GPC蛋白可裂解為Gn和Gc蛋白，含有中和抗體表位[73]。Ro?driguez等[74]以CCHFV的總RNA為模板擴增GPC基因，插入pVSVΔG得pVSV-GPC，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的80 kD的GPC蛋白可被陽性血清識別。將1×107PFU重組病毒腹腔注射STAT-/-鼠，第一次注射后3周加強1次，第一次注射后5周血清中和抗體提升，此時腹腔注射100PFU克里米亞-剛果出血熱病毒Ibar10200株進行攻擊，攻擊后5周接種組和對照組存活率分別為100%（10/10）和0（0/10）。

1.9 皰疹病毒

1.9.1 巨細胞病毒 巨細胞病毒（Cytomegalovi?rus，CMV）感染是胎兒先天性畸形的病因之一。其基因組的UL55編碼150 kD的糖蛋白B（gB）可誘導中和抗體產生[75]。Wilson等[76]以pCMV-gB為模板擴增gB基因，插入pVSV-XN2得pVSV-gB，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，免疫熒光顯示重組病毒可以表達融合蛋白。將5×106PFU重組病毒滴鼻接種BALB/c鼠，接種后4周血清中和抗體提升，滴度為1∶42 000～1∶84 000，脾細胞產生大量IFN-γ，此時腹腔注射2.25×103PFU巨細胞病毒Smith株進行攻擊，攻擊后10 d肺、脾和唾液腺組織的病毒負荷明顯減少。

1.9.2 單純皰疹病毒2型 單純皰疹病毒2型（Herpes simplex virus type 2，HSV-2）感染可引起生殖器皰疹。糖蛋白D（gD）是一種結構蛋白，具有較強的免疫原性[77]。Natuk等[78]以HSV-2的基因組DNA為模板擴增gD基因，插入pVSV1得pVSV-gD，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的50 kD的gD蛋白可被陽性血清識別。將105PFU重組病毒滴鼻接種BALB/c鼠，第一次接種后3周加強1次，第一次接種后6周血清IgG提升，脾CTL反應增強，脾細胞產生大量TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-5等細胞因子，FACS顯示脾IFN-γ+CD4+T細胞增加，此時陰道內注入100 LD50單純皰疹病毒2型186株進行攻擊，攻擊后4周接種組和對照組的保護力分別為100%（10/10）和20%（2/10）。

1.10 其他病毒

1.10.1 禽流感病毒 禽流感病毒（Avian influen?za virus，AIV）感染可導致禽流感。AIV的HA蛋白DNA疫苗免疫小鼠可低抗H5N1株的攻擊[79]。Roberts等[80]將5×107PFU的rVSV-HA疫苗滴鼻接種BALB/c鼠，第一次接種后3周加強1次，第一次接種后5周血清IgG提升，滴度為1∶1024，血清中和抗體升高，滴度為1∶2560，此時用10 LD100禽流感病毒A/WSN株進行滴鼻攻擊，攻擊后2周接種組和對照組存活率分別為100%（10/10）和60%（6/10）。Kalhoro等[81]以pTM1-HA為模板擴增HA基因，插入pVSVΔG得pVSVΔG-HA，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的50 kD的HA1和25 kD的HA2蛋白可被陽性血清識別。將2×107PFU重組病毒肌肉注射3周齡仔雞，第一次注射后3周加強1次，第一次注射后5周血清中和抗體提升，此時用107EID50禽流感病毒H7N1株進行點眼滴鼻攻擊，攻擊后3周口咽拭子和泄殖腔拭子無病毒負荷，接種組和對照組存活率分別為100%（10/10）和0（0/10）。

