液相色譜-柱后衍生法測定果蔬中克百威等農(nóng)藥殘留量的前處理方法研究

宋 佳 高春芳 朱衛(wèi)芳 吳 婕 陳 悅 張建輝

（上海市青浦區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心 201700）

氨基甲酸酯類農(nóng)藥具有高效、選擇性強(qiáng)、易分解等特點(diǎn)[1]，主要用于水稻、棉花、果樹、蔬菜等農(nóng)作物的蟲害防治中，此類農(nóng)藥常見的有克百威、三羥基克百威、速滅威、甲萘威、異丙威、仲丁威等。這些農(nóng)藥雖不是劇毒、高毒農(nóng)藥，但具有一定的致癌性，會抑制人體內(nèi)膽堿酯酶的活性，從而影響人體內(nèi)神經(jīng)沖動的傳遞。因此，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部2002年199號公告中明確規(guī)定，在蔬菜、水果、茶葉、中草藥生產(chǎn)上，不得使用克百威等農(nóng)藥。

但近期在農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測中發(fā)現(xiàn)，個(gè)別不法商人在蔬菜、水果等農(nóng)作物生產(chǎn)中隱性添加克百威等農(nóng)藥，嚴(yán)重危及老百姓“舌尖”安全。因此，在果蔬上市前，加強(qiáng)對氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的檢測是確保農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的有效手段。目前，國家食品安全標(biāo)準(zhǔn)對克百威和三羥基克百威等農(nóng)藥殘留檢測的參考方法是NY/T 761-2008[2]，但該檢測方法在前處理中使用的有機(jī)試劑量多、污染大、環(huán)節(jié)多、操作繁瑣，且對檢測人員的技術(shù)要求高。近年來，國際上出現(xiàn)了一種用于農(nóng)產(chǎn)品檢測的快速樣品前處理技術(shù)，即QuEChERS（Quick快速、Easy簡便、Cheap低廉、Effective高效、Rugged穩(wěn)定、Safe安全）前處理方法，該方法有機(jī)試劑用量少、用時(shí)短、安全環(huán)保。在此背景下，筆者以草莓和生菜為試材，針對果蔬中克百威、三羥基克百威、速滅威、甲萘威、異丙威、仲丁威6種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留，從檢測準(zhǔn)確度（回收率）、精度（相對標(biāo)準(zhǔn)偏差）、檢測效率（用時(shí)）、對環(huán)境污染程度（有機(jī)試劑用量）、檢測人員操作技能要求（步驟環(huán)節(jié)）等方面，對NY/T 761-2008第3部分前處理方法和QuEChERS前處理方法進(jìn)行對比試驗(yàn)。現(xiàn)將相關(guān)試驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

試驗(yàn)材料包括乙腈、甲醇、二氯甲烷、氯化鈉、RO純水、克百威標(biāo)準(zhǔn)溶液、三羥基克百威標(biāo)準(zhǔn)溶液、速滅威標(biāo)準(zhǔn)溶液、甲萘威標(biāo)準(zhǔn)溶液、異丙威標(biāo)準(zhǔn)溶液、仲丁威標(biāo)準(zhǔn)溶液、NH2萃取柱、0.22μm濾膜、氨基甲酸酯分析試劑包、安捷倫Bond Elut QuEChERS試劑盒（鹽包、凈化管）。

試驗(yàn)設(shè)備包括液相色譜儀（安捷倫LC1260）配FLD檢測器、柱后衍生器（Pinnacle PCX）、勻漿機(jī)、離心機(jī)、氮吹儀、漩渦器及分析實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備。

1.2 加標(biāo)回收試驗(yàn)設(shè)計(jì)

分別按照NY/T 761-2008第3部分前處理方法和QuEChERS前處理方法的主要步驟進(jìn)行操作，對克百威、三羥基克百威、速滅威、甲萘威、異丙威、仲丁威按照添加含量分別為0.05、0.10、0.50 mg/kg三個(gè)水平進(jìn)行加標(biāo)回收測定。見表1。

