張忠子
(東北大學秦皇島分校,河北 秦皇島 066004)
紅菇 (Russula vinosaLindbled) 屬擔子菌門 (Basidiomycota)傘菌綱(Agaricomycetes)紅菇目(Russulaemetica) 紅菇科 (Russulaceae)。紅菇子實體質地鮮嫩,色澤艷麗,并且內含較多營養物質。根據相關報道可知,紅菇多糖的生物活性非常豐富,具備一定的免疫調節、抗腫瘤、抑菌以及抗氧化的作用[1]。紅菇被稱為“南方紅參”,其作用包括健胃強腎、脾肝補血等。若是兒童出現泄瀉癥狀,常會運用紅菇蕾燉湯的方式達到止瀉效果;婦女生產完會食用紅菇,以達到滋補之效。在烹飪時,若是添加一些紅菇,不但能夠發揮色彩搭配的效果,還能夠增加湯水的甜度,使得湯水的味道更佳。因為紅菇不但是天然味精,還是良好的天然色素,所以人們在飲食上往往會添加一些紅菇。紅菇的生長環境非常特殊,一年只生長一次,生長環境屬于典型的高溫、高濕環境。此外,紅菇生長的地域同樣非常特殊,僅僅在茂密椴木樹下的沃土區域生長,并且紅菇每天都會在相同的區域下生長,因此采菇者每年都能在相同的區域內采集紅菇。
現今,中國已經有很多專家針對紅菇生態、資源調研、紅菇運用以及分離純化等進行相關研究[2],并且在藥用植物抗疲勞的方向上也已經有較多的研究成果,如金香子等提出龍膽草提取物可以導致小鼠在進行45 min 的游泳運動之后,機體的肝糖原水平顯著提升,而乳酸水平則會顯著降低,可見龍膽草提取物能夠發揮一定的抗疲勞效果。但是,現今并未有相關研究證實紅菇的抗運動性疲勞效果。鑒于此,以小鼠為研究對象,分析紅菇子實體提取液的抗疲勞效果,主要監測指標包括小鼠的乳酸脫氫酶水平、負重游泳力竭時長、肝糖原水平等,針對紅菇子實體提取液的抗運動性疲勞作用進行系統性的分析,以期為野生紅菇的運用及推廣提供借鑒及參考。
雄性昆明小鼠,來源于昆明醫科大學動物研究中心。年齡4 周齡, 體重19.5 g~20.0 g。紅菇子實體干品為容縣野生紅菇干品。
試驗用試劑等級均為分析純,濃硫酸、75%乙醇、蒽酮、三氯甲烷、檸檬酸三鈉、冰醋酸、SOD 試劑。試驗設備:小鼠游泳缸,自制,規格50 cm×50 cm×40 cm;全自動細胞分析儀、FWl00 型高速萬能粉碎機,天津市泰斯特儀器有限公司;加樣器、YPl02N 型電子天平,上海精密科學有限公司;L420臺式低速自動平衡離心機,長沙湘儀離心機儀器有限公司;HH-S2 型雙孔數顯電熱恒溫水浴鍋,江蘇金壇市醫療儀器廠;抗凝管,由玉林市第二人民醫院提供;電磁爐、玻璃組織勻漿器、石英秒表、721型可見分光光度計,上海精密科學儀器廠;全自動生化分析儀,玉林第二人民醫院。
在80℃的環境下進行鮮菇的烘干粉碎操作,并且以料液比l∶20 的比例,在90℃恒溫水浴的條件下進行4 h 的水浴處理,之后進行15 min 的離心處理,轉速設置為4 000 r·min-1,取上清液,借助水浴蒸干的方式得到相應濃度的紅菇子實體提取液,即200 mg·mL-1、100 mg·mL-1。
針對小白鼠進行3 周的不間斷灌胃操作,最后1 次灌胃0.5 h 后,在3 組中分別選6 只小鼠,根據小白鼠體重的5%進行重量負荷的設定,并且在水深30 cm,水溫25℃~27℃,50 cm×50 cm×40 cm 的水槽中讓小白鼠進行游泳,1 個水槽內同時僅可容納4只小鼠。針對小白鼠的游泳情況進行分析,并且詳細記錄下來,小白鼠游泳力竭時間系小白鼠由入水到力竭沉入水底,并且10 s 內沒有浮出水面這個階段的時長。
針對小白鼠進行3 周的不間斷灌胃操作,最后1次灌胃0.5 h 后,在3 組中分別選6 只小鼠,在30℃的水槽中進行90 min 的游泳操作。游泳結束之后采取拔眼球取血的方式,獲得全血之后將其存儲在收集管內,并且進行血清的分離處理,進行相關參數的測定。考慮到試驗數據的可靠性,并且為了降低系統性誤差,借助全自動生化分析設備進行血清內LDH 水平的檢測,并將檢測結果詳細記錄下來,展開t-檢驗。