Barefoot等[82-83]以禽流感病毒PR8株的基因組DNA為模板擴增HA和NP基因，插入pVSV-XN2得pVSV-HA/NP基因，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的60 kD的HA蛋白和NP蛋白可被陽性血清識別。將2.5×106PFU的rVSV-HA和2.5×106PFU的rVSV-NP組成混合疫苗后滴鼻接種C57BL/6鼠，第一次接種后1周FACS顯示脾和支氣管肺泡灌洗液（BALF）中CD8+T細胞增加，第一次接種后5周血清中和抗體提升，此時用100 MLD50禽流感病毒PR8株進行滴鼻攻擊，攻擊后2周免疫組和對照組存活率分別為100%（10/10）和 0（0/10）。然后用 100 MLD50禽流感病毒PR8株滴鼻感染BALB/c鼠，隨后通過肌肉注射途徑用5×108PFU的rVSV-HA疫苗進行免疫治療，治療后10 d血清中和抗體提升，FACS顯示血PBMC中CD8+T細胞增加，但肺組織的病毒負荷無明顯減少，接種組和對照組存活率分別為100%（10/10）和20%（2/10）。

Schwartz等[84-86]以禽流感病毒H5N1株的總RNA為模板擴增HA基因，插入pBSK得pBS-HA，與pVSV-XN2重組得pVSV-HA，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的50 kD的HA蛋白可被陽性血清識別。將106PFU重組病毒肌肉注射BALB/c鼠，第一次注射后4周加強1次，第一次注射后3個月血清中和抗體提升，分別于第一次注射后3、5.5和7.5個月用100 LD50禽流感病毒H5N1株進行滴鼻攻擊，攻擊后2周，3個接種組的存活率均為100%（13/13）、100%（6/6）和100%（7/7），而相應對照組的存活率均為0（0/13）、0（0/6）和0（0/7）。接著將107PFU重組病毒肌肉注射BALB/c鼠，第一次注射后2～5個月加強1次，第一次注射后3～5個月血清中和抗體提升，此時用100 LD50禽流感病毒H1N1異源株或H5N1同源株進行攻擊，攻擊后3 d，H5N1攻擊組的肺病毒負荷下降至1/103，而H1N1攻擊組則下降至1/10。隨后將4×107PFU重組病毒滴鼻接種恒河猴，第一次接種后2個月加強1次，第一次接種后3個月血清中和抗體提升。Ryder等[87]將2×105PFU重組病毒滴鼻接種BALB/c鼠，第一次接種后4周加強1次，第一次接種后2個月血清中和抗體提升，此時用10 LD50禽流感病毒H1N1異源株或H5N1同源株進行滴鼻攻擊，攻擊后2周，H1N1異源攻擊組、H5N1同源攻擊組和對照組的存活率分別為100%（12/12）、67%（8/12）和0（0/12）。

1.10.2 乙型肝炎病毒 乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）基因組的S和preS2基因分別編碼P33和P36蛋白，組成中等分子包膜表面蛋白（middle envelope surface protein，MS），將 MS的DNA疫苗注射小鼠可誘導體液免疫應答[88]。Co?bleigh等[89-90]將MS基因插入pVSV-XN2得pVSVMS，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，免疫熒光顯示重組病毒可以表達融合蛋白。將1×106PFU重組病毒滴鼻接種CB6F1鼠，第一次接種后3周加強1次，第一次接種后4周FACS顯示脾IFN-γ+/IL-2+/TNF-α+CD8+T細胞增加，第一次接種后8周肌肉注射10 μg PT-HBV1-3進行攻擊，攻擊后1周肝臟的病毒負荷降低。接著，將50 μg pCMV-S2/S肌肉注射HBV+CB6F1轉基因鼠，第一次注射后3周用1×106PFU重組VSV-MS疫苗進行滴鼻加強，第一次注射后4周血清IgG升高，脾CTL活性增強，ELISPOT證實脾IFN-γ+SFC增加。Chiale等[91]將20 μg pCD-core肌肉注射C57BL/6鼠，第一次注射后4和8周用1×106PFU的rVSV-core疫苗滴鼻加強2次，第一次注射后10周FACS顯示脾IFN-γ+CD8+T細胞增多，此時肌肉注射1×106PFU的rAAV-core進行攻擊，攻擊后2周血清病毒負荷明顯降低。

