血清EGFL7蛋白與EB病毒標志物在鼻咽癌診斷中的價值

令狐穎，胡德峰，岳鳳娟，趙汝波，續 華

(貴州省人民醫院健康管理體檢中心，貴州 貴陽 550002)

鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma， NPC)是起源于鼻咽部上皮細胞的惡性腫瘤，他在我國南方地區的發病率呈逐年升高趨勢。亦是一種與遺傳密切相關的多基因參與、環境因素影響而形成的惡性腫瘤。近年來的研究發現，鼻咽癌的發生也與EB病毒(EBV)的感染十分相關[1]。盡管鼻咽癌的發病率在逐年升高，但鼻咽癌的發病機制仍然不是十分明確。目前臨床上關于鼻咽癌的診斷主要以針刺活檢進行病理學檢查為主。隨著分子生物學的不斷發展，對高危人群進行血清EBV-DNA及EBV抗體的檢測也可以作為早期診斷的重要方法。近年來，表皮生長因子樣結構域7(Epidermal growth factor-like domain 7, EGFL7)是內皮細胞分泌的特異性因子，EGFL7在內皮細胞生長、黏附及血管床結構改變中起到了重要的作用。近幾年來，多項研究發現EGFL7在喉癌、乳腺癌、肺癌、肝癌及胃癌等腫瘤類型中均高表達[2]。EGFL7作為一個新的腫瘤標志物，在肺癌、胃癌等方面的診斷、療效評估研究較多。然而其在鼻咽癌中的診斷作用報道較少。本研究通過對鼻咽癌患者腫瘤轉移前后血清中的EGFL7、EBV-DNA和血清病毒衣殼蛋白抗原IgA (viralcapsid antigen-IgA, VCA-IgA) 的水平進行檢測，探討其在鼻咽癌診斷中的意義。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取我院腫瘤科2015年3月～2017年4月在診斷并治療的鼻咽癌復發患者38例。所有患者均經過病理及鼻內鏡確診。其中未轉移的患者為20例，轉移的患者為18例。另選取我科健康體檢者20例，其中，男10例，女10例，年齡32～50歲，平均(36.5±5.4)歲，將其作為對照組。再選取我院耳鼻喉科治療的人群，且EBV抗體陽性，且未患鼻咽癌的患者30例，如鼻出血、眩暈、耳鳴、耳炎患者等，將其作為EBV陽性組。抽取每名研究對象外周血10 ml，分離血清后置于-70 ℃冰箱中冷凍并保存待檢。

1.2檢測方法：采用艾博抗上海貿易有限公司的ELISA試劑盒檢測VCA/IgA和EGFL7的表達，并采用北京普朗酶標儀進行定量分析，在450 nm波長處檢測吸光度值。結果判斷：VCA-IgA的測定值S/CO>1.0判定為陽性。EGFL7采用標準曲線計算得到定量結果。采用廣州達健生物科技有限公司的PCR試劑檢測EBV-DNA水平，擴增EBV基因的BamHI-W片段。當擴增結果>500拷貝/ml為EBV-DNA陽性。

2 結果

2.1各組EBV-DNA、VCA-IgA和EGFL7水平的比較：三組患者的EBV-DNA、VCA-IgA和EGFL7水平如表1所示。可見鼻咽癌組患者的EBV-DNA、VCA-IgA和EGFL7水平均顯著高于其余兩組，差異有統計學意義(P<0.05)。

2.2鼻咽癌轉移與未轉移之間EBV-DNA、VCA-IgA和EGFL7水平比較：對鼻咽癌轉移與未轉移患者之間的EBV-DNA、VCA-IgA和EGFL7水平進行了分析，結果顯示，有轉移的鼻咽癌患者，其血清EBV-DNA、VCA-IgA和EGFL7水平均顯著高于未轉移的患者，差異有統計學意義(P<0.05)。但未轉移組上述三個指標仍顯著高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表1 各組EBV-DNA、VCA-IgA和EGFL7水平比較

表2 鼻咽癌轉移與未轉移之間EBV-DNA、VCA-IgA和EGFL7水平比較

2.3三組患者血清VCA-IgA和EGFL7表達水平的相關分析：三組患者血清VCA-IgA和EGFL7表達水平的相關分析如表3所示，可見鼻咽癌組患者血清VCA-IgA和EGFL7表達呈顯著正相關，差異有統計學意義(P<0.05)，而EBV陽性組和對照組患者血清VCA-IgA和EGFL7表達則無明顯相關性，無統計學意義(P>0.05)。

表3 各組患者血清VCA-IgA和EGFL7表達水平的相關分析

3 討論

鼻咽癌是頭頸部常見的惡性腫瘤之一，其以低分化的鱗癌為主要病理類型。盡管鼻咽癌的臨床與基礎研究已有數十年，但其早期癥狀較為復雜，發生機制也較為復雜。EB病毒感染被認為是鼻咽癌發病的重要影響因素之一。當患者存在一些鼻咽癌的相關癥狀和臨床表現時，常采用EB病毒學檢測來評估患者是否需要進一步確診鼻咽癌。EB病毒血清學的檢測有助于指導臨床進一步的診斷及治療。VCA-IgA檢測現在仍然作為鼻咽癌血清學診斷的常規方法，并廣泛應用于鼻咽癌高危人群的篩查[3]。

鼻咽癌的生長、浸潤及轉移等生物學行為與腫瘤細胞自身無限增殖能力有關，需要從周圍組織中攝取足夠的營養物質來維持。在腫瘤生長的早期，營養物質可通過擴散等方式來維持腫瘤的生長，但隨著腫瘤體積的不斷增大，這種擴散供能的模式逐漸退化，轉而需要新生血管來維持腫瘤生長。

近年來，許多研究表明，新生血管的形成是腫瘤生長、浸潤及轉移的必要條件，腫瘤內新生血管的形成則為腫瘤細胞進入循環系統及遠處轉移提供了條件[4]。表皮生長因子樣結構域7是近年來新發現的一種分泌型蛋白，其結構中包含兩個表皮生長因子樣結構域 (Epidermal growth factor-like domain) 并在進化中高度保守。EGFL7被證實在胚胎血管發育中起到了重要的作用。近年來的研究發現EGFL7能夠顯著增強成纖維細胞及內皮細胞的運動遷移能力，其在胚胎組織中EGFL7高水平表達，在成熟組織中幾乎不表達，而在腫瘤等增殖性組織中呈高度上調[5]。

本研究通過對EBV感染常用檢測指標和新的腫瘤標志物結合分析發現，Egfl7蛋白在鼻咽癌的診斷和預后判斷中具有一定的臨床價值。通過研究發現鼻咽癌組患者的EGFL7、EBV-DNA和VCA-IgA和水平均顯著高于其余兩組。有轉移的鼻咽癌患者，其血清EGFL7、EBV-DNA和VCA-IgA水平均顯著高于未轉移的患者。并且在鼻咽癌患者中，其EGFL7與VCA-IgA的水平呈顯著正相關。孫琦等對鼻咽癌患者治療前后對比研究，認為檢測血漿EBV-DNA和VCA-IgA含量對監測鼻咽癌患者放療后的復發和轉移有重要的臨床意義[3-5]。

綜上所述，檢測血清中EBV-DNA和EGFL7蛋白在鼻咽癌的早期診斷，以及EGFL7蛋白判斷鼻咽癌是否轉移中有一定價值。EGFL7蛋白是否可以用來作為鼻咽癌的預后評估指標，還需進一步研究。