蓽茇酰胺逆轉人小細胞肺癌H446/DDP細胞耐藥性及機制的研究①

肖 娟 張華果 陳 潔 牛朝霞 楊紅梅

(河南醫學高等?？茖W校，鄭州 451191)

肺癌是對人類健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一，肺癌的發病率和死亡率一直位居惡性腫瘤譜第一位[1]。小細胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)約占肺癌發生率的20%，由于惡性程度高、侵襲性強、易轉移、多數SCLC患者在確診時已為晚期，失去了手術治療的最佳時機，因此放療和化療成為主要的治療手段。盡管大多數SCLC患者對初始化療較敏感，但極易產生化療耐藥性，導致治療失敗[2]。因此，逆轉化療耐藥性成為目前SCLC治療中亟待解決的問題之一。蓽茇酰胺(piperlongu-mine,PLM)，又名蓽茇明堿，是分離自蓽茇的一種生物堿類化合物。近年研究表明，PLM對前列腺癌、結腸癌、肺腺癌、肝癌和黑色素瘤等惡性腫瘤具有顯著的抑制作用[3-7]。Wang等[8]研究證實，PLM可逆轉人視網膜母細胞瘤耐藥株對長春新堿和卡鉑的耐藥性。但目前國內外尚未見PLM對SCLC順鉑(cisplatin,DDP)耐藥性逆轉作用的報道。本研究擬通過分子生物學方法探究PLM對人SCLC耐藥株H446/DDP細胞的逆轉作用及其分子機制。本研究有望為PLM治療SCLC奠定基礎。

1 材料與方法

1.1材料 人小細胞肺癌H446細胞購自中國科學院昆明細胞庫；胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)和RPMI1640培養基購自Hyclone公司；PLM和DDP購自美國Selleck公司；CCK-8試劑盒購自武漢博士德生物公司；AnnexinV-FITC凋亡檢測試劑盒、RIPA裂解液和ECL化學發光試劑盒購自碧云天生物技術有限公司；兔抗人P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多藥耐藥相關蛋白1(multidrug resistance associated protein 1,MRP1)、谷胱甘肽S轉移酶P1(glutathione S transferase P1,GSTP1)、Survivin、細胞周期蛋白A(cyclin A)、細胞周期依賴性蛋白激酶2(cyclin dependent kinase 1,CDK1)和β-actin單克隆抗體購自Abcam公司。

1.2方法

1.2.1細胞培養 A549細胞用含10%FBS的RPMI1640培養液培養，置于37℃、5%CO2的細胞培養箱內；……