黑木耳液體培養基及培養條件優化*

車星星，許 晶，李素玲，劉 虹

（山西省農業科學院食用菌研究所，山西 太原 030031）

黑木耳[Auricularia auricula(L.ex Hook.) Underw.]，別名木耳、細耳、云耳、黑葉、木蛾，隸屬于真菌界（Fungi） 真菌門（Eumycota） 異擔子菌綱（Heterobasidiomycetes） 木耳目（Auriculariales） 木耳科（Auriculariaceae） 木耳屬（Auricularia）[1-2]。質地柔軟、味道鮮美，是一種營養豐富的食用菌，有著“素中之葷”及“菌中瑰寶”之美譽[3-4]；同時，黑木耳也是一種價值很高的藥用菌，《本草綱目》中記載木耳治痔、性平、味甘、補氣血、止血活血，有滋潤、強壯、通便之功能[5]。近年來，隨著黑木耳產業設施化和集約化程度的提高，黑木耳栽培企業、合作社和菇農對黑木耳液體菌種培養技術的要求越來越高。通過對黑木耳液體培養基配方進行優化，并在最佳培養基的基礎上對培養基的pH、培養溫度、培養時間進行篩選，為進一步探討黑木耳的深層發酵工藝提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 供試菌種

供試菌種為黑15，由山西省農業科學院食用菌研究所提供[6]。

1.2 培養基

1.2.1 母種培養基

PDA 培養基。

1.2.2 液體培養基配方

配方1：馬鈴薯200 g、麥麩30 g、葡萄糖20 g、蛋白胨3 g、磷酸二氫鉀2.0 g、硫酸鎂1.0 g、維生素B 一片，水1 000 mL。

配方2：馬鈴薯200 g、木屑30 g、葡萄糖20 g、蛋白胨3 g、磷酸二氫鉀2.0 g、硫酸鎂1.0 g、維生素B 一片，水1 000 mL。

配方3：馬鈴薯200 g、玉米粉30 g、葡萄糖20 g、蛋白胨3 g、磷酸二氫鉀2.0 g、硫酸鎂1.0 g、維生素B 一片，水1 000 mL。

配方4：馬鈴薯200 g、棉籽殼30 g、葡萄糖20 g、蛋白胨3 g、磷酸二氫鉀2.0 g、硫酸鎂1.0 g、維生素B 一片，水1 000 mL。

配方5（CK）：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、蛋白胨3 g、磷酸二氫鉀3.0 g、硫酸鎂1.5 g，水1 000 mL。

馬鈴薯、麥麩、玉米粉、木屑、棉籽殼需開水煮沸30 min 后，用紗布過濾，取其過濾液使用。

1.3 試驗方法

取250 mL 三角瓶，分別盛裝各液體培養基100 mL，121℃高壓滅菌30 min，于冷卻室冷卻后，無菌條件下接入等量母種，靜置培養24 h 后置于23℃～30℃，搖床培養7 d。通過測定不同培養基配方、pH、培養溫度下黑木耳液體培養基菌絲生物量，確定最佳的液體培養基配方、pH、培養溫度。試驗設3 次重復。

1.3.1 pH 的測定

三角瓶液體培養基滅菌后，將液體培養基的pH分別調至3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0，接種培養7 d 后測定菌絲體生物量。

1.3.2 培養溫度

液體培養基接種后分別置于21℃、23℃、25℃、27℃、29℃、31℃下搖床培養7 d 后，測定菌絲體生物量。

1.3.3 菌絲體生物量測定方法

培養結束后，將每瓶發酵液用蒸餾水沖洗2 次，真空抽濾，收集菌絲體，在60℃下鼓風干燥至恒重，用電子天平稱重。

1.3.4 數據處理及統計分析

相關數據采用Excel 2003、DPS 9.0、LSD 法進行數據處理和統計分析。

2 結果與分析

2.1 不同液體培養基處理對黑木耳菌絲生長的影響

不同液體培養基對黑木耳菌絲生物量的影響見表1。

表1 不同液體培養基對黑木耳菌絲生物量的影響Tab.1 Effects of different liquid mediums on mycelial biomass of Auricularia auricula

由表1 可知，從培養液的顏色來看，配方1、配方2 和配方5 澄清，配方3 較差，而配方4 呈渾濁狀態；從菌絲球的顏色來看，配方1、配方2 和配方5 菌絲潔白，配方3 菌絲呈淺黃色，而配方4的菌絲呈污黃色；從菌絲球的均勻情況來看，配方1、配方2、配方3 和配方5 分布均勻，配方4 分布較均勻；從菌絲生物量來看，配方1 和配方2 的菌絲生物量差異不顯著，但與配方5（CK） 差異顯著，分別達1.63 g·100-1mL-1和1.59 g·100-1mL-1；配方4菌絲生物量最少，為1.14 g·100-1mL-1。

2.2 不同pH 液體培養基對黑木耳菌絲生長的影響

不同pH 的液體培養基對黑木耳菌絲生長的影響見表2。

表2 不同pH 液體培養基對黑木耳菌絲生物量的影響Tab.2 The effects of different pH on mycelial biomass of Auricularia auricula

從表2 可以看出，黑木耳液體菌種菌絲在pH 5.0～8.0 之間，均可以較好地生長。pH 7.0 時菌絲生長速度最快，菌絲生物量最多，達1.60 g·100-1mL-1，培養液顏色澄清、菌絲球生長勢強、大小均勻；pH 6.0 時菌絲生長情況較好，與pH 7.0 時相比差異不顯著；當pH＞7.0 時，菌絲生長速度隨著pH 的升高而減慢，生長勢逐漸減弱，生物量隨之降低，菌絲球也變得不再均勻；而當pH＜6.0 時，菌絲生長速度隨著pH 的降低而減慢，生長勢逐漸減弱，生物量隨之降低，菌絲球也變得不再均勻。

2.3 不同培養溫度對黑木耳菌絲生長的影響

不同培養溫度對黑木耳菌絲生長的影響結果見表3。

表3 不同培養溫度對黑木耳菌絲生物量的影響Tab.3 The effects of different temperature on mycelial biomassof Auricularia auricular

不同培養溫度對黑木耳菌絲的生長有很大的影響。從表3 可以看出，黑木耳菌絲生長的適宜溫度在25℃～27℃之間，而以25℃為最適宜溫度。25℃下，菌絲生長勢強、大小和分布均勻、菌絲生物量最高，達1.62 g·100-1mL-1，除與27℃相比差異不顯著外，與其他處理相比差異均達顯著水平。而當培養溫度高于27℃時，菌絲生長緩慢或不生長，生長勢也逐漸減弱，菌絲生物量隨之減少，溫度過高菌絲體活力下降，易感染雜菌。

3 結論與討論

在黑木耳液體培養過程中，不同的配方對黑木耳菌絲的生長影響各不相同。試驗結果表明，配方1 最適宜于黑木耳液體培養，菌絲生長速度快，長勢強，菌絲生物量高，與其他配方相比差異達顯著水平；配方2 雖不及配方1，但綜合性狀表現良好，除了與配方1 相比菌絲生物量差異不顯著外，與其他配方的差異均達顯著水平，也是值得參考的黑木耳液體培養基的配方。

不同pH 對黑木耳菌絲的生長的試驗結果表明，黑木耳液體菌種最適宜的pH 為6.0～7.0，偏酸或偏堿均不適宜黑木耳菌絲的生長。

黑木耳液體菌種的最適宜培養溫度為25℃～27℃，溫度過低或過高均可以使菌絲體活力下降，并容易感染雜菌。