2 結(jié)果與分析

2.1 加標(biāo)回收測定結(jié)果

由表2可知，針對克百威、三羥基克百威、速滅威、甲萘威、異丙威、仲丁威6種農(nóng)藥的3個(gè)不同添加含量，兩種前處理方法的添加回收率為91.0%～105.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在0～7.4%，均能滿足GB/T 27404-2008[3]附錄F的技術(shù)要求（當(dāng)添加量為0.1～1.0 mg/kg時(shí)，回收率為80%～110%，重復(fù)性＜15%；當(dāng)添加量為0.01～0.10 mg/kg時(shí)，回收率為60%～120%，重復(fù)性＜20%）。其中，QuEChERS前處理方法中，草莓和生菜兩種樣品中克百威、三羥基克百威、速滅威等6種農(nóng)藥的添加回收率≥98.0%（除生菜樣品中異丙威添加量為0.10 mg/kg時(shí)，回收率為95.0%）、重復(fù)性RSD＜3.0%（除生菜樣品中三羥基克百威添加量為0.05 mg/kg時(shí)，重復(fù)性RSD為4.4%）。由此說明，QuEChERS前處理方法的準(zhǔn)確度較NY/T 761-2008第3部分前處理方法更高。

表1 兩種前處理方法的主要步驟

表2 兩種方法前處理方法的加標(biāo)回收測定結(jié)果

2.2 運(yùn)行成效比較

從檢測結(jié)果精密度、試劑種類及用量、用時(shí)等方面對兩種前處理方法的單個(gè)樣本運(yùn)行成效進(jìn)行比較。由表3可知，NY/T 761-2008第3部分前處理方法使用了3種有機(jī)試劑，分別是乙腈、甲醇和二氯甲烷，總用量達(dá)62.5 mL；而QuEChERS前處理方法僅用了1種有機(jī)試劑（乙腈），用量僅為20 mL。在整個(gè)前處理用時(shí)上，NY/T 761-2008第3部分前處理方法在提取過程中需靜置30 min，凈化過程還需氮吹儀加熱、吹干、過氨基柱，該過程需20 min，全程需60 min;而QuEChERS前處理方法在提取過程中僅需離心機(jī)離心5 min，凈化過程需凈化管凈化離心5 min，全程僅需30 min，操作用時(shí)顯著縮短。

表3 兩種前處理方法的運(yùn)行成效比較

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，采用NY/T 761-2008第3部分前處理方法和QuEChERS前處理方法同時(shí)測定草莓和生菜樣品中克百威、三羥基克百威、速滅威、甲萘威、異丙威、仲丁威6種農(nóng)藥殘留，回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差結(jié)果都能滿足GB/T 27404-2008附錄F的技術(shù)要求，但更宜采用QuEChERS前處理方法。主要原因是：（1）QuEChERS前處理方法的準(zhǔn)確度和精密度更高。具體表現(xiàn)為回收率更高和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差結(jié)果更小，這是因?yàn)镼uEChERS前處理方法的步驟簡單，僅加入乙腈提取、凈化柱凈化、上機(jī)等環(huán)節(jié)，無需經(jīng)過氮吹儀加熱、過柱環(huán)節(jié)，在整個(gè)前處理過程中農(nóng)藥損失較小、對操作人員技術(shù)要求較低。（2）QuEChERS前處理方法所用的有機(jī)試劑量少，更符合經(jīng)濟(jì)、安全、環(huán)保的要求。（3）QuEChERS前處理方法用時(shí)少、效率高，達(dá)到了快速檢測的目的。因此，從檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度、檢測試劑用量和用時(shí)、安全環(huán)保等多方面綜合考慮，在測定果蔬樣品中克百威、三羥基克百威、速滅威、甲萘威、異丙威、仲丁威6種農(nóng)藥殘留時(shí)，采用QuEChERS前處理方法更適宜。

本試驗(yàn)研究僅在草莓和生菜樣品上進(jìn)行了加標(biāo)回收測定，對于在其他種類的果蔬樣品上是否會得到同樣的結(jié)論，還需進(jìn)一步試驗(yàn)驗(yàn)證。