結直腸癌患者MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白的表達水平及其與淋巴轉移的相關性

鐘璧璟，雷芹

安康市中醫醫院病理科，陜西 安康 725000

結直腸癌是一種常見的惡性腫瘤，近年來的發病率一直呈上升的趨勢[1]。在我國，結直腸癌發病率顯著上升，死亡率也很高，其中城市發病率高于農村，導致該病的因素很多，如有家族史、患有腸炎或者腸道腺瘤等[2]。MLH1、MSH2、MSH6、PMS2四項腫瘤標志物是該病相關的錯配修復蛋白，其如果發生突變會使得發生結直腸癌的概率大大增加[3]。如果結直腸癌篩查中及早發現，可以起到預防作用，有報道稱，檢測以上四項腫瘤標志物能夠為治療和預后提供指導[4]。淋巴轉移是結直腸癌主要的轉移方式，是否轉移決定手術操作和術后生存情況[5]。本文旨在研究結直腸癌患者MLH1、MSH2、MSH6、PMS2四項錯配修復蛋白表達水平、病理特點及其與淋巴轉移的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018年1月至2019年3月在安康市中醫醫院接受治療的結直腸癌患者105例作為研究對象。其中男性65例，女性40例；年齡30~85歲，平均(62.35±6.54)歲；病變位于左半結腸35例，有半結腸30例，直腸40例。本研究經醫院倫理委員會批準，患者及其家屬均簽署知情同意書。

1.2 觀察指標與檢測方法 所有患者均通經過兩名病理醫師診斷，收集所有患者的病理標本，采用4%福爾馬林固定，之后進行石蠟包埋和HE染色。石蠟切片為3~4μm，烤切片后脫蠟、水化后用PBS進行沖洗，利用過氧化物酶阻斷劑封閉內源性過氧化酶的活性，加入一抗。在室溫孵育后加生物素標記的二抗，再加鏈霉素抗生物素的過氧化酶溶液，進行孵育后向其中滴加DAB顯色，采用蘇木素再復染，最后常規脫水，透明和封片。MLH1、MSH2、MSH6和PMS2抗體均購自于福州邁新生物技術開發有限公司。MLH1、MSH2、MSH6和PMS2的陽性染色均定位于細胞核中，用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。采用免疫組化法檢測MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白的表達水平。

1.3 統計學方法 應用SPSS18.0統計軟件進行數據分析，計數資料兩兩比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 結直腸癌患者組織中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白的表達和缺失情況 105例結直腸癌患者中四項腫瘤標志物表達缺失者21例，總缺失率為20.00%，其中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2表達缺失者分別為5例(4.76%)、3例(2.86%)、3例(2.86%)和10例(9.52%)，見圖1。

2.2 結直腸癌患者組織中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白表達與病理的關系 結直腸癌患者中MLH1、MSH2、MSH6和PMS2的表達缺失與年齡、性別和腫瘤大小無關(P>0.05)；與腫瘤部位相關，右半結腸蛋白表達缺失明顯高于左半結腸和直腸，差異有統計學意義(P<0.05)。MSH2的表達缺失與發病位置和侵襲程度無關(P>0.05)；MSH6的表達缺失與侵襲程度和淋巴轉移無關(P>0.05)；PMS2的表達缺失與侵襲程度無關(P>0.05)，見表1。

圖1 結直腸癌患者組織中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2四項腫瘤標志物表達情況(×10)

表2 結直腸癌患者組織中MLH1、MSH2、MSH6和PMS2蛋白表達與病理特點的關系

3 討論

結直腸癌由多種生活因素、遺傳和疾病共同所致[6]。生活因素主要包括肥胖、高脂肪、高蛋白和低纖維的飲食習慣等，肉類食物的增加與結直腸癌的發生有明顯相關性[7]。臨床研究顯示，基因突變會導致家族性腺瘤性息肉病和遺傳性非息肉性結腸癌，其中遺傳性非息肉性結腸癌是由錯配修復蛋白(MLH1、MSH2、MSH6、PMS2)突變造成，腺瘤越大，癌變的可能性也越大[8-9]。多位學者研究發現，通過早期篩查錯配修復蛋白，評估患者的病情狀況，能降低癌變的發生[10]。結直腸癌的主要治療方式是放化療和手術治療，而淋巴轉移影響治療的效果，也影響患者的恢復[11]。因此，探討影響淋巴轉移的因素可以用來指導臨床治療，從而提高生存率。

本研究中，105例結直腸癌患者中四項腫瘤標志物表達缺失者21例，總缺失率為20.00%，其中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2表達缺失者分別為5例(4.76%)、3例(2.86%)、3例(2.86%)和10例(9.52%)，這些與彭芳等[12]研究結果一致。錯配修復蛋白是機體內的安全保證，其能夠維持遺傳物質的完整性和穩定性，在DNA修復過程中會涉及很多分子和酶[13]。MLH1與MSH2是其中最主要的參與者，這兩種蛋白一般會與其同源性的錯配修復蛋白組成二聚體來發揮作用，MLH1和PMS2，MSH2和MSH6分別形成兩種功能性的二聚體復合物[14-15]。MLH1和MSH2兩種蛋白是二聚體中的主導蛋白，而PMS2和MSH6是兩種配對蛋白，MLH1和MSH2發生突變會降解二聚體蛋白，導致主導蛋白和配對蛋白的表達缺失[16]。如果MLH1蛋白表達缺失，PMS2蛋白就會發生表達缺失，如果MSH2蛋白表達缺失，MSH6就會同時發生表達缺失[17]。采用免疫組化的法檢測以上四種蛋白，能夠為檢測基因和診斷疾病提供指導[18]。

本研究結果顯示，MLH1表達缺失與發病位置、侵襲程度和淋巴轉移顯著相關，左右半結腸明顯高于直腸，侵襲漿膜外的明顯高于黏膜和肌層，MSH2表達缺失與淋巴轉移相關，MSH6的表達缺失與發病位置相關，左右半結腸明顯高于直腸，PMS2表達缺失與與發病位置和淋巴轉移明顯相關，左右半結腸明顯高于直腸，表明蛋白表達缺失在左右半結腸和直腸處的發生存在差異，其與侵襲程度和淋巴轉移有一定關系。蛋白表達缺失者淋巴轉移少，以上表明蛋白表達缺失的結直腸癌手術后的預后要優于蛋白表達的結直腸癌手術[19]。

綜上所述，檢測MLH1、MSH2、MSH6、PMS2四種腫瘤標志物蛋白表達情況能夠判斷缺失類型，蛋白表達情況和病理特點與淋巴轉移明顯相關，錯配修復蛋白檢測判斷疾病病情、治療和預后有很重要的價值。