miR-612對肝細胞癌干細胞特性影響及機制研究①

龍賀明 程海燕 施華球 鄢 俊

(贛南醫學院第一附屬醫院腫瘤內科，贛州 341000)

肝細胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上第五大常見惡性腫瘤，且發病率和死亡率呈逐年上升的趨勢[1，2]。HCC是我國第三大癌癥死亡原因，嚴重威脅人類的生命健康，而HCC的復發和轉移是導致肝癌患者預后差的主要原因[3]。因此，研究HCC復發轉移的分子機制，尋找干預HCC復發及轉移性的分子靶標勢在必行。研究報道，腫瘤干細胞(tumor stem cell,TSC)是存在于腫瘤中具有自我更新和無限增殖能力的一類細胞，是腫瘤復發轉移以及化放療抵抗的核心[4]，與腫瘤細胞的存活、增殖和復發轉移密切相關[5]，由此，研究TSC的調控機制是治療腫瘤改善患者預后的關鍵。微小RNA(microRNA)是一類長度約19～25個核苷酸的小分子非編碼單鏈RNA，其通過結合靶基因mRNA的3′非翻譯區，調控基因轉錄后表達水平[6]，在癌癥中的細胞增殖、轉移及其他生物過程中起關鍵作用[7]。研究分析，miR-612在膀胱癌、結腸癌等多種腫瘤中低表達[8,9]，而miR-612在HCC中低表達促進HCC細胞的增殖、遷移、侵襲和轉移[10]，miR-612在HCC中發揮的作用提示其可能與HCC的干細胞特性有關，因此本文以HCC細胞系為研究對象，研究miR-612對HCC干細胞特性的作用及機制，為miR-612作為治療HCC的候選靶標提供依據。

1 材料與方法

1.1材料 人HCC細胞系LM3、HepG2、Hep3B和人正常肝細胞系LO2均購自美國ATCC細胞庫；DMEM-F12培養基、RPMI1640培養基、胎牛血清(FBS)購自美國Gibco公司；逆轉錄試劑盒、SYBR實時熒光定量聚合酶鏈反應(qRT-PCR)試劑盒等均購自日本TaKaRa公司；miR-612 mimic、內參GAPDH和CD133、Nanog的引物由上海捷瑞生物工程有限公司設計合成；雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒購自北京索萊寶科技有限公司；……