最后1 次灌胃0.5 h 之后,在3 組中分別選6 只小鼠,在30℃的水槽中進行90 min 的游泳操作。游泳結束后采取拔眼球取血的方式,之后在較短的時間內取出小白鼠的肝臟,并且利用生理鹽水進行處理,借助潔凈的濾紙吸干。精密稱定1.0 g 肝臟,往其中滴加5%三氯醋酸8 mL,借助玻璃組織勻漿器將其磨碎,并在轉速3 000 r·min-1的條件下進行15 min 的離心處理,之后利用上清液進行肝糖原水平的檢測,所運用的測定原理是蒽酮法。
紅菇提取液對小鼠負重游泳至力竭死亡時間的影響見表1。

表1 紅菇提取液對小鼠負重游泳至力竭死亡時間的影響Tab.1 The effect of Russula vinosa extract on the death time of mice from weight-bearing swimming to exhaustion
如表1 所示,不間斷地進行3 周不同劑量的紅菇子實體提取液灌胃處理之后,2 個試驗組的小鼠負重游泳時長都得到明顯延長,并且相較于對照組而言,低劑量組的負重游泳時長顯著延長,即存在統計學意義,但是高劑量組和對照組小鼠的負重游泳時長差異并不存在統計學差異[3]。
紅菇提取液對小鼠乳酸脫氨酶和肝糖的影響見表2。

表2 提取液對試驗小鼠乳酸脫氨酶和肝糖的影響Tab.2 Effect of extract on lactate deaminase and liver sugar in experimental mice
如表2 所示,不間斷地進行3 周不同劑量的紅菇子實體提取液灌胃處理之后,發現紅菇提取液高劑量組、低劑量組都可以使得機體肝糖原水平得到提升,并且相較于對照組而言,高劑量組小鼠的肝糖原水平得到顯著提升,即差異存在統計學意義,而低劑量組和對照組小鼠之間的肝糖原水平差異并不具備統計學價值[4-5]。此外,紅菇提取液高、低劑量組相較于對照組小鼠的乳酸脫氫酶水平,均有顯著降低,差異存在統計學價值(P<0.05)。
疲勞是一種非常復雜的生理機制,通常系指機體的各項生理功能已經不能持續維持在特定范圍內,或是不能維持特定的運動水平,進而導致生理或是心理狀態出現明顯的下降,這就會使得工作效率或是工作能力出現明顯的衰退。而疲勞出現的關鍵性原因是能源物質的大量消耗與代謝物質的不斷堆積。
強化運動耐力,能夠有效強化抗疲勞能力。游泳時長能夠體現動物實際運動的疲勞情況。而本研究能夠針對紅菇水提液是否可以延長負重小鼠的游泳時長進行直觀性的觀察及分析,根據最終研究數據顯示兩個受測試劑量組相較于對照組小白鼠來說,低劑量組(100 mg·mL-1)可以使得負重游泳時長得到顯著延長,差異存在統計學價值,可是高劑量組(200 mg·L-1)與對照組小白鼠間并不存在顯著差異(P>0.05)。
糖原的儲存量會對小白鼠的運動能力產生嚴重影響。根據研究數據可知,2 個受測試劑量組相較于對照組而言,其肝糖原水平較高,并且高劑量組小白鼠的肝糖原水平明顯較高,差異存在統計學價值。這就表示紅菇水提液可以借助增多能量物質的方式,提供能量,發揮抗疲勞效果[6-7]。在劇烈運動的情況下,僅借助有氧氧化的方式,能量依舊會處于供不應求的狀態。所以在無氧的條件下,肌肉借助糖原酵解的方式不但能夠獲得能量,還會形成大量乳酸,肌肉中出現更多的乳酸,疲勞的情況就會更加嚴重,而乳酸脫氫酶在乳酸代謝過程中發揮重要作用,而借助乳酸脫氫酶進行抗疲勞功能性食品的評估[8-9]。肌肉內的乳酸會在較短的時間內滲透至血液循環系統,進而導致血乳酸水平提高,進而使得肌乳酸和血乳酸水平處于相對平衡的狀態。此過程所需時間大概是5 min~15 min。2 個受測試劑量組的乳酸脫氫酶水平相對于對照組來說都明顯較低,并且差異存在統計學價值,這就代表紅菇水提液可以抑制肌乳酸的形成,進而發揮抗疲勞的效果。
分析灌胃小白鼠的血乳酸脫氫酶水平、持續浮水時長、肝糖原水平等參數,能夠對紅菇水提取液對小白鼠抗疲勞效果的研究提供可靠的參考依據。