1.10.3 基孔肯雅病毒 基孔肯雅病毒（Chikungu?nya virus，CHIKV）感染可引起基孔肯雅熱，該病常伴有關節痛和皮疹。包膜蛋白E2是一種有效的免疫分子[92]。Chattopadhyay等[93]以CHIKV的總RNA為模板擴增E2基因，插入pVSVΔG得pVSVΔG-E2，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的50 kD的E2蛋白可被陽性血清識別。將1×107PFU重組蛋白肌肉注射BALB/c鼠，第一次注射后5周加強1次，第一次注射后60 d血清中和抗體提升，滴度為1∶200，此時皮下注射104PFU基孔肯雅病毒進行攻擊，攻擊后2周接種組和對照組存活率分別為100%（4/4）和0（0/4）。

1.10.4 諾如病毒 諾如病毒（Rorovirus）感染是病毒性胃腸炎的病因之一。將重組VP1蛋白接種小鼠可誘導較好的免疫應答[94]。Ma等[95]以諾如病毒基因組DNA為模板擴增VP1基因，插入pVSV（+）得pVSV-VP1，加輔助質粒轉染BSRTT細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的60 kD的VP1蛋白可被陽性血清識別。將106PFU重組病毒滴鼻注射BALB/c鼠，注射后5周血清IgG提升，糞SIgA升高，脾細胞增殖。Zhu等[96]將5×107PFU重組病毒肌肉注射下蛋的母雞，第一次注射后2周加強1次，第一次注射后4周雞蛋黃內的IgY抗體升高。

1.10.5 藍舌病毒8型 藍舌病毒8型（Blue?tongue virus serotype 8，BTV-8）是藍舌病的病原，主要感染家畜和野生嚙齒動物。BTV-8基因組含有10個節段，其中L2節段編碼的VP2蛋白可誘導中和抗體產生[97]。Kochinger等[98]以BTV-8的基因組DNA為模板擴增VP2基因，插入pVSVΔG得pVSVΔG-VP2，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，免疫熒光顯示重組病毒可以表達融合蛋白。將1×108感染單位（infec?tious units，IU）重組病毒肌肉注射ALP綿羊，第一次注射后3周加強1次，第一次注射后6周血清中和抗體提升，此時靜脈注射5×106PFU藍舌病毒8型進行攻擊，攻擊后2周血清病毒負荷降低。

1.10.6 博爾納病病毒 博爾納病病毒（Borna disease virus，BDV）具有嗜神經性，主要感染馬、羊的中樞神經系統，引起腦病。G基因編碼的GPC蛋白可裂解為GP1和GP2蛋白，在病毒侵襲神經元的過程中起作用[99]。Perez等[100]以BDV基因組DNA為模板擴增GPC基因，插入pVSVΔG得pVSVΔG-GPC，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的56 kD的GPC蛋白可被陽性血清識別。

1.10.7 牛痘病毒 牛痘病毒（Vaccinia virus，VV）存在2種感染形式，即胞內成熟的病毒體（intra?cellular mature virions，IMV）和胞外包被的病毒體（extracellular enveloped virion，EEV），其中L1R和B5R是IMV和EEV的主要抗原，均含有中和抗體表位[101-102]。Braxton等[103]以VV基因組DNA為模板擴增L1R和B5R基因，插入pVSV.XK4.1得pVSVL1R/B5R，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組病毒進行陽性篩選，Western印跡表明重組病毒呈現的35 kD的B5R蛋白和21 kD的L1R蛋白可被陽性血清識別。將1×105PFU重組病毒滴鼻接種BALB/c鼠，第一次接種后4周加強1次，第一次接種后7周血清IgG和中和抗體升高，此時用1.7×106PFU牛痘病毒WR株進行滴鼻攻擊，攻擊后12 d接種組和對照組的存活率分別為100%（10/10）和0（0/10）。

