Wnt信號通路在狼瘡性腎炎發(fā)病過程中的作用

許昊 周靜 雷尚文 王銘浩 張凱 王研 梁劉娜 周淑紅

【摘 要】目的：觀察分析Wnt信號通路在狼瘡性腎炎發(fā)病過程中的作用。方法：選取本院（在2018年2月-2019年2月）搜集的39例狼瘡性腎炎患者一般資料（均經(jīng)皮腎臟實施穿刺手術(shù)，作為實驗組），再搜集同期我院收治的38例腎癌患者癌旁正常組織的一般資料（作為對照組）。采用統(tǒng)計學(xué)分析兩組研究對象腎臟β一catenin mRNA水平（應(yīng)用實時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測方法）、β一catenin蛋白水平（應(yīng)用Western印跡法加以檢測）。結(jié)果：實驗組狼瘡性腎炎患者的腎臟β一catenin mRNA水平、β一catenin蛋白水平顯著高于對照組（P<0.05）。結(jié)論：Wnt信號通路可能參與狼瘡性腎炎的發(fā)病過程。

【關(guān)鍵詞】Wnt信號通路;狼瘡性腎炎;發(fā)病過程;作用

【中圖分類號】R593.242【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B【文章編號】1002-8714（2020）01-0157-02

系統(tǒng)性紅斑狼瘡的臨床表現(xiàn)多樣且病情嚴(yán)重程度不一，調(diào)查研究顯示，系統(tǒng)性紅斑狼瘡好發(fā)于女性人群[1]。系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)病機制較為復(fù)雜，會產(chǎn)生大量針對自身抗原的抗體，繼而使得組織器官受損。狼瘡性腎炎是系統(tǒng)性紅斑狼瘡累及腎臟組織的腎炎疾病，少數(shù)系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者以腎臟受累為首發(fā)表現(xiàn)。狼瘡性腎炎是導(dǎo)致系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者死亡的主要因素。狼瘡性腎炎的臨床表現(xiàn)較為復(fù)雜，主要表現(xiàn)在：其一，蛋白尿;其二，血尿;其三，高血壓等。目前來看，雖然深入了解系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病的具體發(fā)生機制，但是對于狼瘡性腎炎的進(jìn)展具體分子機制尚未深入了解。Wnt基因是癌基因，參與胚胎發(fā)育以及腫瘤發(fā)生的過程，除此之外，Wnt信號在腎臟疾病的發(fā)生和發(fā)展過程中也起著重大作用。有學(xué)者認(rèn)為，正常機體腎臟的Wnt信號是沉默的，但是腎臟損傷后Wnt信號被激活[2]。Wnt/β一catenin是重要細(xì)胞信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，Wnt糖蛋白與Fz蛋白受體有機結(jié)合后會在細(xì)胞表面聚集，繼而激活β一catenin聚集。最新研究結(jié)果顯示，Wnt/β一catenin通路可參與狼瘡性腎炎的發(fā)病過程。

1 資料與方法

1.1一般資料

實驗組有30例女患者、9例男患者;平均年齡為（55.3±4.8）歲;病理分型：8例III型、10例IV型、21例V型。對照組中有29例女患者、10例男患者;平均年齡為（57.7±3.4）歲。

1.2方法

應(yīng)用實時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測方法檢測β一catenin mRNA水平，收集細(xì)胞，漂洗PBS（磷酸鹽緩沖液），離心，將蛋白質(zhì)樣品加入凝膠緩沖液中混合均勻，煮沸，再將梳齒插入濃縮膠中，靜置0.5h，備用;在電泳槽內(nèi)加入緩沖液，用微量加樣器制備好蛋白樣品;將β一catenin抗體稀釋為1：3000，使用β一catenin灰度值表示相對表達(dá)水平。

應(yīng)用Western印跡法加以檢測β一catenin蛋白水平，將各組細(xì)胞加入裂解液中，混勻后，室溫下靜置5分鐘;將樣品分成有機相、水相，將水相轉(zhuǎn)移到新管中進(jìn)行下一步操作;加入無水乙醇，將溶液與沉淀物轉(zhuǎn)入吸附柱中;將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，嚴(yán)格按照cDNA說明書加以操作。

1.3觀察指標(biāo)

分析兩組研究對象腎臟β一catenin mRNA水平、β一catenin蛋白水平。

2 結(jié)果

實驗組狼瘡性腎炎患者的腎臟β一catenin mRNA水平、β一catenin蛋白水平顯著高于對照組（P<0.05），見表1。

3 討論

有關(guān)研究顯示，Wnt信號通路可分為兩種類型：其一，經(jīng)典信號通路（Wnt/β一catenin）;其二，非經(jīng)典信號通路[3]。β一catenin信號處于中心位置之中，當(dāng)Wnt信號通路被激活時，一些因素會使得殘基被糖原合成激酶磷酸化-3β活性被抑制，殘基被糖原合成激酶磷酸化-3β無法使得β一catenin降解。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)的β一catenin數(shù)量達(dá)到一定程度時間會與TCF（T細(xì)胞因子）/LEF（淋巴細(xì)胞增強因子）結(jié)合，繼而使得某些特定基因表現(xiàn)出增強或減弱。Wnt信號通路在腎臟胚胎組織發(fā)育初期產(chǎn)生重大作用，可積極參與腎小管的發(fā)育中。多項研究資料顯示，Wnt信號通路參與腎囊腫的形成之中。β一catenin活化在腎細(xì)胞癌的有關(guān)研究中受到一定程度抑制，因此表明Wnt/β一catenin在腎臟疾病中出現(xiàn)異常表達(dá)情況，但是在狼瘡性腎炎患者的發(fā)病過程中卻未見諸多報道。本文研究結(jié)果顯示實驗組狼瘡性腎炎患者的腎臟β一catenin mRNA水平、β一catenin蛋白水平顯著高于對照組（P<0.05）。有關(guān)學(xué)者在狼瘡性腎炎患者的發(fā)病過程中表明，某種因素激活Wnt信號通路，使得細(xì)胞外基質(zhì)可發(fā)生重建，在多次的修復(fù)與重建過程中，狼瘡性腎炎的形態(tài)學(xué)將發(fā)生變化。一項動物研究試驗表明，Wnt信號通路將參與狼瘡性腎炎大鼠的發(fā)病過程，大鼠的系膜細(xì)胞基質(zhì)增生是其最為明顯變化。Wnt信號通路升高后會誘導(dǎo)MMP（基質(zhì)金屬蛋白酶）表達(dá)，Wnt信號通路在細(xì)胞外基質(zhì)的重建過程中以及狼瘡性腎炎患者的發(fā)病過程中產(chǎn)生一定作用。在狼瘡性腎炎的有關(guān)模型研究中，Wnt信號通路被激活，將激活下游基質(zhì)金屬蛋白酶基因。

綜上所述，Wnt信號通路可能參與狼瘡性腎炎的發(fā)病過程。

參考文獻(xiàn)

[1] 孫鐵霖，李里，宮亮等.Wnt信號通路在狼瘡性腎炎發(fā)病過程中的作用[J].中國老年學(xué)雜志，2018，38（20）：4967-4969.

[2] 楊琳琳，程閏夏，林云等.Wnt信號通路在腎小球疾病發(fā)生發(fā)展中的作用機制研究進(jìn)展[J].山東醫(yī)藥，2017，57（39）：107-110.

[3] 王銘浩，周淑紅，許昊等.WNT信號通路在狼瘡腎炎中的異常表達(dá)[J].養(yǎng)生保健指南，2019，12（6）：357.