GLYX-13通過NR2B-ERK-CREB信號通路改善氯胺酮麻醉后幼鼠認(rèn)知功能障礙①

鄭文婧 郄曉娟 鄭文芳

(衡水市人民醫(yī)院麻醉科，衡水 053000)

認(rèn)知功能障礙是手術(shù)患者麻醉后常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥，氯胺酮在抗焦慮、抗抑郁、小兒麻醉等方面有廣泛的應(yīng)用，研究發(fā)現(xiàn)氯胺酮呈時(shí)間依賴性和劑量依賴性促進(jìn)幼鼠神經(jīng)元變性、壞死和凋亡，可引起幼鼠認(rèn)知功能損害[1，2]。因此探討預(yù)防和治療由氯胺酮麻醉所致的認(rèn)知功能障礙在臨床上具有重要意義。GLYX-13為蘇氨酸-脯氨酸-脯氨酸-蘇氨酸多肽，可與N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體甘氨酸位點(diǎn)結(jié)合，增強(qiáng)小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力[3，4]，但其作用機(jī)制尚不清楚。NR2B-ERK-CREB信號通路與大鼠的學(xué)習(xí)、記憶的形成關(guān)系密切[5，6]。本文對GLYX-13對氯胺酮麻醉后幼鼠認(rèn)知功能障礙及海馬組織NR2B-ERK-CREB信號通路的影響進(jìn)行研究，探討GLYX-13改善氯胺酮麻醉后幼鼠認(rèn)知功能障礙的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康、清潔級、雌雄各半、3周齡、體質(zhì)量7～10 g、C57BL/6小鼠60只[北京華阜康生物科技股份有限公司，動(dòng)物許可證號：SCXK(京)2014-000]。

1.1.2主要試劑 鹽酸氯胺酮注射液(福建古田藥業(yè)有限公司，批號：H35020148)，GLYX-13(美國Sigma公司，批號：015M4731V)，Morris水迷宮、曠場實(shí)驗(yàn)(美國Noldus公司)，BCA法蛋白定量試劑盒、ECL發(fā)光液(美國Proteinech Group公司)，兔抗鼠NR2B多克隆抗體、兔抗鼠ERK多克隆抗體、兔抗鼠p-ERK多克隆抗體、兔抗鼠CREB多克隆抗體、兔抗鼠p-CREB多克隆抗體、辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG抗體、羅丹明熒光標(biāo)記山羊抗兔二抗(美國Cell Signaling Technology公司)。

1.2方法

1.2.1動(dòng)物分組及處理 將60只幼鼠根據(jù)隨機(jī)數(shù)字法分為對照組(NS組)、氯胺酮麻醉組(Ket組)、氯胺酮麻醉+GLYX-13組(Ket+GLYX-13組)，每組20只。Ket組和Ket+GLYX-13組小鼠每天腹腔注射30 mg/kg氯胺酮，間隔30 min重復(fù)一次，每天3次，共5 d[7]；……