2 重組水皰性口炎病毒抗細菌

2.1 結核分支桿菌

結核分支桿菌（Mycobacteria tuberculosis）感染引起的結核病可累及全身多個臟器，但以肺結核最為常見。將Ag85A蛋白的DNA疫苗注射小鼠可產生細胞免疫應答[104]。Roediger等[105]以pJW23為模板擴增Ag85A基因，插入pVSV-XNDG得pVSV-Ag85A，加輔助質粒轉染A549細胞株，對重組菌進行陽性篩選，Western印跡表明重組菌呈現的40 kD的Ag85A蛋白可被陽性血清識別。將1×107PFU重組腺病毒Ad5-Ag85A肌肉注射BALB/c鼠，第一次注射后3周用1×107PFU的rVSV-Ag85A疫苗滴鼻加強，第一次注射后5周取氣道腔、肺和脾，FACS發現3種組織中IFN-γ+CD4+CD8+T細胞分別增加100、10和6倍，此時皮下注射1.5×104CFU結核分支桿菌H37RV株進行攻擊，攻擊后4周肺和脾的細菌負荷分別下降至1/5和1/10左右。

TFP846是結核分支桿菌RV3615C、RV2660C和Mtb10.4抗原的融合蛋白，其DNA疫苗可誘導較強的細胞免疫應答[106]。Zhang等[107]人工合成TFP848基因，插入pVSV-XN2得pVSV-TFP848，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組菌進行陽性篩選，Western印跡表明重組菌呈現的30 kD的TFP848蛋白可被陽性血清識別。將106PFU重組菌滴鼻接種BALB/c鼠，接種后2周脾細胞增殖，分泌高水平的INF-γ，接種后24周FACS顯示CD44+CD6ILlowCD25-CD4+記憶性細胞及CD44+CD6ILlowCD45R-CD8+記憶性細胞增加，此時用1×107CFU的卡介苗進行滴鼻攻擊，攻擊后6周肺組織的細菌負荷下降至1/50左右。

2.2 潰瘍分枝桿菌

潰瘍分枝桿菌（Mycobacterium ulcerans）感染是Buruli潰瘍的病因。Mu13720是一種肽聚糖蛋白，具有較強的免疫原性[108]。Bolz等[109]以潰瘍分枝桿菌Agy99株的基因組DNA為模板擴增Mul3720基因，插入 pUC57得pUC57-Mul3720，與pVSVΔG 重組得pVSVΔG-Mul3720，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組菌進行陽性篩選，Western印跡表明重組菌呈現的21 kD的Mul3720蛋白可被陽性血清識別。將107PFU重組菌肌肉注射BALB/c鼠，第一次注射后3周皮下注射30 μg重組Mul3720蛋白進行加強，第一次注射后7周血清IgG提升，脾細胞產生大量INF-γ、IL-2和IL-10等細胞因子，此時足墊注射8.4×103CFU潰瘍分枝桿菌S1013株進行攻擊，攻擊后60 d接種組的足墊病變明顯減輕，足墊的細菌負荷下降至1/104左右。

2.3 鼠疫耶爾森菌

鼠疫耶爾森菌（Yersinia pestis）感染可導致鼠疫。低鈣反應蛋白V（low calcium reactive pro?tein V，LcrV）是一種毒力抗原，接種小鼠可產生有效的保護力[110]。Palin等[111]以pBS-LcrV為模板擴增LcrV基因，插入pVSV-XN2得pVSV-LcrV，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組菌進行陽性篩選，Western印跡表明重組菌呈現的37 kD的LcrV蛋白可被陽性血清識別。將1×106PFU重組菌滴鼻接種BALB/c鼠，第一次接種后4周加強1次，血清IgG在第一次接種后4～18周提升，第一次接種后18周提升較高，第一次接種后5個月皮下注射104CFU鼠疫耶爾森菌C092株進行攻擊，攻擊后2周接種組和對照組存活率分別為80%（4/5）和0（0/5）。SsLcrV是含有一個信號肽序列（SS）的LcrV。Chattopadhyay等[112]以 pBS-LcrV 為模板擴增ssLcrV基因，插入pVSV1XN得pVSV1-ssLcrV，加輔助質粒轉染BHK-21細胞，對重組菌進行陽性篩選，免疫熒光顯示重組菌可以表達融合蛋白。將107、108和109PFU重組菌分別肌肉注射BALB/c鼠，血清IgG在注射后82 d升高，IgG2a與IgG1比值大于1，注射后3個月皮下注射1×104CFU鼠疫耶爾森菌C092株進行攻擊，攻擊后2周，107、108、109PFU接種組和對照組的存活率分別為12.5%（1/8）、50%（4/8）、87.5%（7/8）和0（0/8）。

3 重組水皰性口炎病毒抗曼氏血吸蟲

曼氏血吸蟲（Schistosoma mansoni，Sm）感染可導致曼氏血吸蟲病，其熱激蛋白70（SmHSP70）具有一定的免疫原性[113]。Kines等[114]將SmHSP70基因插入pLNHX-EGFP得pLNHX-EGFP-SmHSP70，加輔助質粒轉染NIH3T3細胞，對重組菌進行陽性篩選，免疫熒光顯示重組菌可以表達融合蛋白，Southern印跡提示SmHSP70基因插入VSV的基因組中，保護力實驗尚在進行。

4 結語

重組水皰性口炎病毒具有下述優點：VSV是一種負鏈RNA病毒，不具有感染性，必須以全長cDNA的正鏈為模板轉錄基因組RNA，裸露的基因組正鏈RNA與N蛋白結合完成衣殼化，在L/P聚合酶的輔佐下作為轉錄模板，開啟VSV感染粒子的復制；VSV含有自身的RNA聚合酶，當外源基因插入VSV載體后，能夠在聚合酶的作用下達到高水平轉錄，從而表達目的蛋白；插入的外源基因可作為一個獨立的轉錄單元，其轉錄質粒位于VSV的轉錄起始和終止信號，表達外源蛋白的效率較高；借助反向遺傳操作技術可人工缺失VSV囊膜G糖蛋白，使其完全被外源病毒相應功能的囊膜蛋白取代，裝配于病毒粒子表面，形成偽型病毒，誘導宿主產生免疫應答；VSV無反轉錄活性，不可能整合入宿主細胞的基因組中，感染后可被宿主細胞清除，生物安全性較高；VSV很少感染人體，幾乎沒有預先存在的免疫；VSV可以自然感染機體黏膜，可進行黏膜免疫；VSV接種劑量小，小劑量足以誘導宿主產生較好的免疫應答。

重組水皰性口炎病毒存在下述不足：非復制型機理的研究尚不深入；表達載體缺乏高效啟動子或增強子，導致表達效率較低；載體抗原和靶抗原可能存在競爭；母源抗體的干擾可影響重組VSV的接種效果。

隨著現代生物技術的發展，人們將對病毒、細菌和寄生蟲的基因組學、蛋白質組學、代謝組學、轉錄組學以及表觀遺傳學等進行深入的探索，從而闡明病原蛋白的抗原結構與功能的關系，篩選新的抗原分子，構建由各期抗原分子組成的多期多價疫苗。在重組水皰性口炎病毒的構建過程中，要深入了解各個啟動子的特性，弄清啟動子之間的相互作用是否影響外源基因的表達；選用不同的啟動子構建載體能否提高重組水皰性口炎病毒的遺傳穩定性；不同啟動子的反向串聯能否減少目的基因在轉錄水平上的干擾，促進目的基因的表達；重組水皰性口炎病毒共表達多種病原蛋白的探索；新型佐劑和疫苗載體的研制。相信隨著這些問題的闡明，必將推動重組水皰性口炎病毒疫苗的研究躍上一個新的臺階。